稳定表达hSPRY/Luc的人膀胱癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立稳定共表达人sprouty2(hSPRY2)基因和萤光素酶报告基因(luciferase,Luc)的J82人膀胱癌细胞株,并建立其裸鼠皮下移植瘤模型。方法通过PCR扩增hSPRY2及Luc全长基因,并分别构建慢病毒表达载体pCDH-hSPRY2和pLVX-Luc,包装慢病毒。用两种病毒上清同时感染人膀胱癌J82细胞,经嘌呤霉素、G418筛选出单克隆细胞株;采用细胞活体成像、免疫荧光细胞化学染色、Western blot法检测hSPRY2和Luc基因在单克隆细胞株中的表达。J82-hSPRY2/Luc细胞皮下接种BALB/c裸鼠建立移植瘤模型,通过活体成像检测肿瘤生长情况。结果筛选出J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌细胞株,并通过活体成像、免疫荧光染色和Western blot验证了hSPRY2和Luc基因的共表达;通过活体成像动态观察到裸鼠皮下移植瘤的生长情况。结论成功建立了稳定共表达hSPRY2和Luc基因的J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌细胞株以及可用于活体成像检测的裸鼠皮下移植瘤模型。

过表达Sprouty2分子促进HEK293T细胞增殖与存活

目的构建表达人Sprouty 2(SPRY2)基因的重组表达载体pDC315/hSPRY2,转染人胚肾(HEK)293T细胞表达目的蛋白,初步探讨其对HEK293T细胞增殖与存活的影响。方法构建hSPRY2重组腺病毒表达载体,体外转染HEK293T细胞,以Western blot法检测目的蛋白的表达,以CCK-8法检测SPRY2对HEK293T细胞增殖或去血清条件下细胞存活的影响。结果成功构建重组表达载体pDC315/hSPRY2,在转染的HEK293T细胞中检测到目的蛋白hSPRY2的表达,转染pDC315/hSPRY2组HEK293T细胞的增殖率及存活率均明显高于对照组即转染pDC315/EGFP组(P<0.05)。结论成功构建了hSPRY2重组表达载体,过表达hSPRY2可促进HEK293T细胞的增殖与存活。