人MutS同源蛋白2(hMSH2)过表达的肺癌细胞模型的构建

目的构建人Mut S同源蛋白2(h MSH2)过表达的肺癌细胞模型,探究h MSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的效应。方法 PCR扩增h MSH2编码序列,同源重组法构建h MSH2-EGFP融合蛋白过表达载体;转染肺癌细胞系NCI-H520细胞以构建h MSH2分子过表达的NCI-H520细胞模型;Western blot检测细胞中h MSH2分子表达,流式细胞计量术检测细胞膜上h MSH2分子表达,体外扩增人外周血单个核细胞中的γδT细胞,乳酸脱氢酶释放法检测γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率。结果获得h MSH2编码序列(2 805 bp),构建Fugw-h MSH2重组载体,酶切鉴定结果与预期目的条带大小相符;h MSH2-EGFP融合蛋白在NCI-H520细胞中得到表达,过表达h MSH2的NCI-H520细胞表面的h MSH2分子水平显著升高(P<0.001);γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率较野生型NCI-H520细胞显著升高(P<0.05)。结论成功构建h MSH2分子过表达的肺癌细胞模型;细胞膜上表达水平上调的h MSH2分子增强了γδT细胞对肺癌细胞的细胞毒作用。

弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中MGMT、hMLH1蛋白表达变化及其临床意义

目的观察弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和人Mut S同系物1(h MLH1)表达变化,并探讨其与DLBCL临床病理参数和化疗疗效的关系。方法采用免疫组织化学方法检测100例初治DLBCL患者肿瘤组织中的MGMT和h MLH1,分析两者表达的相关性及其与DLBC临床病理参数、化疗疗效的关系。结果本组患者肿瘤组织MGMT表达阳性42例,阴性58例,h MLH1表达阳性54例,阴性46例。DLBCL患者肿瘤组织中MGMT与h MLH1表达无显著相关性。MGMT表达与DLBCL临床分期、IPI评分、病理亚型有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、血清LDH、全身症状、原发部位无关;h MLH1表达与DLBCL患者IPI评分、病理亚型有关(P均<0.05),与临床分期、性别、年龄、血清LDH、全身症状、原发部位无关。MGMT阳性者CR率和化疗总有效率分别为28.6%、52.4%,均低于MGMT阴性者的55.2%和75.9%(P均<0.05)。h MLH1阳性者CR率和化疗总有效率分别为75.9%,均高于h MLH1阴性者的28.3%和54.4%(P均<0.05)。结论DLBCL组织中MGMT和h MLH1表达率分别为42%和54%,MGMT表达与临床分期、IPI评分、病理亚型有关,h MLH1表达与IPI评分、病理亚型有关,MGMT表达阳性和h MLH1表达表达阴性者化疗效果较好。

miR-21调控靶蛋白hMSH2对寻常型银屑病的作用

目的探讨微小核糖核酸-21(microRNA-21,miR-21)调控其靶蛋白错配修复基因——人mut S同种组蛋白2(h MSH2)在寻常型银屑病发生过程中的表达水平和作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测miR-21在30例寻常型银屑病患者皮损组织和30例正常皮肤组织中的表达水平。利用免疫组织化学Envision二步法检测30例寻常型银屑病患者与30例正常人群h MSH2蛋白的表达情况。化学合成miR-21模拟物、抑制剂,瞬时转染Ha Ca T细胞以过表达、抑制表达miR-21,采用Western blot法检测转染细胞中h MSH2蛋白的表达。结果miR-21在寻常型银屑病患者皮损组织中的表达高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(t=18.596,P<0.01)。h MSH2蛋白在寻常型银屑病患者皮损中的阳性表达率为90.00%,显著高于在正常皮肤组织中的46.67%,差异有统计学意义(χ~2=13.017,P<0.01)。Western blot法检测h MSH2蛋白表达结果显示,过表达miR-21时h MSH2蛋白表达量增加,miR-21抑制表达时h MSH2蛋白表达量降低,差异有统计学意义(F=69.579,P<0.01)。结论miR-21及其靶蛋白h MSH2在寻常型银屑病患者皮肤组织中的表达显著高于正常皮肤组织;miR-21的差异表达可能调控h MSH2蛋白参与寻常型银屑病的发病过程。