砷在体外对人T淋巴细胞和Jurkat T细胞系的生长抑制作用

目的:通过三氧化二砷在体外对人 T淋巴细胞生长的影响 ,探讨三氧化二砷的免疫毒性和免疫抑制作用的机制。 方法 :应用正常人外周血 T细胞和人 Jurkat T细胞作为体外实验模型 ,观察不同浓度 (0 .5～ 10 0μM)三氧化二砷对正常人淋巴细胞和人 Jurkat T细胞的生长影响 ,并用电镜观察三氧化二砷对人 Jurkat T细胞的形态学改变。结果 :体外实验结果显示 ,三氧化二砷在 0 .5～ 10 0 μM浓度范围对正常人 T细胞和人 Jurkat T细胞的生长有明显的抑制作用 ,并随着三氧化二砷的浓度增高而抑制作用增强 ,呈现为剂量 -反应关系。三氧化二砷对正常人 T淋巴细胞和人 Jurkat T细胞的 IC50 分别为 8.0 5 μM和 8.9μM。电镜观察结果提示 ,三氧化二砷 (5 μM,2 4 h)处理 Jurkat T细胞 ,导致较多细胞出现细胞体积缩小 ,细胞核内染色质浓集于核膜内面成团块状 ,或染色体断裂成碎块状 ,或胞核固缩边缘化等典型的凋亡细胞特征性形态改变。存活的部分细胞线粒体增生 ,提示细胞功能活跃。同时 ,见到许多细胞浆内有空泡形成。结论 :三氧化二砷在体外能明显地抑制人 T淋巴细胞生长 ,这种生长抑制作用的机制之一是诱导细胞凋亡 。

IFN-γ和糖皮质激素对哮喘病人T淋巴细胞中的TGF-β的作用

目的:探讨C D4+TG F-β,C D8+TG F-β在哮喘发病机制中的作用,了解IFN-γ和糖皮质激素对其的影响。方法:采用Ficoll-H ypague密度梯度离心及贴壁培养法对18例哮喘患者和10例健康对照者外周血单个核细胞进行分离,纯化后,加入地塞米松及IFN-γ培养24h,加入PM A,莫能菌素,艾罗霉素培养4.5h,促使细胞内细胞因子聚集于高尔基体,取培养上清中的淋巴细胞经流式细胞仪检测分析C D4+T、C D8+T淋巴细胞及其细胞内细胞因子TG F-β表达率。结果:C D4+TG F-β、C D8+TG F-β及C D4、C D8细胞内总TG F-β检测结果的比较,哮喘组C D4+TG F-β(15.50±0.15)%、C D8+TG F-β(19.34±0.18)%,与正常对照组(9.57±0.16)%、(13.49±0.26)%比较,显著增高(均P<0.05);加入地塞米松培养的哮喘组C D4+TG F-β,C D8+TG F-β无显著变化(P>0.05),加入IFN-γ培养的哮喘组C D4+TG F-β(7.61±0.09)%、C D8+TG F-β(9.82±0.19)%的变化显著降低(均P<0.05),C D4、CD8细胞内总TG F-β哮喘组(32.42±1.17)%比正常组(20.53±1.02)%显著增加(P<0.05),加地塞米松后无显著变化(P>0.05),加IFN-γ后(16.85±0.14)%,显著降低(P<0.05)。结论:哮喘急性发作期有C D4+TG F-β、C D8+TG F-β升高;地塞米松不能降低哮喘气道重塑;IFN-γ可通过抑制TG F-β的分泌治疗哮喘,降低哮喘气道重塑。

叶酸对人T淋巴细胞性白血病细胞体外的作用

目的探讨叶酸对人T淋巴细胞性白血病细胞株(CEM)细胞的作用。方法1.四氮甲基唑蓝(MTT)法检测叶酸不同浓度.不同作用时间对CEM细胞增殖影响;2光镜下观察不同浓度叶酸作用于CEM细胞24、48、72 h细胞形态变化;3.流式细胞术检测叶酸持续作用于CEM细胞48 h细胞凋亡率、细胞周期分布及细胞表面凋亡相关蛋白Bcl-2、C-myc表达;4.DNA 电泳分析凋亡细胞DNA片段化的生化改变;5.MTT法检测叶酸对甲氨蝶呤(MTX)抗肿瘤作用影响。结果1叶酸对CEM 的增殖有明显抑制作用,在(0 4～3.0)×10-4μg/L时抑制作用最明显,抑制率30%～40%;2.叶酸分别作用于CEM细胞24、48、72 h后,光镜下可见CEM细胞出现典型的细胞凋亡各阶段的变化,在浓度为(0 2～6.0)×10-4 μg/L均可见到凋亡细胞, 尤其在(0 4～3.0)×10-4 μg/L凋亡率较高;3流式细胞术分析,叶酸浓度为3 0×10-4 μg/L时诱导凋亡作用最强,凋亡率为6.19%,CEM细胞经叶酸处理后细胞周期无明显变化规律,但叶酸作用于CEM细胞48 h,在Pl荧光的直方图上可见凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰,细胞表面凋亡相关蛋白Bcl-2、C-myc表达率均明显下降;4.CEM细胞经0 4×10-4 μg/L和3.0×10-4 μg/L 叶酸处理48h,提取DNA电泳,可见典型的梯状条带;5.叶酸在浓度为(0.2～12.0)×10-4 μg/L

共刺激分子4-1BBL和B7-1对人T淋巴细胞的协同激发作用

目的 :探讨 4 1BBL和B7 1这 2种共刺激分子在人外周血T淋巴细胞活化、增殖中的作用和机制。方法 :采用免疫磁珠阴性选择方法分离纯化人外周血T淋巴细胞 ;单向混合淋巴细胞反应 (MLR)分析共刺激分子对T细胞的激发作用 ;3H TdR掺入法测定细胞增殖 ;免疫荧光标记和流式细胞仪表型分析 ;ELISA检测细胞因子。结果 :经免疫磁珠阴性选择分离获外周血单个核细胞中的T细胞纯度 >90 %;人多发性骨髓瘤细胞株 (XG细胞 )转染 4 1BBL和B7 1cDNA后 ,细胞膜表面能稳定高表达这 2个分子 ,4 1BBL和B7 1转基因细胞也均能使同种异体T细胞发生活化、增殖、存活时间延长和介导细胞因子IL 2的分泌 ,且 2种共刺激分子具有一定的协同效应。结论 :4 1BBL和B7 1分子具有赋予XG细胞对T细胞的体外激发、促增殖和分泌IL 2的作用 ,4 1BBL和B7 1分子能产生协同效应。

抗人胸腺细胞免疫球蛋白与抗人T淋巴细胞免疫球蛋白体外淋巴细胞杀伤效价的比较

目的探讨相同浓度下抗人胸腺细胞免疫球蛋白（ATG）与抗人T淋巴细胞免疫球蛋白（ALG）杀伤淋巴细胞的效价。方法将相同浓度的ATG和ALG倍比稀释,对正常受试者外周血淋巴细胞进行淋巴细胞毒试验（CDC）,用流式细胞仪进行相关检测。结果体外淋巴毒试验中,ATG和ALG对6名健康志愿者外周血淋巴细胞的杀伤作用随着稀释滴度的增加逐渐下降。ATG及ALG滴度为1∶1时对淋巴细胞杀伤比率分别为54.06%～82.49%和38.06%～70.38%;ATG在1∶128时杀伤比率〈10%,ALG在1∶64时杀伤比率〈10%。ATG和ALG对外周血T淋巴细胞杀伤差异无统计学意义（P〉0.05）,对B淋巴细胞杀伤差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ATG和ALG均可显著清除正常人外周血淋巴细胞。相同浓度下,ATG的效价大约是ALG的2倍。ATG较ALG有更强的清除B细胞的作用。

黄芪注射液对消化道恶性肿瘤病人T淋巴细胞的影响

目的探讨黄芪用于消化道恶性肿瘤免疫治疗的临床价值。方法利用非特异性酸性酯酶染色法测定研究人群的T淋巴细胞在用药前后的含量变化。结果使用黄芪注射液后 ,患者血中白细胞总数明显上升 ,T细胞的酯酶活性增加。结论黄芪有促进机体免疫的功效。

注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体在肾移植患者体内的药动学与药效学

目的研究注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在肾移植患者体内的药动学和药效学。方法 16名肾移植患者随机分配到低、高(0.2,0.1 mg.kg-1)2个剂量组,用酶联免疫吸附法检测受试者血清中WuTac和人抗鼠抗体(HAMA)的浓度,评估该药物的药动学行为特征;通过流式细胞仪,检测全血中T细胞表面CD25结合情况,评判其药效学。结果低、高2个剂量组的主要药动学参数:T1/2分别为(51.41±16.24)(,59.53±24.96)h;AUCss分别为(2.28±0.35)(,5.13±1.53)mg.d.L-1;AUC0-t分别为(8.63±1.87)(,19.16±9.01)mg.d.L-1;AUC0-∞分别为(9.11±2.28)(,21.03±10.88)mg.d.L-1;Cmax分别为(3.27±0.53)(,8.36±1.92)mg.L-1;Tmax分别为(2.50±0.76)(,2.47±1.06)h。2组多次恒速滴注停药后,均能饱和T细胞白介2受体(IL-2R)相应结合位点。结论本品在中国肾移植患者起效迅速,疗效持久。多次给药耐受性良好,WuTac在0.1～0.2 mg.kg-1内基本呈线性药动学特征。

异烟腙类衍生物TJU103体外对人T淋巴细胞活化功能的影响

目的 探讨异烟腙类衍生物 TJU10 3体外对人 T淋巴细胞活化功能的影响。方法 体外建立 HL A半相合供、受者间单向混合淋巴细胞培养 (ML C)体系 ,应用 TJU10 3阻断 CD4 T细胞激活的抗原信号通路 ,利用MTT法检测 T淋巴细胞的增殖和细胞毒活性 ,酶联免疫吸附法 (EL ISA)检测对 T淋巴细胞分泌细胞因子的影响。结果 TJU10 3能明显降低 HL A半相合供、受者间混合淋巴细胞增殖反应 ,以及肿瘤坏死因子 α(TNF- α)和 γ干扰素 (IFN-γ)等炎性细胞因子的分泌 (P <0 .0 1) ,但不影响供者 T细胞对原代白血病细胞的杀伤效应 (P >0 .0 5 )。结论 TJU10 3能特异性地与 CD4 T淋巴细胞结合 ,阻断 CD4 T淋巴细胞激活的抗原信号通路 ,在明显降低 T淋巴细胞增殖反应和炎性细胞因子分泌的同时 ,不影响其细胞毒作用发挥 。

嗜人T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)与神经系统疾病相关性的初步研究

本文报道从粤东地区57例神经系统疾病患者血清中，检测出HTLV－Ⅰ抗体阳性者3例，阳性率为5．26％。并介绍了HTLV－Ⅰ抗体阳性者的主要临床表现和实验室检测结果。我们认为，进一步开展HTLV－Ⅰ与神经系统疾病的相关性研究，是非常有意义的。

γ辐射诱发的人AHH-1 T淋巴细胞凋亡及其调控机制

目的 :研究电离辐射诱发正常人AHH 1T淋巴母细胞凋亡的特点及其调控机制 ,为辐射免疫损伤的防治提供实验依据。方法 :用TUNEL、麦格 姬姆萨 (MGG)法、MTT比色法及碱磷酶免疫组织化学染色法 ,分别检测T细胞凋亡、细胞活存以及Bax、Bcl XL和caspase 3重要凋亡相关蛋白的表达及规律。结果 :①在一定照射剂量范围内随照射剂量的增加 ,AHH 1T细胞凋亡率持续升高 ,而细胞活的活存率则急剧下降 ,两者均呈现明显的剂量效应关系。②促凋亡蛋白Bax的表达随照射剂量的增加明显增强 ,而凋亡抑制蛋白Bcl XL则呈持续下降的趋势。③活化的凋亡执行蛋白caspase 3的活性随照射剂量的增加显著升高 ,与凋亡率呈现明显的相应关系。结论 :AHH 1T细胞的大量凋亡 ,可能是辐射导致淋巴细胞急剧减少、机体免疫功能降低的重要原因 ;Bax、Bcl XL和cas pase

抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白对小鼠再生障碍性贫血的影响

目的探讨抗人T淋巴细胞猪Ig对再生障碍性贫血小鼠骨髓象及骨髓粒系、红系和巨核系的影响。方法 ICR小鼠60只,雄性,3～4周龄;体质量16～18g;随机分为A组(1000mg·kg-1受试品)、B组(500mg·kg-1受试品)、C组(250mg·kg-1受试品)、D组(1000mg·kg-1阳性对照组)、E组(模型组)、F组(9g.L-1盐水组),每组10只。小鼠皮下注射2.5g.L-1苯玉米油溶液复制再生障碍性贫血模型,骨髓涂片Wright染色,光镜大体观察;油镜下进行骨髓涂片分类计数、骨髓细胞混悬液有核细胞计数。结果 1000mg·kg-1受试品组骨髓片有核细胞多数呈增生活跃状态,部分呈增生减低趋势;500mg·kg-1受试品组骨髓片有核细胞增生减低;250mg·kg-1受试品组骨髓片有核细胞增生明显减低,骨髓小粒造血细胞减少;模型组骨髓片有核细胞增生极度减低,骨髓小粒造血细胞明显减少,但500mg·kg-1、250mg·kg-1受试品组和模型组的淋巴细胞数量较9g.L-1盐水组稍增多,纤维细胞等非造血细胞增加;1000mg·kg-1阳性对照组结果与1000mg·kg-1受试品组结果相同。骨髓有核细胞计数显示,与模型组比较,高、中剂量的受试品组及阳性对照组骨髓有核细胞数明显增加。结论抗人T淋巴细胞猪Ig可明显改善再生障碍性贫血动物的骨髓象。

四种嵌合免疫受体在T淋巴细胞中的表达分析

目的利用基因工程技术构建含人源抗癌胚抗原(CEA)单链抗体(scFv)的4种嵌合免疫受体(CIR),比较其在T淋巴细胞表面表达的情况。方法将构建好的嵌合免疫受体CIRZ、CIR1、CIR2、CIR3通过电穿孔方法分别转染人T淋巴细胞,流式细胞仪检测各嵌合免疫受体在T淋巴细胞的表达情况。结果有3种嵌合免疫受体成功表达在T细胞的表面,它们分别是CIR1、CIR2、CIR3,其中CIR3的表达更好。结论嵌合免疫受体能够在T淋巴细胞的表面有效表达,为下一步的体内实验打下基础,同时为这一治疗策略最终应用于临床提供可靠的实验依据。

抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白急性毒性实验研究

目的观察拟生产药物抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白(ALG)对小鼠的急性毒性作用。方法 ICR小鼠,体质量18～22g,雌雄各半,分别采用腹腔注射限度试验和尾静脉注射最大受试药量试验法,连续观察14d后处死全部小鼠,并进行尸体解剖、大体肉眼观察,发现异常的组织或器官进行病理切片送检。结果两种试验方法结果均显示:所有试验动物存活,供试品的LD50>5g/kg,但尾静脉注射最大给药量试验时,发现给药2d内动物的一般情况较差,处死并解剖后发现用药组有少数小鼠出现肝、肾的感染性侵害。结论 ALG的LD50值大于5g/kg,约相当于临床用量的250～333倍,提示该药物比较安全,但在过量静脉注射后短期内对小鼠仍有一定毒性。

嵌合免疫受体在T淋巴细胞中的表达及意义

目的为嵌合免疫受体(CIR)用于恶性肿瘤的过继性免疫治疗奠定基础。方法将已构建好的含人源抗癌胚抗原(CEA)单链抗体(scFv)的嵌合免疫受体CIRZ、CIR1、CIR2、CIR3分别通过电穿孔方法转染人T淋巴细胞,流式细胞仪检测其在T淋巴细胞的表达情况。结果有3种嵌合免疫受体成功表达于T细胞表面,分别为CIR1、CIR2、CIR3,其中CIR3的表达更好。结论嵌合免疫受体能够在T淋巴细胞的表面有效表达;本研究为CIR的临床应用提供了可靠的实验依据。

人T淋巴细胞CD3ε链的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链。方法以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆入pCR-II载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-hCD3ε,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定。结果酶切分析及DNA测序证实,hCD3ε链基因被正确克隆入pGEX-4T-3载体,并能在原核系统中稳定表达。表达产物的相对分子质量为49 500,0.2 mmol/L IPTG 25℃诱导表达4.5 h,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的29.3%,其中可溶性表达占12.8%。纯化的融合蛋白纯度可达86.1%,可分别被兔抗人CD3ε多抗和羊抗GST多抗识别。结论已成功地原核表达并纯化了GST-hCD3ε融合蛋白。

一种抗人T淋巴细胞免疫球蛋白淋巴细胞毒效价检测方法的建立

目的建立基于人白血病T细胞株Jurkat的抗人T淋巴细胞免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte immunoglobulin,ALG)淋巴细胞毒效价定量检测方法,并进行验证。方法采用人Jurkat细胞作为靶细胞,抗人T细胞兔免疫球蛋白(商品名:Grafalon)作为待检样品,建立其淋巴细胞毒效价定量检测方法。优化反应体系,考察细胞培养密度、细胞代次对待检样品效价的影响,并对方法的精密度进行验证。结果优化的反应体系组成为50μL待检样品+50μL补体(1∶5稀释)+50μL细胞(5×10^(6)个/mL);细胞传代密度为2×10^(5)个/mL传代培养72 h或3×10^(5)个/mL传代培养48 h用于效价测定最佳;当细胞生长状态较好且一致时,从P10到P25代次的细胞效价测定结果较一致。采用该方法板内重复测定待检样品效价,变异系数(CV)为6.32%,重复性良好;不同代次Jurkat细胞测定待检样品效价6次,CV为4.15%,中间精密度良好。结论建立了一种便捷、精确的测定ALG淋巴细胞毒效价的定量检测方法,为ALG效价测定提供了一种客观、准确的评价手段。

气功修炼者与癌症病人外周血T淋巴细胞及亚群变化的比较研究

气功是中华民族灿烂的文化遗产,是祖国传统医学的重要组成部分;气功防病治病、康复保健的功效,引起了国内外科学工作者的重视。他们从生理学、心理学和医学等多学科多方位,对其祛病健身机制进行研究。本文从免疫学角度来探讨多年气功修炼者与癌症病人外周血T淋巴细胞及亚群的变化情况。

HLA-G在人T淋巴细胞白血病1型病毒阳性T细胞中的表达及功能

目的观察人白细胞抗原G(human leukocyte antigen G,HLA-G)在人T淋巴细胞白血病1型病毒(human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)阳性T细胞中的表达情况,研究其在影响HTLV-1感染发生发展中的作用。方法采用Western blot及real-time PCR检测HLA-G在HTLV-1阳性T细胞系(MT2和MT4)中的表达。构建HLA-G基因沉默的siRNA,用于敲低MT2和MT4细胞中的HLA-G,在mRNA和蛋白质水平观察HLA-G对HTLV-1蛋白Tax、P19表达的影响,同时在RNA水平监测HLA-G基因沉默后MT2和MT4细胞中细胞因子的表达变化。CCK8法观察MT2和MT4细胞的增殖能力,Western blot检测信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路相关蛋白。结果与HTLV-1阴性T细胞(Jurkat和MOLT4)比较,MT2和MT4细胞均高表达HLA-G分子。siRNA敲低MT2和MT4细胞中的HLA-G后,HTLV-1 Tax和P19的mRNA和蛋白质表达水平均下降,抗病毒因子IFN-γ和TNF-α表达升高,MT2和MT4细胞的增殖能力和STAT3磷酸化水平均降低。结论HTLV-1能诱导T细胞高表达免疫耐受分子HLA-G,抑制HLA-G表达可促进抗病毒因子的产生,降低IL-6及STAT3磷酸化水平,从而有效抑制HTLV-1的复制。