转录介导融合基因RBM6-RBM5在肿瘤细胞及组织中的表达

目的:鉴定RBM6-RBM5融合基因的存在,研究其与肿瘤发生的关系。方法:采用GLC20、MDA、MB、231、Jurkat、TF-1、MCF-7、Hela、BT-474、A431、K562及Raji10种肿瘤细胞株,肺、卵巢、骨骼肌、皮肤、脾脏、子宫、心脏、骨、脑、淋巴结、胰腺、前列腺及睾丸等肿瘤组织及其相应正常对照组织的cDNA,5例乳腺癌组织,以巢式PCR方法检测融合基因的存在,并通过QPCR方法研究融合基因的产生与RBM6、RBM5基因表达水平之间的关系。结果:RBM6-RBM5融合基因首次在MDA、MB、231细胞株中获得鉴定,序列分析发现该基因为RBM6和RBM5的融合体,该融合体不包括RBM6的外显子20、21以及RBM5的外显子1。该融合基因在10种肿瘤细胞株及部分肿瘤组织中表达,但在正常组织中却未见表达。融合基因的表达与RBM6和RBM5 mRNA的表达有关;RBM6和RBM5 mRNA的表达水平在融合基因阳性的肿瘤组织中明显高于融合基因阴性的肿瘤组织。结论:融合基因的表达与肿瘤发生有关,高水平的RBM6和RBM5 mRNA水平可能是融合基因产生的原因之一。

合成环肽抑制HIV-1病毒介导的细胞融合的初步研究

目的鉴定合成环肽FJ-08是否抑制HIV-1病毒介导的细胞融合。方法固相合成环肽FJ-08(SACYWWHRLHCGGGS),将合成肽与BSA载体交联,ELISA检测交联物与源于HIV-1gp41N螺旋的合成肽N36结合,细胞融合抑制实验检测FJ-08抑制H9/HIVIIIB细胞与MT-2细胞的融合。结果ELISA鉴定表明FJ-08-BSA与N36肽结合。与无关肽比较,细胞融合抑制实验显示在2h内,80#g/ml的FJ-08肽具有抑制融合作用,呈现浓度依赖效应。结论FJ-08合成肽可抑制HIV-1介导的细胞融合。

慢病毒介导CD-TK融合基因转染对神经干细胞体外增殖的影响

目的探讨慢病毒介导胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)及胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase,TK)融合基因转染对神经干细胞体外增殖的影响。方法原代培养新生Wistar大鼠室下区神经干细胞并鉴定,经传代纯化后,用CD-TK基因包装的慢病毒处理3～5 d。MTT实验检测神经干细胞增殖活性,免疫荧光技术检测转染后神经干细胞GFAP、NSE表达。结果 MTT结果显示CD-TK融合基因转染对神经干细胞增殖无影响(P>0.05)。免疫荧光结果显示:神经干细胞Nestin标记阳性;CD-TK融合基因转染后,神经干细胞NSE及GFAP均表达阳性。结论 CD-TK融合基因转染对神经干细胞增殖无影响。

PEP-1介导的血红素氧合酶HO-1对缺血再灌注损伤大鼠肝脏TNF-α mRNA表达的影响

目的:探讨PEP-1介导的血红素氧合酶-1(HO-1)对缺血再灌注损伤(IR I)大鼠肝脏肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响。方法:SD大鼠经尾静脉注射HO-1(HO-1组)或PEP-1-HO-1(PEP-1-HO-1组)300μg后,制备大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,1、6、12、24 h后用RT-PCR法检测肝组织中TNF-αmRNA水平,另设对照。结果:PEP-1-HO-1组肝脏TNF-αmRNA水平均较单纯IR I组和HO-1组低(P<0.05),且随IR I时间延长而逐渐降低(P<0.05)。结论:PEP-1介导的HO-1融合蛋白降低肝脏TNF-αmRNA表达,可能减轻肝缺血再灌注损伤程度。

穿透肽介导的铜-锌超氧化物歧化酶1融合蛋白的抗氧化作用及对脂肪干细胞移植修复脊髓损伤的促进作用

目的探讨穿透肽介导的铜-锌超氧化物歧化酶1融合蛋白（PEP-1-SOD1）在脊髓损伤早期的抗氧化作用及对脂肪干细胞（ADSCs）移植修复脊髓损伤的促进作用。方法体外分离培养SD大鼠ADSCs，并以携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的腺病毒感染ADSCs。取成年SD大鼠96只，以改良Allen法制作脊髓损伤模型，随机分为3组：盐水治疗组、ADSCs治疗组、PEP-1-SOD1联合ADSCs治疗组（联合治疗组），术后1、3、7 d各取8只大鼠分别行超氧化物歧化酶（SOD）活性检测及丙二醛（MDA）含量检测，术后7 d各取4只大鼠行细胞凋亡检测；术后1、2、3、4周行Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分，术后4周BBB评分后处死大鼠行神经元特异性核蛋白（NeuN）表达阳性细胞检测，对ADSCs治疗组及联合治疗组行脊髓损伤区域绿色荧光蛋白（GFP）阳性细胞检测。 结果术后7 d ADSCs治疗组SOD活性大于盐水治疗组（t＝3.882，P＝0.030），MDA含量小于盐水治疗组（t＝10.392 ，P＝0.002），联合治疗组SOD活性大于ADSCs治疗组（t＝4.690，P＝0.018），MDA含量小于ADSCs治疗组（t＝3.464，P＝0.031）。术后7 d联合治疗组细胞凋亡少于ADSCs治疗组（t＝13.416，P＝0.000），ADSCs治疗组细胞凋亡多于盐水治疗组（t＝12.000，P＝0.000）。术后4周，联合治疗组BBB评分为（18.59±1.54）分大于ADSCs治疗组[（11.90±1.72）分，t＝8.430，P＝0.000]；联合治疗组NeuN阳性细胞百分比为（61.65±12.65）%大于ADSCs治疗组的（31.45±5.76）%（t＝154.214，P＝0.000）；联合治疗组GFP阳性细胞数大于ADSCs治疗组（t＝64.325，P＝0.000）。 结论与单纯ADSCs移植比较，联合应用PEP-1-SOD1进一步增加损伤局部SOD活性，降低MDA含量，改善运动功能，PEP-1-SOD1发挥了协同效果，这可能与减少移植细胞凋亡有关。

M嗜性HIV-1 毒株一过性感染T细胞系的研究

目的了解早期分离毒株一过性感染Ｔ细胞的分子机制。方法将毒株在Ｔ细胞系培养后，在观察其生物学性状的同时，对外膜基因进行序列分析，确定毒株的基因变异，并结合异源双链泳动分析，了解病毒群的复杂度。结果序列分析显示这些病毒都是Ｍ嗜性、非介导融合型（ＮＳＩ），与其生物学性状一致；在Ｔ细胞系传代过程中发生较大变异，都在不同程度上表现出偏离Ｍ嗜性、ＮＳＩ的序列特征；尽管有一毒株（编号：ＣＮ９７００１）在末代序列中已有介导融合型（ＳＩ）的特征，但却未能显示ＳＩ的表型。异源双链泳动分析显示，病毒群复杂度在传代刚开始时低，以后一直较高。结论结果提示，Ｍ嗜性、ＮＳＩ毒株为适应Ｔ细胞系，向不同变异方向作了尝试，但都未成功。虽然ＨＩＶ外膜基因与毒株的细胞嗜性、受体使用，与介导融合等特性有关，但这些表型的体现与否，还与毒株的整个基因组背景有关。在早期感染的Ｍ嗜性、ＮＳＩ毒株群中并没有Ｔ嗜性／ＳＩ毒株存在，是后来在体内随感染延续而产生的。