人Bcl-2蛋白的基因克隆、表达及初步活性分析

目的 :以特定形式对高度疏水性的人Bcl 2 (hBcl 2 )蛋白进行可溶性表达 ,获得非疏水性hBcl 2蛋白并具备生物学结合活性 ,为进一步研究hBcl 2三维结构并在此基础上研发特异性小分子药物提供充足的蛋白样品。方法 :用PCR方法对hBcl 2基因进行克隆重组 ,插入原核表达载体pET2 8a(+)中。用WesternBlot和MALDI TOF生物质谱鉴定 ,采用荧光极化方法进行活性测定。结果 :重组hBcl 2在E .Coli中实现了高效、可溶性的融合表达 ,重组蛋白经纯化至电泳纯 ,具备了与Bcl 2家族Bak蛋白BH3功能域特异结合的能力 ,表明原核表达的重组hBcl 2具有较好的结合活性。结论 :成功地对重组hBcl 2蛋白进行了可溶性表达和活性测定。

肝癌患者血清中miR-106、miR181含量检测及其与肝癌组织中Bax、Bcl-2的关系研究

目的研究肝癌患者血清中miR-106、miR181含量及其与肝癌组织中Bax、Bcl-2的关系。方法将2011年1月~2014年1月在我院确诊并接受手术治疗的150例肝癌患者纳入研究的观察组,同期在我院体检的150例健康者纳入研究的对照组。采用real-time PCR的方法检测血清中miR-106、miR181含量,采用Western-blot的方法检测肝癌组织中Bax、Bcl-2的含量。结果观察组血清中miRNA-181b的相对含量低于对照组、miR-106的含量高于对照组;肝癌组织中Bcl-2的相对含量高于癌旁正常组织、Bax的含量低于癌旁正常组织;miR-106与Bcl-2含量呈正相关、与Bax含量呈负相关;miR-181与Bcl-2含量呈负相关、与Bax含量呈正相关。结论肝癌患者血清中miR-106、miR181含量显著异常,且与凋亡相关分子Bcl-2、Bax的含量相关,miR-106、miR181可能是调控肝癌细胞增殖和凋亡的潜在分子机制。

乳腺浸润性导管癌组织中Bag-1、Bcl-2、Bax的表达变化及意义

目的观察乳腺癌浸润性导管癌(IDC)组织中Bag-1、Bcl-2、Bax的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测85例IDC及其癌旁组织中的Bag-1、Bcl-2、Bax。结果 DC组织中Bag-1、Bcl-2、Bax阳性表达率分别为92.9%(79/85)、78.8%(67/85)、74.1%(63/85),癌旁组织中分别为58.8%(50/85)、58.8%(50/85)、67.1%(57/85)。IDC组织中Bag-1、Bcl-2阳性表达率与癌旁组织比较,P均<0.05。Bag-1表达与IDC肿瘤直径有关(P<0.05)。IDC组织中,Bag-1、Bcl-2表达呈正相关(r=0.512,P<0.05)。结论 IDC组织中Bag-1、Bcl-2高表达,二者在乳腺癌的发生发展中发挥作用。

乳腺癌发生发展相关蛋白研究进展

乳腺癌发生发展是一个复杂的病理过程,国内外诸多研究显示其可能与肿瘤细胞的多种相关基因产物表达水平及活性变化有关。本文结合国内外最新研究发现,将与乳腺癌发生发展相关的人Bcl-2相关X蛋白、Livin、人生存素、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂的研究进展情况做一综述。

热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的NCI-H446细胞随机分为A、B、C、D组,A组常规培养不进行特殊处理,B组将细胞消化后放置离心管中在42℃水浴中加热2 h,C组加入含2μg/mL顺铂的培养液4μg/孔,D组先经过水浴处理后加入顺铂。继续培养72 h后,采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,采用Western blot法检测各组细胞中的Bcl-2、Bax。结果 NCI-H446细胞凋亡率A组为4.25%±0.56%、B组为8.12%±0.64%、C组为10.02%±0.82%、D组为12.12%±0.49%,B、C、D组细胞凋亡率与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。NCI-H446细胞中Bcl-2、Bax相对表达量A组分别为0.89±0.002 8、0.18±0.001 8,B组分别为0.61±0.004 2、0.32±0.002 0,C组分别为0.30±0.003 6、0.48±0.001 4,D组分别为0.21±0.001 7、0.64±0.002 5。B、C、D组与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。结论热疗联合顺铂可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡,其机制与降低细胞中Bcl-2表达、升高Bax表达有关。