抗人CD154单克隆抗体抑制免疫应答的实验研究

目的 :探讨抗人CD1 54单克隆抗体对免疫应答的抑制作用。方法 :①在体外进行混合淋巴细胞反应 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体对淋巴细胞增殖反应的影响 ;②在严重免疫联合缺陷 (SCID)鼠体内重建人的免疫功能后 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体在SCID小鼠体内对T细胞增殖的影响和对B细胞功能的影响。结果 :①双向混合淋巴细胞反应结果显示 ,抗体的 5个剂量组的 [3H] -TdR的掺入率均显著低于对照组 (均P <0 .0 1 ) ;②在输注人外周血单个核细胞第 6d、第 1 2d、第 2 1d ,实验组SCID鼠体内人T细胞占SCID鼠淋巴细胞的百分率均明显低于对照组(均P <0 .0 5) ;在输注人外周血单个核细胞后的第 1 2d、第 2 1d、第 31d ,实验组SCID鼠体内人IgG的含量明显低于对照组 (均P <0 .0 5)。结论 :抗人CD1 54单克隆抗体能够在体外抑制淋巴细胞的增殖 。

抗人CD154单克隆抗体的构建及免疫学特性分析

为进一步研究人CD15 4单克隆抗体在抑制动脉粥样硬化发生和发展中的作用 ,采用重组人CD15 4分子免疫BALB c小鼠 ,用杂交瘤技术制备抗人CD15 4单克隆抗体 ,并分析其免疫学特性。结果发现 ,(1)有 6c5、1b6、5d3共三株杂交瘤细胞株的培养上清与GST hCD15 4融合蛋白反应 ,与GST不反应。 6c5、1b6和 5d3培养上清效价分别为 1∶12 8、1∶2 5 6和 1∶6 4。 (2 )经Western bolt鉴定 ,在分子质量为 5 6kDa处有一抗原抗体结合的条带 ,而分子质量为2 6kDa处无特异性条带。证明三株杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体可以结合GST hCD15 4但不与GST反应 ,是特异性结合人CD15 4的单克隆抗体。 (3)流式细胞术发现 ,6c5细胞株分泌的单克隆抗体能与激活的人外周血T细胞结合。说明已构建的单克隆抗体是特异性针对人CD15 4的 ,为下一步用人CD15 4单克隆抗体抑制动脉粥样硬化的研究打下了基础。

DNA免疫制备抗人CD154单克隆抗体及其轻链可变区基因序列分析

采用pcDNA3 1 hCD15 4重组质粒DNA免疫BALB c小鼠 ,制备抗人CD15 4单克隆抗体 ,得到了能分泌针对人T细胞表面CD15 4分子的特异性单抗的杂交瘤细胞株 (7E8)。通过RT_PCR扩增 7E8单抗轻链可变区基因 ,并对其进行克隆、测序、DNA序列分析和氨基酸推导 ,结果显示轻链可变区基因和氨基酸序列完全符合小鼠Ig轻链的结构特征 ,为制备基因工程抗体并应用于临床打下了基础。