人OX40转基因细胞株的建立及其对树突状细胞的促分化作用

应用RT PCR方法 ,从PHA活化的扁桃体T细胞的mRNA中 ,扩增获得编码人OX4 0分子的cDNA ,并将其克隆到pMD18 T载体 ,经PCR、酶切和测序鉴定确证。进而构建pcDNA3 1 OX4 0重组真核表达载体 ,脂质体法转染L92 9细胞 ,经G4 18筛选 ,获得能稳定高表达OX4 0分子的细胞株。经OX4 0 FITC单抗标记和FCM检测 ,阳性表达率为 89 1%。转基因细胞在可溶性CD4 0L共存条件下 ,与未成熟DC共育 ,能促进DC的进一步分化成熟 ,使DC膜分子CD4 0、CD86和CD83呈上调性表达。

重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验

目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础。方法:根据基因库公布的人OX40和hIgG1 Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中。随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体。再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出最佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40Ig基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量。结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确。重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞。得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为最佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达。结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白。

ACS患者血清sOX40L检测及意义

研究显示,炎症可能通过多种途径和一系列病理生理变化影响急性冠状动脉综合征（ACS）的发生。人OX40配体（OX40L）可能通过参与炎症的免疫应答过程参与ACS的发病。