鹿角缩酮B与人CYP450主要亚型的对接研究

目的利用分子对接方法从人体内7种重要的P450酶筛选出与鹿角缩酮B亲和力强的药物代谢酶。方法通过SYBYL-X 2.0软件系统对鹿角缩酮B和7种CYP450酶进行模拟对接评价,按照对接打分分数的高低预测鹿角缩酮B-CYP450蛋白的亲和度;分析人类4种重要CYP450亚型与鹿角缩酮B的对接结果。结果对接打分表明CYP3A4、CYP11B2、CYP2D6、CYP2C9四种酶得到了3分以上的分数,预示酶与鹿角缩酮B二者空间结构上的互补性较高,而CYP1A2、CYP2E1和CYP2A6分数为负分,提示两者空间结合差。预测了人类4种重要CYP450亚型的活性位点,得到了4种重要CYP450亚型与鹿角缩酮B的作用模型的理论信息。结论鹿角缩酮B与CYP3A4的结合最牢固,与CYP2D6的结合较牢固并结合于酶的活性位点,故选择CYP3A4与CYP2D6为进一步的研究提供依据。

大鼠体外肝星状细胞活化过程中代谢活化相关CYP450亚型的变化（英文）

目的观察大鼠肝星状细胞(HSC)活化不同时期外源活化相关CYP450亚型——CYP1A1,CYP1B1,CYP1A2,CYP2B1/2和CYP2E1 mRNA表达水平的变化规律。方法分离大鼠HSC,接种在无包被塑料培养瓶中作为HSC自氧化活化模型,免疫细胞化学法检测不同培养时间HSC活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。实时定量RT-PCR法测定HSC自氧化激活的不同时期多种外源物活化相关CYP450亚型mRNA的表达变化。结果免疫细胞化学结果表明,在塑料培养瓶中培养1 d的HSC并不表达α-SMA,但随着培养时间的延长,α-SMA表达逐渐增强,培养11 d的HSC处于完全活化状态,能表达典型肌丝条纹和较强α-SMA,说明培养1,2,5和11 d的HSC分别处于未活化期、活化早期、中期和晚期。实时定量RT-PCR结果显示,在未活化的HSC(培养1 d)中,有CYP1A1,CYP1B1,CYP1A2,CYP2B1/2和CYP2E1的mRNA表达;在HSC活化早期(培养2 d),CYP1B1,CYP2B1/2,CYP2E1mRNA表达最高,分别为未活化HSC的2.1,1.6(P<0.05)和23.9(P<0.01)倍;而在活化中期(培养5d)及晚期(培养11 d),这些CYP亚型表达显著降低甚至测不出。然而,CYP1A1和CYP1A2在整个活化过程均持续下降。结论多种外源物活化相关CYP450亚型在HSC自氧化激活过程发生了明显改变,其中CYP1B1,CYP2B1/2和CYP2E1的mRNA表达在活化早期显著升高,这些变化可能与HSC的早期激活增殖有关。

大鼠肝星状细胞体外分离纯化方法的建立及多种CYP450亚型的表达

目的研究和比较肝脏星状细胞和肝实质细胞内多种细胞色素P450（CYP）亚型——CYP1A1、CYP1B1、CYP282、CYP2E1、CYP3A1 mRNA的表达及其水平，初步阐明肝星状细胞中与外源物活化相关的CYP酶系的基础表达和代谢特征。方法采用链霉蛋白酶胶原酶序贯灌流和Nycodenz密度梯度离心建立大鼠肝星状细胞体外分离和纯化方法；运用desmin免疫细胞化学技术和自发荧光共聚焦显微镜技术鉴定肝星状细胞纯度；并用糖原染色和过氧化物酶法分别测定肝实质细胞和枯否细胞的污染率；

白屈菜碱在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学及CYP450酶特异性抑制剂对其代谢的影响

目的研究白屈菜碱在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学及CYP450酶特异性抑制剂对其代谢的影响。方法将系列浓度的白屈菜碱与大鼠肝微粒体进行体外共孵育,采用HPLC法测定孵育液中剩余白屈菜碱的浓度,利用Graph Pad Prism 6.0软件进行数据拟合并计算酶动力学参数;分别将5种CYP450酶的特异性抑制剂与白屈菜碱进行共孵育,考察抑制剂对白屈菜碱代谢的影响,探讨参与其代谢的酶亚型。结果在大鼠肝微粒体中,白屈菜碱的Vmax为(3.52±0.18)mmol·min-1·kg-1;Km为(12.02±2.92)μmol·L-1;CLint为292.4 L·min-1·kg-1;CYP450酶特异性抑制剂酮康唑、α-萘黄酮、氟康唑和奎尼丁可以显著地抑制白屈菜碱的代谢,而噻氯匹定对白屈菜碱的代谢没有明显影响。结论白屈菜碱在大鼠肝微粒体中广泛代谢,CYP3A4、CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9是参与其代谢的主要代谢酶。

细胞色素P450 2C19亚型立体结构的同源模建

目的 在CYP2C、幔族中，最为重要的是CYP2C9和CYP2C19两个亚型，是代谢药物的重要的酶之一，目前还没有三维结构报道，为了能够从理论上研究酶对药物代谢的规律，我们同源模建2C19亚型结构，并以该结构进行了初步的底物结合的理论研究。方法 用BLAST方法搜索得到CYP2C19序列的合适模板：PDB code为1r90和1pq2的蛋白．然后进行序列比对。

补骨脂素的P450酶代谢亚型研究

目的:研究补骨脂素在肝微粒体P450酶中的代谢亚型。方法:根据补骨脂素与探针药物代谢亚型的竞争性代谢,用补骨脂素与非那西丁,奥美拉唑,氨苯砜,右美沙芬,氯唑沙宗五个探针药物混合,通过HPLC测定补骨脂素的代谢变化,来研究其代谢亚型。结果:结果显示补骨脂素对照组与失活组相比均存在显著性差异,证明补骨脂素在肝微粒体系中均能够被代谢;补骨脂素容易在肝脏内蓄积;酶亚型CYP2E1、CYP2D6参与补骨脂素的代谢。