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人Bcl2基因真核表达载体的构建及其抗凋亡功能研究
被引量:
2
1
作者
史平安
徐小洁
+8 位作者
闫志风
范忠义
王涛
冯滢滢
梁迎春
李玲
郭靖
叶棋浓
吕朝晖
《生物技术通讯》
CAS
2015年第2期186-189,共4页
目的:构建带myc标签的Bcl2真核表达载体,获得myc-Bcl2融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增Bcl2编码序列,将其插入p CMV-myc载体,Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体...
目的:构建带myc标签的Bcl2真核表达载体,获得myc-Bcl2融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增Bcl2编码序列,将其插入p CMV-myc载体,Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体分别转染乳腺癌MCF-7细胞,通过流式细胞仪检测p CMV-myc-Bcl2重组质粒对细胞凋亡的影响。结果:双酶切和测序结果表明p CMV-myc-Bcl2真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后myc-Bcl2蛋白成功表达;流式细胞仪检测结果显示,myc-Bcl2明显抑制乳腺癌细胞系的凋亡。结论:构建了带myc标签的人Bcl2真核表达载体,为进一步研究Bcl2在细胞凋亡中的功能奠定了基础。
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关键词
人bcl2基因
克隆
细胞凋亡
下载PDF
职称材料
酵母双杂交技术筛选宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中FAM92A1-289关联蛋白
被引量:
5
2
作者
沈君豪
方娟
+3 位作者
郭兴荣
桂卉
涂汉军
阮绪芝
《山东医药》
CAS
北大核心
2016年第19期1-4,共4页
目的应用酵母双杂交技术从宫颈癌He La细胞c DNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选He La细胞c DNA文库中与FAM92A1-28...
目的应用酵母双杂交技术从宫颈癌He La细胞c DNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选He La细胞c DNA文库中与FAM92A1-289相互作用的蛋白质,用营养缺陷型培养基和X-a-Gal双重筛选实验进行筛选,对筛选结果进行生物信息学分析,对克隆重复率较高的蛋白进行回转验证,将β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆进行测序并分析。结果成功构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,可在酵母细胞中正常表达FAM92A1-289,且对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象。筛选出在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基及含X-a-Gal的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基上均能生长且β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆9个。经生物信息学分析发现4种蛋白重复率较高,即增殖细胞核抗原(PCNA)、半乳糖凝集素1(Galectin-1)、内质网高尔基体中间室标记物53(ERGIC-53)、重组人BCL2相关永生基因1(BAG1),并均与FAM92A1-289存在相互作用。结论利用酵母双杂交技术在Hela细胞c DNA文库中成功筛选出与FAM92A1-289相互作用的蛋白,为进一步研究FAM92A1-289的功能提供了新线索。
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关键词
FAM9
2
A1-
2
89
酵母双杂交技术
宫颈癌
HeLa细胞
增殖细胞核抗原
内质网高尔基体中间室标记物53
bcl
2相关永生
基因
重组
人bcl
2相关永生
基因
1
半乳糖凝集素1
FAM9
2
A1-
2
89
endoplasmic
reticulum-golgi
intermediate
compartment
marker
53
recombinant
human
bcl
2
-associated
athanogene
1
GALECTIN-1
下载PDF
职称材料
题名
人Bcl2基因真核表达载体的构建及其抗凋亡功能研究
被引量:
2
1
作者
史平安
徐小洁
闫志风
范忠义
王涛
冯滢滢
梁迎春
李玲
郭靖
叶棋浓
吕朝晖
机构
解放军总医院
军事医学科学院 生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2015年第2期186-189,共4页
基金
国家自然科学基金(81372161
31100604
+3 种基金
81472589)
北京市科技新星计划(Z141102001814055)
北京市自然科学基金(7132155)
军事医学科学院创新基金转化医学项目(ZHYX003)
文摘
目的:构建带myc标签的Bcl2真核表达载体,获得myc-Bcl2融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增Bcl2编码序列,将其插入p CMV-myc载体,Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体分别转染乳腺癌MCF-7细胞,通过流式细胞仪检测p CMV-myc-Bcl2重组质粒对细胞凋亡的影响。结果:双酶切和测序结果表明p CMV-myc-Bcl2真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后myc-Bcl2蛋白成功表达;流式细胞仪检测结果显示,myc-Bcl2明显抑制乳腺癌细胞系的凋亡。结论:构建了带myc标签的人Bcl2真核表达载体,为进一步研究Bcl2在细胞凋亡中的功能奠定了基础。
关键词
人bcl2基因
克隆
细胞凋亡
Keywords
bcl
2
cloning
apoptosis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
酵母双杂交技术筛选宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中FAM92A1-289关联蛋白
被引量:
5
2
作者
沈君豪
方娟
郭兴荣
桂卉
涂汉军
阮绪芝
机构
湖北医药学院基础医学院
出处
《山东医药》
CAS
北大核心
2016年第19期1-4,共4页
基金
湖北省自然科学基金资助项目(2012FFB02001)
文摘
目的应用酵母双杂交技术从宫颈癌He La细胞c DNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选He La细胞c DNA文库中与FAM92A1-289相互作用的蛋白质,用营养缺陷型培养基和X-a-Gal双重筛选实验进行筛选,对筛选结果进行生物信息学分析,对克隆重复率较高的蛋白进行回转验证,将β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆进行测序并分析。结果成功构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,可在酵母细胞中正常表达FAM92A1-289,且对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象。筛选出在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基及含X-a-Gal的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基上均能生长且β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆9个。经生物信息学分析发现4种蛋白重复率较高,即增殖细胞核抗原(PCNA)、半乳糖凝集素1(Galectin-1)、内质网高尔基体中间室标记物53(ERGIC-53)、重组人BCL2相关永生基因1(BAG1),并均与FAM92A1-289存在相互作用。结论利用酵母双杂交技术在Hela细胞c DNA文库中成功筛选出与FAM92A1-289相互作用的蛋白,为进一步研究FAM92A1-289的功能提供了新线索。
关键词
FAM9
2
A1-
2
89
酵母双杂交技术
宫颈癌
HeLa细胞
增殖细胞核抗原
内质网高尔基体中间室标记物53
bcl
2相关永生
基因
重组
人bcl
2相关永生
基因
1
半乳糖凝集素1
FAM9
2
A1-
2
89
endoplasmic
reticulum-golgi
intermediate
compartment
marker
53
recombinant
human
bcl
2
-associated
athanogene
1
GALECTIN-1
Keywords
yeast two-hybrid technique
cervical carcinoma
HeLa cell
proliferating cell nuclear antigen
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人Bcl2基因真核表达载体的构建及其抗凋亡功能研究
史平安
徐小洁
闫志风
范忠义
王涛
冯滢滢
梁迎春
李玲
郭靖
叶棋浓
吕朝晖
《生物技术通讯》
CAS
2015
2
下载PDF
职称材料
2
酵母双杂交技术筛选宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中FAM92A1-289关联蛋白
沈君豪
方娟
郭兴荣
桂卉
涂汉军
阮绪芝
《山东医药》
CAS
北大核心
2016
5
下载PDF
职称材料
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