VEGF基因沉默脂肪间充质干细胞对人MKN45胃癌细胞生长的影响

目的研究脂肪间充质干细胞(ADSCs)血管内皮生长因子(VEGF)基因沉默后对人MKN45胃癌细胞系体内生长的影响。方法采用siRNA技术沉默脂肪间充质干细胞(ADSCs)内VEGF基因。体外成功构建针对VEGF的siRNA表达载体和1个阴性对照,分为VEGF siRNA组、阴性对照组、空白对照组。Lipofectamine2000介导转染ADSCs,RT-PCR检测显示与阴性对照组、空白对照组相比,VEGF siRNA组ADSCs中VEGF表达显著降低,将上述3组处理后的ADSCs与MKN45胃癌细胞混合后接种裸鼠皮下,观察胃癌生长情况;通过CD34免疫组织化学法染色检测胃癌组织血管生成情况。结果阴性对照组和空白对照组的ADSCs在裸鼠体内可显著促进MKN45胃癌细胞的生长(P<0. 05),VEGF siRNA组ADSCs在裸鼠体内对MKN45胃癌细胞的生长无促进作用(P>0. 05);胃癌组织平均血管密度(MVD)结果为,阴性对照组和空白对照组分别为(10. 9±0. 64)个/视野及(10. 7±0. 50)个/视野,VEGF siRNA组为(5. 3±0. 36)个/视野,单纯MKN45组为(5. 1±0. 52)个/视野。VEGF siRNA组明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0. 05),与单纯MKN45组无明显差异(P>0. 05)。结论 ADSCs内VEGF基因沉默后VEGF明显降低,与MKN45胃癌细胞混合后接种对胃癌组织血管形成和胃癌生长无影响。

密点麻蜥调控SLC7A11/GPX4通路诱导胃癌MKN45细胞铁死亡的作用及机制

目的:基于SLC7A11/GPX4信号通路探讨密点麻蜥对人胃癌MKN45细胞发生铁死亡的影响。方法:选择SD大鼠制备含药血清,将MKN45细胞随机分为空白对照组(10%空白血清)、5-FU含药血清(10%)阳性对照组、密点麻蜥含药血清低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度组。CCK-8法检测MKN45细胞的存活率;Transwell法检测MKN45细胞的迁移及侵袭能力;激光共聚焦检测细胞内二价铁离子(Fe^(2+))水平;试剂盒检测细胞内LPO水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;qPCR法检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53 mRNA表达的影响;Western Blotting检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,密点麻蜥含药血清中、高浓度组MKN45细胞存活率、迁移及侵袭能力显著降低,Fe^(2+)、ROS水平显著升高,P53、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达显著降低,高浓度组LPO水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:密点麻蜥可能通过抑制SLC7A11/GPX4信号通路,同时促进细胞内Fe~(2+)、LPO的积累,从而诱导MKN45细胞发生铁死亡,抑制其增殖、迁移及侵袭。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡的研究

目的 :研究天花粉蛋白（ trichosanthin,TCS）对胃癌细胞的作用，探讨其治疗胃癌的可能作用机制。方法 :采用生长曲线、集落形成实验、 MTT法、电镜、 TUNEL染色和流式细胞仪等技术，研究 TCS对胃癌细胞 MKN－ 45的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果： TCS能够明显抑制胃癌细胞 MKN－ 45的生长和集落形成， 1μ g/ml和 0.1μ g/ml TCS作用 MKN－ 45后，细胞集落形成率分别为 (6.63± 1.31)％和 (14.68± 1.27)％，明显低于对照组的 (23.67± 2.76)％

Smac基因过表达对胃癌细胞株MKN-45化疗敏感性的影响

背景与目的:细胞凋亡异常是肿瘤细胞产生耐药性的关键因素之一。Smac(secondmitochondria-derivedactivatorofcaspases,Smac或称DIABLO)是新近发现的一种凋亡调节基因,在介导化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡中起重要作用。本研究旨在观察Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响。方法:采用脂质体GeneSHUTTLE-40介导的方法,将Smac基因转入胃癌细胞MKN-45,RT-PCR和Westernblot法检测癌细胞中Smac的表达;选用顺铂(1、5、10μg/ml)、丝裂霉素(0.1、1、10μg/ml)和姜黄素(10、20、40μmol/L)分别处理转染前后的胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄影,AnnexinV-FITC和碘化丙啶双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:同未转染对照组比较,转染外源性Smac基因后MKN-45细胞SmacmRNA和蛋白表达水平显著增高(P<0.01);各浓度顺铂、丝裂霉素和姜黄素处理24h后,细胞生长抑制率分别增加10.10%～23.80%(P<0.01)、10.01%～15.86%(P<0.01)、11.28%～22.12%(P<0.01),细胞明显变圆、折光增强、漂浮细胞增多,细胞凋亡率分别增加6.7%～20.2%(P<0.01)、5.4%～13.2%(P<0.01)、10.6%～20.1%(P<0.01)。结论:转染外源性Smac基因并使其在胃癌细胞中过表达。

奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长

目的:研究奥曲肽(octreotide,OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控作用,并探讨其作用机制。 方法:采用MTT比色分析法测定OCT10^(-2),10^(-3),10^(-4),10^(-5),10^(-6)g·L^(-1)对MKN45细胞生长的调控作用;采用流式细胞术分析OCT10^(-3)g·L^(-1))对MKN45细胞的周期分布的影响。 结果;OCT 10^(-2),10^(-3),10^(-4)g·L^(-1)对MKN45细胞的生长均有抑制作用,以lO^(-3)g·L^(-1)浓度的抑制作用最显著,为10.4％;10^(-3)g·L^(-l)这一浓度可诱导MKN45出现G0/G1阻滞,于加入OCT后6h开始,为(64±4)％,24h最显著,达(75±3)％,36h已消失;与对照组(7±1)％相比,24h G2/M期细胞比例亦减少,为(2±2)％,但OCT未改变亚二倍体细胞的比例。 结论:OCT可抑制人胃癌细胞株MKN45的生长,其作用机制之一是诱导细胞出现GO/G1阻滞。

藤梨根提取物对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨太白山藤梨根提取物(Radix Actinidiae extractive,RAE)在体外对胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响。方法:用0.01-100μg/ml浓度范围内的RAE和胃癌MKN-45细胞共培养24、48、72、96小时,采用MTT法检测RAE对MKN-45细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对MKN-45细胞凋亡及细胞周期分布的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:RAE在体外能够显著抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,且呈现浓度和时间依赖性;RAE对胃癌细胞的作用表现为周期特异性,使细胞阻滞于G0/G1期,进一步诱导细胞凋亡。对照组凋亡率为0.53%,1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml浓度的RAE干预胃癌细胞48小时后均出现凋亡峰,细胞凋亡率分别为3.27%、8.97%、12.6%。DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,不同浓度RAE处理的细胞样品中均可看到梯形凋亡条带,并呈现浓度依赖性。结论:RAE在体外对人胃癌MKN-45细胞有显著的抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡作用,其作用机制可能是使胃癌细胞周期阻滞于G0/G1期。

参芪抑瘤方药物血清对胃癌MKN-45细胞周期阻滞及抗侵袭转移的影响

目的 探讨不同浓度参芪抑瘤方药物血清对胃癌MKN-45 细胞周期阻滞及抗侵袭转移作用的相关机制.方法 60 只SPF 级Wistar 大鼠,随机分为对照组和参芪抑瘤方低、中、高剂量组,每组15 只.参芪抑瘤方低、中、高剂量组分别给予0.25、0.50、1.00 g 原药材/mL 药液灌胃,空白组给予等量饮用水灌胃,每日2 次,连续7 d,末次灌胃2 h 后取血,分离血清.MKN-45 细胞经不同浓度药物血清处理后,流式细胞术检测细胞周期,免疫组化检测COX-2、PTEN 蛋白表达.结果 药物血清干预后细胞G0～G1 期比例增加,S 期比例减少;药物血清可降低MKN-45 细胞COX-2 蛋白阳性表达率,升高PTEN 蛋白阳性表达率（P〈0.05）.结论 参芪抑瘤方药物血清阻滞细胞周期及抗侵袭转移作用可能与影响COX-2、PTEN 蛋白表达有关.

金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞凋亡的影响

目的：评价金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植入胃癌MKN-45细胞的抑制作用.方法：50只裸鼠建立原位移植人胃癌MKN-45细胞模型,随机分为模型组,金龙蛇颗粒高、中、低剂量组和5-FU干预组.各组裸鼠予以相应药物实施干预.观察各组荷瘤裸鼠一般情况,肿瘤生长情况及抑瘤率.流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布及细胞凋亡情况.采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI）双标记染色法鉴别早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞.电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化.结果：金龙蛇颗粒高、中、低剂量组的抑瘤率分别为68.13%、55.94%和50.31%,呈剂量依赖效应,与5-FU干预组抑瘤率比较,差异无统计学意义.金龙蛇颗粒各剂量组肿瘤细胞凋亡率为22.81%～38.54%,亦呈剂量依赖效应,且肿瘤细胞主要被阻滞于G0/G1期.AnnexinV-FITC/PI双标记染色结果显示,金龙蛇颗粒各剂量组以早期凋亡细胞居多,5-FU干预组则以晚期凋亡细胞和坏死细胞居多.结论：金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞具有较好的抑制作用,促进MKN-45细胞凋亡可能是其抗肿瘤治疗的主要作用机制之一.

不同浓度苦参碱、大蒜素对人胃癌细胞株MKN-45杀伤作用的实验研究

目的:观察不同浓度苦参碱、大蒜素对人胃癌细胞株MKN-45体外生长的影响。方法:体外培养人胃癌细胞株MKN-45,分别用不同浓度的苦参碱、大蒜素处理,采用CCK-8法检测MKN-45细胞的生长情况。结果:不同浓度的苦参碱及大蒜素作用于MKN-45细胞后,对其增殖均表现出了明显的抑制作用,并表现出浓度与作用时长的依赖性,最高抑制值分别达到了96.82%和93.44%。结论:苦参碱及大蒜素可以抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,且与作用时间、剂量呈正相关。

过表达miR-26b抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖

目的构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对pc DNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pc DNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化。结果通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖。结论过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡中P53、Bcl-2、c-myc蛋白表达变化

目的 选用对天花粉蛋白敏感的胃癌细胞株MKN 45 ,研究天花粉蛋白抗肿瘤机制。方法 免疫组化法测定凋亡相关基因 (P5 3、Bcl 2、c myc)的表达变化。 结果 胃癌细胞MKN 45经天花粉蛋白 (1μg/ml,2 4、48h)处理后 ,凋亡相关基因P5 3、Bcl 2、c myc表达未出现显著性改变。经 5 μg/ml的天花粉蛋白处理 2 4h后 ,得到相同结论。但当MKN 45细胞经 5 μg/ml的天花粉蛋白处理 48h后 ,发现野生型P5 3蛋白表达增加 ,而Bcl 2、c myc蛋白表达未出现显著性改变。 结论 天花粉蛋白可诱导MKN 45细胞凋亡 ,可能与上调野生型P5 3基因的表达有关。

5-氟尿嘧啶气雾对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响

目的通过体外模拟5-氟尿嘧啶(5-Fu)腹腔气雾化疗环境,评价5-Fu雾化对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响。方法运用自主研发的气雾化疗仪将5-Fu雾化,体外模拟腹腔气雾化疗环境,对胃癌细胞进行处理,维持气雾环境压力为8mmHg,作用时间为30min,并设生理盐水雾化作为对照,处理后用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果 MTT结果显示,5-Fu气雾化疗组杀伤率显著高于生理盐水组[(31.13±3.51)%比(4.65±1.99)%,P<0.001];流式细胞结果显示,与生理盐水组相比,5-Fu气雾化疗组细胞凋亡率升高[(12.00±0.92)%比(2.65±0.52)%,P<0.001)],G1期细胞增多[(51.83±1.95)%比(36.41±2.33)%,P<0.001]、S期细胞减少[(16.72±2.36)%比(45.20±3.27)%,P<0.001],差异均有统计学意义。结论 5-Fu气雾能有效抑制胃癌细胞的增殖并诱导凋亡,使细胞阻滞于G1期,为气雾化疗的临床应用提供实验依据。

胃泌素对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白表达的影响研究

目的探讨胃泌素(Gastin)对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45依药物干预进行分组,共分为三组,浓度10^(-6)mol/L的胃泌素组、胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)联合组、不加药物培养液的对照组,均培养24 h、48 h。培养结束后取其上清液,应用酶标仪检测光密度值,连续3次。采用放射免疫法(RIA)检测OPN的表达,应用MTT法测定人胃癌细胞MKN45增殖情况。结果浓度10^(-6)mol/L的胃泌素对人胃癌细胞MKN45的增殖较对照组及联合组有明显的促进作用,差异有显著性(P<0.05);在胃癌细胞株MKN45培养液中测出OPN,随着培养时间的增加,OPN表达也有所增加,胃泌素组较对照组及联合组比较,可明显增加MKN45中的OPN含量,差异有显著性(P<0.05)。结论胃泌素会促进人胃癌细胞MKN45增殖,并促使OPN的表达,提示胃泌素促人胃癌细胞MKN45作用与OPN表达有一定关系;而其受体拮抗剂丙谷胺则可以对这种促进作用产生明显抑制作用。

蒲公英提取物对MKN-45胃癌细胞株P53和Ki67表达的影响

目的检测蒲公英提取物对MKN45胃癌细胞的P53、Ki67两种蛋白的表达的影响,探求中草药蒲公英抗癌作用的依据。方法以小鼠血清药物学方法配制蒲公英提取物药液,对MKN45胃癌细胞进行培养传代,取处于对数生长期的同一代细胞加入药液血清,应用免疫组化(S-P法)检测p53、Ki67的表达状况。结果 4组中p53的表达分别为100%(5/5)、60%(3/5)、80%(4/5)和60%(3/5),所有含药组合并后其P53阳性表达率与对照组之间具有显著性差异(p<0.05),各含药组的Ki67阳性表达率均高于对照组,分别为87%、96%、97%、92%,但目前尚未发现它们之间具有显著性差异(p>0.05)。结论蒲公英可能有降低胃癌细胞p53的阳性表达的作用。

人参皂甙Rg3刺激淋巴细胞CD4上调以及对胃癌细胞MKN-45的杀伤作用

目的探讨人参皂甙Rg3对淋巴细胞的免疫刺激作用及其对胃癌细胞MKN-45的影响。方法采用梯度密度分离法分离正常人淋巴细胞,经人参皂甙Rg3刺激后流式细胞术检测人参皂甙Rg3对正常人淋巴细胞CD4表达的影响;用MTT法测定人参皂甙Rg3对MKN-45抑制作用;HE染色法观察人参皂甙Rg3诱导MKN-45的凋亡作用。结果人参皂甙Rg3促进正常人淋巴细胞CD4表达明显高于正常对照组(P<0.05);人参皂甙Rg3对MKN-45抑制率、凋亡率与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论人参皂甙Rg3具有刺激淋巴细胞CD4上调的作用以及抑制MKN-45细胞生长的作用。

胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45中骨桥蛋白表达的影响

目的研究胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45中骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45根据药物干预分为联合组[胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)]、胃泌素组[胃泌素(10^(-6)mol/L)]、对照组(不加药物培养液),培养24、48 h,获得上清液,采用酶标仪检测光密度值,并测定OPN水平和人胃癌细胞MKN45增殖水平。结果胃泌素组人胃癌细胞MKN45增殖OD值均明显高于联合组、对照组(P<0.05);在胃癌MKN45培养中检测出OPN,随着培养时间的延长,OPN表达增加,胃泌素组OPN水平明显高于联合组、对照组,联合组较对照组明显降低(均P<0.05)。结论胃泌素参与人胃癌细胞MKN45增殖过程,促使OPN表达,丙谷胺对此过程具有抑制作用,为胃癌治疗提供科学依据。

视黄酸及干扰素对胃癌细胞系MKN45中p16,p21,c-myc基因表达的影响

目的探讨全反式视黄酸及干扰素两种因子对胃癌MKN45细胞的影响.方法将视黄酸及干扰素同时加入胃癌细胞系MKN45中进行细胞培养,用MTT法测定细胞的生长状况,并通过Northern blot和免疫组化测定p16,p21及c-myc的表达情况.结果干扰素（IFN）协同全反式视黄酸（ATRA）可有效地抑制MKN45细胞生长,癌细胞经联合用药诱导后p16和p21基因的表达水平提高,c-myc基因表达水平下降.视黄酸受体RARα基因在MKN45细胞中呈低水平表达,经ATRA和IFN诱导后表达水平提高.结论 ATRA联合IFN诱导可调节p16和p21基因的表达水平,抑制胃癌MKN45细胞生长,这可能与细胞中RARα基因高水平表达有一定关系.

热疗联合顺铂对人胃癌细胞株MKN45的细胞毒作用

作者观察了热疗联合顺铂（ＤＤＰ）对人胃低分化腺癌细胞株的ＭＫＮ４５细胞毒作用：两者的协同作用；序贯效应。结果显示，４３℃３０分钟以上的单独热疗有直接的细胞杀伤作用即细胞毒作用；低于４３℃３０分钟的热疗与顺铂合用有明显的协同作用；热疗与顺铂同时应用的效果强于先热疗后化疗或先化疗后热疗。还对热疗联合顺铂的协同机理进行了初步的探讨。

盐酸伊利替康及氧化苦参碱对多耐药人胃癌细胞MKN-45的作用

目的:探讨盐酸伊利替康(CPT-11)及氧化苦参碱对裸鼠体内多药耐药人胃癌细胞MKN-45的抑制作用及其抗肿瘤作用的分子机制。方法:建立了多药耐药人胃癌MKN-45细胞的皮下移植瘤模型,随机分成0.9%氯化钠对照组、CPT-11治疗组、氧化苦参碱治疗组和CPT-11联合氧化苦参碱治疗组。每组裸鼠在胃癌组织移植7周后处死,并测算其肿瘤抑制率。采用末端脱氧核酸转移酶原位标记(TUNEL)和流式细胞仪法分析其凋亡指数。结果:CPT-11治疗组(10 mg.L^(-1)、20 mg.L^(-1))对多药耐药MKN-45细胞皮下移植瘤的抑制率显著增加,其凋亡率分别是(11.2±0.18)%和(12.2±1.65)%,两者比较无显著差异(P>0.05);氧化苦参碱联合CPT-11治疗组凋亡指数(AI)为(62.4±6.14)%,显著高于CPT-11治疗组和0.9%氯化钠时照组(1.27±0.11)%,(P<0.01)。结论:CPT-11可以增强氧化苦参碱对多药耐药细胞MKN-45的抑制作用,诱导裸鼠体内人胃癌细胞的凋亡;并能增强裸鼠体内胃癌对化疗的疗效和敏感性。

生长抑素类似物对胃癌细胞株MKN45生长的调控作用

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对胃癌细胞株MKN4 5生长的体外调节作用。方法 MTT法和细胞增殖核抗原 (PCNA)免疫细胞化学染色检测细胞增殖情况 ,RIA法测定表皮生长因子 (EGF)、转化生长因子 -α(TGF -α)的含量。结果 奥曲肽对胃癌细胞生长有抑制作用 ,以 1× 10 -6mol/L浓度最明显 ,并能抑制胃癌细胞合成EGF、TGF -α。结论 奥曲肽对胃癌生长具有负性调控作用 。