MAPK通路在红托竹荪多糖诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡中的作用机制研究

目的:研究红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响,并基于丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路探讨其可能的作用机制。方法:体外培养MKN-45细胞,分为对照组,红托竹荪多糖低、中及高剂量组,采用终浓度分别为0、4、6及8 mg/mL的红托竹荪多糖作用于细胞48 h后,采用细胞计数法检测红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察不同浓度的红托竹荪多糖作用于人胃癌MKN-45细胞48 h后细胞形态学的变化。设立实验组的红托竹荪多糖终浓度为8 mg/mL,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染色流式细胞技术检测细胞的凋亡率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白质印迹法检测红托竹荪多糖作用胃癌细胞后p38蛋白激酶(p38)、磷酸化p38蛋白激酶(p-p38)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、C-JUN氨基末端激酶(JNK)、磷酸化C-JUN氨基末端激酶(p-JNK)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)和活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白的表达,即与3-磷酸甘油醛脱氢酶(GADPH)灰度值比值。结果:作用48 h后,不同浓度的红托竹荪多糖(4、6及8 mg/mL)对人胃癌MKN-45细胞增殖的抑制率分别为(8.27±5.99)%、(21.83±5.77)%和(56.95±5.21)%;在检测的浓度范围下,随着浓度的升高,红托竹荪多糖对MKN-45细胞增殖的抑制率逐渐升高。倒置显微镜下显示,经8 mg/mL的红托竹荪多糖作用48 h后,MKN-45细胞密度与对照组相比明显减少。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,实验组人胃癌MKN-45细胞凋亡率显著升高(P<0.05);细胞周期结果显示,实验组G_(1)期细胞比例明显减少(P<0.05),G_(2)期细胞比例明显增多(P<0.05),S期细胞比例明显减少(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,与对照组相比,实验组MKN-45细胞中cleaved Caspase-3的表达有升高趋势(P<0.05),Bcl-2的表达有降低趋势(P<0.05),p-P38/P38比值、p-ERK/ERK比值与p-JNK/JNK比值均低于对照组(P<0.05),上述差异均有统计学意义。结论:红托竹荪多糖在体外能抑制人胃癌MKN-45细胞增殖并诱导细胞凋亡,使肿瘤细胞阻滞在G_(2)/M期,其作用可能通过调控MAPK信号通路实现。

PPARγ激动剂对MKN-45胃癌细胞系增殖及MMP-7基因表达的影响

目的:研究过氧化物酶增殖因子激活受体γ(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptorγ,PPARγ)激活剂罗格列酮对人胃癌细胞系MKN45增殖和MMP7基因表达的影响。方法:不同浓度罗格列酮干预细胞后,用台盼蓝拒染法检测胃癌细胞株增殖活性,用RTPCR法检测MMP7基因表达情况。结果:罗格列酮作用24h明显降低MKN45细胞的存活率,与对照组比较有显著差异(P<0.05),细胞存活率随着药物浓度增加而降低;MMP7基因表达随着药物浓度增加而下降。结论:在胃癌细胞株MKN45中,罗格列酮与PPARγ作用而激活下级信号传导,抑制胃癌细胞的增殖,且下调MMP7基因的表达。

敲低膜联蛋白A5对人胃癌细胞系MKN-45增殖的作用

目的探讨膜联蛋白A5低表达对人胃癌MKN-45细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌MKN-45细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向膜联蛋白A5的siRNA和阴性对照siRNA脂质体转染法转染细胞,转染48 h后采用qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平进行抑制效率的鉴定,空白对照组不予任何处理。应用MTT、平板克隆形成法检测膜联蛋白A5低表达对胃癌MKN-45细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot法检测增殖核抗原PCNA和周期相关蛋白CyclinD1的表达。结果靶向膜联蛋白A5的siRNA转染后,胃癌MKN-45细胞中膜联蛋白A5的表达较阴性对照和空白对照组明显降低(P<0.05)。MTT和克隆形成实验可见siRNA干扰组细胞增殖活力和集落形成能力较阴性对照和空白对照组显著增高(P<0.05);流式细胞术显示细胞凋亡率无明显改变;PCNA和Cyclin D1的表达显著上调。结论膜联蛋白A5低表达能促进胃癌细胞的增殖。

Siglec-15对胃癌细胞系MKN-45增殖和凋亡作用的影响

目的探讨Siglec-15对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法免疫组织化学检测胃癌组织中Siglec-15的表达;收集胃癌细胞系检测细胞中Siglec-15的表达,慢病毒感染法构建Siglec-15低表达稳转细胞系(LV-sh-S15)和阴性对照组(LVNC),RT-qPCR和Western blotting实验验证慢病毒转染效率;CCK-8法检测MKN-45细胞系LV-NC组和LV-sh-S15组细胞增殖差异,细胞克隆形成检测Siglec-15对细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测两组细胞周期及凋亡变化;Western blotting检测凋亡相关蛋白及信号通路蛋白变化。结果免疫组织化学检测发现,相比胃息肉和胃癌早期标本,Siglec-15在胃癌中期标本中表达升高;检测胃癌细胞系中Siglec-15的表达发现,MKN-45细胞中Siglec-15的表达处于中等水平,慢病毒感染法成功构建Siglec-15低表达稳转细胞系;CCK-8和细胞克隆形成实验发现,相比LV-NC组细胞,LV-sh-S15组细胞增殖能力和细胞克隆率降低。流式细胞术和Western blotting发现,相比LV-NC组细胞,LV-sh-S15组细胞凋亡率升高,并且PI3K和AKT的磷酸化水平降低。结论在胃癌早期标本中Siglec-15的表达升高,敲低Siglec-15表达影响MKN-45细胞的增殖和凋亡水平,表明Siglec-15可以作为一种肿瘤标志分子,调控肿瘤进展。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡的研究

目的 :研究天花粉蛋白（ trichosanthin,TCS）对胃癌细胞的作用，探讨其治疗胃癌的可能作用机制。方法 :采用生长曲线、集落形成实验、 MTT法、电镜、 TUNEL染色和流式细胞仪等技术，研究 TCS对胃癌细胞 MKN－ 45的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果： TCS能够明显抑制胃癌细胞 MKN－ 45的生长和集落形成， 1μ g/ml和 0.1μ g/ml TCS作用 MKN－ 45后，细胞集落形成率分别为 (6.63± 1.31)％和 (14.68± 1.27)％，明显低于对照组的 (23.67± 2.76)％

Smac基因过表达对胃癌细胞株MKN-45化疗敏感性的影响

背景与目的:细胞凋亡异常是肿瘤细胞产生耐药性的关键因素之一。Smac(secondmitochondria-derivedactivatorofcaspases,Smac或称DIABLO)是新近发现的一种凋亡调节基因,在介导化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡中起重要作用。本研究旨在观察Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响。方法:采用脂质体GeneSHUTTLE-40介导的方法,将Smac基因转入胃癌细胞MKN-45,RT-PCR和Westernblot法检测癌细胞中Smac的表达;选用顺铂(1、5、10μg/ml)、丝裂霉素(0.1、1、10μg/ml)和姜黄素(10、20、40μmol/L)分别处理转染前后的胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄影,AnnexinV-FITC和碘化丙啶双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:同未转染对照组比较,转染外源性Smac基因后MKN-45细胞SmacmRNA和蛋白表达水平显著增高(P<0.01);各浓度顺铂、丝裂霉素和姜黄素处理24h后,细胞生长抑制率分别增加10.10%～23.80%(P<0.01)、10.01%～15.86%(P<0.01)、11.28%～22.12%(P<0.01),细胞明显变圆、折光增强、漂浮细胞增多,细胞凋亡率分别增加6.7%～20.2%(P<0.01)、5.4%～13.2%(P<0.01)、10.6%～20.1%(P<0.01)。结论:转染外源性Smac基因并使其在胃癌细胞中过表达。

金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞凋亡的影响

目的：评价金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植入胃癌MKN-45细胞的抑制作用.方法：50只裸鼠建立原位移植人胃癌MKN-45细胞模型,随机分为模型组,金龙蛇颗粒高、中、低剂量组和5-FU干预组.各组裸鼠予以相应药物实施干预.观察各组荷瘤裸鼠一般情况,肿瘤生长情况及抑瘤率.流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布及细胞凋亡情况.采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI）双标记染色法鉴别早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞.电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化.结果：金龙蛇颗粒高、中、低剂量组的抑瘤率分别为68.13%、55.94%和50.31%,呈剂量依赖效应,与5-FU干预组抑瘤率比较,差异无统计学意义.金龙蛇颗粒各剂量组肿瘤细胞凋亡率为22.81%～38.54%,亦呈剂量依赖效应,且肿瘤细胞主要被阻滞于G0/G1期.AnnexinV-FITC/PI双标记染色结果显示,金龙蛇颗粒各剂量组以早期凋亡细胞居多,5-FU干预组则以晚期凋亡细胞和坏死细胞居多.结论：金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞具有较好的抑制作用,促进MKN-45细胞凋亡可能是其抗肿瘤治疗的主要作用机制之一.

参芪抑瘤方药物血清对胃癌MKN-45细胞周期阻滞及抗侵袭转移的影响

目的 探讨不同浓度参芪抑瘤方药物血清对胃癌MKN-45 细胞周期阻滞及抗侵袭转移作用的相关机制.方法 60 只SPF 级Wistar 大鼠,随机分为对照组和参芪抑瘤方低、中、高剂量组,每组15 只.参芪抑瘤方低、中、高剂量组分别给予0.25、0.50、1.00 g 原药材/mL 药液灌胃,空白组给予等量饮用水灌胃,每日2 次,连续7 d,末次灌胃2 h 后取血,分离血清.MKN-45 细胞经不同浓度药物血清处理后,流式细胞术检测细胞周期,免疫组化检测COX-2、PTEN 蛋白表达.结果 药物血清干预后细胞G0～G1 期比例增加,S 期比例减少;药物血清可降低MKN-45 细胞COX-2 蛋白阳性表达率,升高PTEN 蛋白阳性表达率（P〈0.05）.结论 参芪抑瘤方药物血清阻滞细胞周期及抗侵袭转移作用可能与影响COX-2、PTEN 蛋白表达有关.

藤梨根提取物对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨太白山藤梨根提取物(Radix Actinidiae extractive,RAE)在体外对胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响。方法:用0.01-100μg/ml浓度范围内的RAE和胃癌MKN-45细胞共培养24、48、72、96小时,采用MTT法检测RAE对MKN-45细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对MKN-45细胞凋亡及细胞周期分布的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:RAE在体外能够显著抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,且呈现浓度和时间依赖性;RAE对胃癌细胞的作用表现为周期特异性,使细胞阻滞于G0/G1期,进一步诱导细胞凋亡。对照组凋亡率为0.53%,1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml浓度的RAE干预胃癌细胞48小时后均出现凋亡峰,细胞凋亡率分别为3.27%、8.97%、12.6%。DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,不同浓度RAE处理的细胞样品中均可看到梯形凋亡条带,并呈现浓度依赖性。结论:RAE在体外对人胃癌MKN-45细胞有显著的抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡作用,其作用机制可能是使胃癌细胞周期阻滞于G0/G1期。

丹参酮IIa诱导人胃癌细胞MKN-45凋亡及对端粒酶活性的影响

目的考察丹参酮IIa(tanshinone IIa,Tan IIa)诱导人胃癌细胞的凋亡作用,以及对端粒酶活性的影响。方法不同浓度TanⅡa处理人胃癌细胞株MKN-45后,显微镜下观察胃癌细胞形态变化,应用Annexin V/PI双重染色方法检测细胞凋亡比例,并用凋亡相关抗体检测通路情况,用RT-PCR以及TRAP-PCR法分别对胃癌细胞端粒酶基因hTert和端粒酶活性进行检测。结果TanⅡa处理胃癌细胞后,DAPI染色显示,细胞核内染色质聚缩,细胞核碎裂并有凋亡小体产生,提示TanⅡa诱导胃癌MKN-45细胞凋亡。Annexin V/PI双染结果显示,凋亡比例随化合物浓度提高而增加,40μM下晚期凋亡比例达到(45.02±6.48)%。凋亡相关蛋白的检测显示,PARP和Caspase-3活化,细胞色素C水平增加,而Caspase-8则无显著变化。同时TRAP-PCR结果显示,Tan IIa在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,并在40μM下显著抑制hTert基因的表达。结论 TanⅡa对人胃癌细胞具有明显诱导细胞凋亡作用,且可能通过激活内源性途径引起细胞凋亡。TanⅡa还可抑制端粒酶活性和hTERT基因表达,这些可能是其发挥抗癌作用的重要机制之一。

不同浓度苦参碱、大蒜素对人胃癌细胞株MKN-45杀伤作用的实验研究

目的:观察不同浓度苦参碱、大蒜素对人胃癌细胞株MKN-45体外生长的影响。方法:体外培养人胃癌细胞株MKN-45,分别用不同浓度的苦参碱、大蒜素处理,采用CCK-8法检测MKN-45细胞的生长情况。结果:不同浓度的苦参碱及大蒜素作用于MKN-45细胞后,对其增殖均表现出了明显的抑制作用,并表现出浓度与作用时长的依赖性,最高抑制值分别达到了96.82%和93.44%。结论:苦参碱及大蒜素可以抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,且与作用时间、剂量呈正相关。

过表达miR-26b抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖

目的构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对pc DNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pc DNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化。结果通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖。结论过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡中P53、Bcl-2、c-myc蛋白表达变化

目的 选用对天花粉蛋白敏感的胃癌细胞株MKN 45 ,研究天花粉蛋白抗肿瘤机制。方法 免疫组化法测定凋亡相关基因 (P5 3、Bcl 2、c myc)的表达变化。 结果 胃癌细胞MKN 45经天花粉蛋白 (1μg/ml,2 4、48h)处理后 ,凋亡相关基因P5 3、Bcl 2、c myc表达未出现显著性改变。经 5 μg/ml的天花粉蛋白处理 2 4h后 ,得到相同结论。但当MKN 45细胞经 5 μg/ml的天花粉蛋白处理 48h后 ,发现野生型P5 3蛋白表达增加 ,而Bcl 2、c myc蛋白表达未出现显著性改变。 结论 天花粉蛋白可诱导MKN 45细胞凋亡 ,可能与上调野生型P5 3基因的表达有关。

5-氟尿嘧啶气雾对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响

目的通过体外模拟5-氟尿嘧啶(5-Fu)腹腔气雾化疗环境,评价5-Fu雾化对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响。方法运用自主研发的气雾化疗仪将5-Fu雾化,体外模拟腹腔气雾化疗环境,对胃癌细胞进行处理,维持气雾环境压力为8mmHg,作用时间为30min,并设生理盐水雾化作为对照,处理后用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果 MTT结果显示,5-Fu气雾化疗组杀伤率显著高于生理盐水组[(31.13±3.51)%比(4.65±1.99)%,P<0.001];流式细胞结果显示,与生理盐水组相比,5-Fu气雾化疗组细胞凋亡率升高[(12.00±0.92)%比(2.65±0.52)%,P<0.001)],G1期细胞增多[(51.83±1.95)%比(36.41±2.33)%,P<0.001]、S期细胞减少[(16.72±2.36)%比(45.20±3.27)%,P<0.001],差异均有统计学意义。结论 5-Fu气雾能有效抑制胃癌细胞的增殖并诱导凋亡,使细胞阻滞于G1期,为气雾化疗的临床应用提供实验依据。

蒲公英提取物对MKN-45胃癌细胞株P53和Ki67表达的影响

目的检测蒲公英提取物对MKN45胃癌细胞的P53、Ki67两种蛋白的表达的影响,探求中草药蒲公英抗癌作用的依据。方法以小鼠血清药物学方法配制蒲公英提取物药液,对MKN45胃癌细胞进行培养传代,取处于对数生长期的同一代细胞加入药液血清,应用免疫组化(S-P法)检测p53、Ki67的表达状况。结果 4组中p53的表达分别为100%(5/5)、60%(3/5)、80%(4/5)和60%(3/5),所有含药组合并后其P53阳性表达率与对照组之间具有显著性差异(p<0.05),各含药组的Ki67阳性表达率均高于对照组,分别为87%、96%、97%、92%,但目前尚未发现它们之间具有显著性差异(p>0.05)。结论蒲公英可能有降低胃癌细胞p53的阳性表达的作用。

人参皂甙Rg3刺激淋巴细胞CD4上调以及对胃癌细胞MKN-45的杀伤作用

目的探讨人参皂甙Rg3对淋巴细胞的免疫刺激作用及其对胃癌细胞MKN-45的影响。方法采用梯度密度分离法分离正常人淋巴细胞,经人参皂甙Rg3刺激后流式细胞术检测人参皂甙Rg3对正常人淋巴细胞CD4表达的影响;用MTT法测定人参皂甙Rg3对MKN-45抑制作用;HE染色法观察人参皂甙Rg3诱导MKN-45的凋亡作用。结果人参皂甙Rg3促进正常人淋巴细胞CD4表达明显高于正常对照组(P<0.05);人参皂甙Rg3对MKN-45抑制率、凋亡率与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论人参皂甙Rg3具有刺激淋巴细胞CD4上调的作用以及抑制MKN-45细胞生长的作用。

盐酸伊利替康及氧化苦参碱对多耐药人胃癌细胞MKN-45的作用

目的:探讨盐酸伊利替康(CPT-11)及氧化苦参碱对裸鼠体内多药耐药人胃癌细胞MKN-45的抑制作用及其抗肿瘤作用的分子机制。方法:建立了多药耐药人胃癌MKN-45细胞的皮下移植瘤模型,随机分成0.9%氯化钠对照组、CPT-11治疗组、氧化苦参碱治疗组和CPT-11联合氧化苦参碱治疗组。每组裸鼠在胃癌组织移植7周后处死,并测算其肿瘤抑制率。采用末端脱氧核酸转移酶原位标记(TUNEL)和流式细胞仪法分析其凋亡指数。结果:CPT-11治疗组(10 mg.L^(-1)、20 mg.L^(-1))对多药耐药MKN-45细胞皮下移植瘤的抑制率显著增加,其凋亡率分别是(11.2±0.18)%和(12.2±1.65)%,两者比较无显著差异(P>0.05);氧化苦参碱联合CPT-11治疗组凋亡指数(AI)为(62.4±6.14)%,显著高于CPT-11治疗组和0.9%氯化钠时照组(1.27±0.11)%,(P<0.01)。结论:CPT-11可以增强氧化苦参碱对多药耐药细胞MKN-45的抑制作用,诱导裸鼠体内人胃癌细胞的凋亡;并能增强裸鼠体内胃癌对化疗的疗效和敏感性。

消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞黏附分子CD_(44)V_6表达的影响

目的 :观察消痰散结方对体外培养的 MKN- 45人胃癌细胞黏附分子 CD44 V6表达的影响 ,初步探讨了消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节。方法 :制备消痰散结药物血清 ,体外培养 MKN- 45人胃癌细胞 ,拟消痰散结方药物血清干预培养细胞 ,采用免疫组化 ABC法检测胃癌细胞中 CD44 V6的表达。结果 :中药组胃癌细胞中CD44 V6表达水平明显低于空白对照组。结论 :消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响黏附分子的表达 。

视黄酸及干扰素对胃癌细胞系MKN45中p16,p21,c-myc基因表达的影响

目的探讨全反式视黄酸及干扰素两种因子对胃癌MKN45细胞的影响.方法将视黄酸及干扰素同时加入胃癌细胞系MKN45中进行细胞培养,用MTT法测定细胞的生长状况,并通过Northern blot和免疫组化测定p16,p21及c-myc的表达情况.结果干扰素（IFN）协同全反式视黄酸（ATRA）可有效地抑制MKN45细胞生长,癌细胞经联合用药诱导后p16和p21基因的表达水平提高,c-myc基因表达水平下降.视黄酸受体RARα基因在MKN45细胞中呈低水平表达,经ATRA和IFN诱导后表达水平提高.结论 ATRA联合IFN诱导可调节p16和p21基因的表达水平,抑制胃癌MKN45细胞生长,这可能与细胞中RARα基因高水平表达有一定关系.

RAD001对胃癌MKN-45细胞生长影响的实验研究

目的探讨RAD001对胃癌细胞株MKN-45细胞生长的影响及可能作用机制。方法体外培养MKN-45细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数检测MKN-45细胞数目,流式细胞术检测细胞周期分布,Western-blot检测核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70S6K)、真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、S6蛋白表达及磷酸化情况。结果RAD001作用于MKN-45细胞24 h:RAD001对MKN-45细胞的生长产生抑制作用,抑制作用具有时间依赖性;MKN-45细胞细胞周期发生改变,停滞在G0-G1期细胞比例增加;MKN-45细胞的4E-BP1、p70S6K、S6无明显变化,phosphate-p70S6K、phosphate-S6表达缺失,phosphate 4E-BP1表达下降。结论RAD001是通过抑制mTOR下游通路阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节细胞周期以发挥抑制MKN-45细胞生长的作用。