人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建

为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)基因 ,用HindⅢ对 pcDNA3 .1 /VEGF进行酶切 ,回收 5 75bp的VEGF片段 ,与 pFastBacI载体连接 ,得到含VEGF基因的转座载体 pFast/VEGF ,NcoI酶切鉴定方向 ;将其转化到含有穿梭载体杆粒 (Bacmid)的DH1 0Bac感受态细胞 ,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF ,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定。将Bacmid/VEGF转染sf 9细胞 ,进行病毒重组及噬斑筛选。结果 :琼脂糖电泳得到杆粒 (Bacmid)DNA条带 ,PCR扩增得到 5 75bp的VEGF片段 ,病毒液在 1 0 - 7稀释度时出现噬斑 ,约 5 0个 /孔。说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒。

人BMP2及VEGF双基因共表达腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定

目的构建人骨形态发生蛋白2(BM P 2)与血管内皮生长因子(VEGF)双基因腺病毒穿梭质粒。方法对pCU-CAGG S-hVEGF 165的目的基因亚克隆并引入新的酶切位点,定向连入腺病毒穿梭载体pShu ttle-CM V,将质粒pcDNA 3.1-BM P 2及pIRES酶切后,将BM P 2和IRES片段定向连入pShu ttle-CM V-hVEGF 165,构建可同时表达两个目的基因重组质粒pShu ttle-CM V-hBM P 2-IRES-hVEGF 165,进行酶切分析及序列测定。结果酶切分析及核酸序列测定证实重组质粒构建正确。结论成功构建了BM P 2及VEGF双基因腺病毒穿梭质粒;为联合基因治疗骨缺损的研究奠定了基础。