甘蔗根癌农杆菌介导转化海藻糖合酶基因获得抗渗透胁迫能力增强植株

由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗的抗旱能力。结果表明 ,甘蔗胚性愈伤组织对EHA10 5菌株敏感 ,甘蔗外植体开始大量形成胚性愈伤组织时是感染的适宜时期 ,用膦丝菌素 (PPT)筛选 ,抗性植株发生频率平均为 4 .5 %。经PCR及dot Southern检测证明 ,TSase已经整合到甘蔗基因组中。部分转化植株根叶畸形、株型异常、生长缓慢。移栽到含PEG80 0 0 17.4 % (w/v)的MS培养基后 。

连续回交对消除农杆菌介导转化引起水稻体细胞变异的影响

农杆菌介导的转化引起许多体细胞变异,影响了转基因植物的农艺性状。因此,转基因作物的培育需要大量的T0代再生植株。在本研究中,我们将转基因水稻株系与原始品种连续回交,然后评价其回交后代的表现,消除体细胞变异,恢复转基因亲本的农艺性状。回交的供体亲本是3个转基因水稻株系,分别带有来自于苏云金芽胞杆菌(Bt)的抗虫基因。与原始品种连续回交至BC3F1代,每代BCnF1单株再自交两代,同时对各个世代进行抗虫性选择。通过发芽试验获得转基因纯合的BCnF3株系,在室内抗性试验中,所有的BCnF3纯合株系都能杀死100%的幼虫。在田间试验中,这些株系的单株产量明显高于供体亲本,大部分农艺性状与原品种没有显著的差异。这些结果说明连续回交能够在很大程度上恢复转基因水稻株系的农艺性状,从而减少转基因育种过程中所需的工作量。

根癌农杆菌介导转化谷子的影响因素(英文)

利用GUS报告基因,建立了农杆菌介导的谷子(Setaria italica)遗传转化体系,并研究了多种影响因素对转化效率的影响,包括受体基因型、外植体类型、菌液浓度、培养基中乙酰丁香酮的浓度、侵染时间和共培养时间.确定了最优的转化条件为:以谷子幼穗诱导的愈伤组织为外植体,用低浓度的农杆菌菌液侵染30～40min,然后在含有0.1mmol/L乙酰丁香酮的LS培养基上共培养2d.

辣椒农杆菌介导转化体系的建立及外源基因的转化

辣椒农杆菌介导转化体系主要包括无菌苗制备、菌株培养、农杆菌介导转化、芽诱导、芽伸长、生根及移栽等 6个步骤。芽诱导培养基以MS +4.0～ 6 .0mg/L 6 BA +0 .5mg/LNAA +2 .0mg/LAgNO3 较好 ,诱芽分化率因品种不同而异 ,高的可达 70 %以上 ,子叶的分化率明显高于下胚轴 ;诱芽伸长培养基以MS +3.0mg/L 6 BA +0 .3mg/LNAA +1.0mg/LGA3 较好 ,伸长率达 4 0 % ;生根培养基以 1/2MS +0 .3mg/LNAA(或 0 .5mg/LIAA)较好 ,平均生根率达 6 5 %。经过对 3个品种的抗虫基因转化研究 。

提高农杆菌介导转化水稻效率的因素

以3个籼稻品种和2个粳稻品种为对象,对农杆菌转化水稻过程中影响转化效率的因素进行了研究。结果表明,菌株AGL1和EHA105按一定比例混合共转化和转化前菌体重悬对抗性愈伤率有显著影响;琼脂粉加倍和超净工作台上风干4h的方法因能明显提高抗性愈伤率和分化率而被认为是最适合的干燥培养方式;分化培养基中加入二甲基亚砜(DMSO)或脯氨酸(Pro)可以提高分化率;壮苗时加入适量的NAA有利于壮根并提高移栽成活率。应用此农杆菌转化系统,获得了一批经PCR和点杂交鉴定的转基因植株。

小白菜再生和农杆菌介导转化体系的建立

探讨植物激素、外植体类型、抗生素、外植体预培养时间、共培养时间等多因素对小白菜再生体系和转化体系建立的影响。结果表明,基本(播种)培养基中添加6-BA3mg·L-1+NAA0.3mg·L-1,有助于提高不定芽的诱导频率;带柄子叶的不定芽再生频率显著地高于下胚轴;将外植体预培养2d后,再感染,转化频率较高;共培养2d有助于提高转化效果。经优化组合这些技术参数,初步建立了小白菜农杆菌介导的转化体系,获得了转抗虫基因sck的小白菜植株。PCR检测结果证明,sck基因已整合到小白菜的基因组中。

辐照对高羊茅愈伤组织诱导及农杆菌介导转化的影响

以高羊茅成熟种子及产生的愈伤组织为试验材料,研究了辐照对愈伤组织诱导和农杆菌介导转化的影响。结果表明,5～20Gy辐照对高羊茅成熟种子诱导愈伤组织有一定的促进作用,使出愈率比对照提高4.7%～12.3%,其中以10Gy处理的效果最好,剂量超过30Gy对愈伤组织形成产生抑制作用。其转化前,愈伤组织被1～4Gy的剂量辐照处理,其GUS瞬间表达率随剂量的增加逐渐提高,但当剂量高于4Gy时,愈伤组织的GUS瞬间表达率随剂量的增加而下降。综合考虑辐照后愈伤组织的存活率和GUS瞬间表达率,2Gy为高羊茅愈伤组织转化的最佳剂量。深入观察表明,辐照后继代培养24h最适合农杆菌介导感染。

采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体的构建

为在泡盛曲霉中表达外源基因、克服泡盛曲霉常规转化法效率低下的瓶颈,本研究拟构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体。通过PCR,从糖化酶基因(glaA)高效表达的泡盛曲霉菌株SG1基因组DNA扩增获得glaA 2.1 kb启动子片段(包含信号肽编码序列)及1.1kb终止子片段,构建了外源基因表达盒。以根瘤农杆菌双元载体pCAMBIA1302为基础,删除非必需区段及多余限制酶位点,插入上述外源基因表达盒及来自丝状真菌标记载体pAN7-1的潮霉素抗性标记,构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉分泌整合型表达载体pSUAA52am。转化结果表明:采用原生质体法的转化效率为21个转化子/10~6分生孢子,而农杆菌介导法可达1106个转化子/10~6分生孢子,是原生质体法的53倍。构建载体成功利用glaA表达盒与农杆菌介导转化法的高效特性,可为利用泡盛曲霉高效表达外源基因奠定基础。

基于绿色荧光蛋白观察的花粉介导转化泡桐初探

以泡桐花粉为受体,在超声波的作用下将含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒与花粉共处理,利用荧光显微镜对GFP基因在花粉粒及花粉管中的表达进行了示踪观察。结果表明:100g/L的蔗糖溶液是泡桐花粉较适宜的体外培养液;花粉粒有较强烈的自发荧光,因此不能根据花粉粒荧光来确定GFP基因是否表达;处理组花粉管较对照呈现强烈的绿色荧光,表明GFP基因在花粉管中表达。该试验首次利用泡桐花粉对GFP基因的表达观察,初步证明了这一转基因方法对泡桐花粉转化的可行性。

农杆菌介导转化油菜中几种影响玻璃化频率的因素

在用农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的组织培养过程中,常会伴生着试管苗玻璃化现象的发生,此现象的发生会降低转基因的频率.本试验结果表明,影响玻璃化发生的因素较多,包括激素体积质量分数、蔗糖体积质量分数、琼脂体积质量分数和接种密度等.其中,激素6-BA和ZT体积质量分数对诱芽率和玻璃化率都有显著影响,随着体积质量分数的升高,玻璃化率升高,以6-BA体积质量分数为1mg/L,ZT体积质量分数为2mg/L时结果较为理想.蔗糖体积质量分数和琼脂体积质量分数对玻璃化率也有显著影响,当二者体积质量分数升高,玻璃化率降低,同时诱芽率也降低.综合分析,当蔗糖体积质量分数为50g/L,琼脂体积质量分数为10g/L时最适宜.接种密度对玻璃化的发生有显著影响,密度越高,玻璃化倾向越严重,而密度对诱芽率影响不明显.试验结果分析发现,接种密度为20～30个/皿最适宜.

大豆子叶节再生及农杆菌介导转化研究

用大豆早熟一号无菌苗不同外植体进行再生研究发现都能获得再生植株,但再生能力差异较大,以子叶节和顶芽的再生能力较强且以子叶节作为遗传转化的受体较好,宜用带少量子叶的子叶节作外植体,AS浓度160μmol/L、40min浸染时间、共培养2d进行农杆菌介导转化和Kan浓度120mg/L筛选获得的转化抗性苗率较高。

一种根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的新方法

设计了一种简单高效的根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的方法。利用嵌套平板的方法,在内层平板培养平菇菌丝,待菌丝生长至平板边缘,将经诱导的根癌农杆菌与共培养培养基(CCM)混合,倒入内层平板与外层平板的间隙中,与正在生长中的菌丝共培养,实现转化,利用潮霉素抗性筛选获得转化子,平均转化效率33%左右。此方法操作简单,周期短,极易扩大实验规模,为平菇的分子育种以及其他丝状真菌的遗传转化提供参考。

农杆菌介导转化蝴蝶兰遗传体系的研究

为建立蝴蝶兰植株的高效遗传转化体系,以蝴蝶兰花梗腋芽诱导的类原球茎体为受体材料,利用农杆菌侵染并在侵染前后辅以超声波及负压处理的方法将gus基因导入到蝴蝶兰中,经过近90 d的筛选,获得了69个抗卡那霉素抗性PLB,经X-gluc组织化学染色法观察检测,表达率最高达39%,并获得了50株再生蝴蝶兰,其中17株PCR检测呈阳性。初步建立了蝴蝶兰遗传转化体系。另外,我们在农杆菌侵染前后辅以超声波及负压处理,可以提高转化效率。

甘蓝型油菜再生与农杆菌介导转化芽苗分化差异

选用9个不同基因型的油菜,采用单因素方差分析,研究其下胚轴再生分化及转化后分化效率,阐明了不同基因型对油菜再生及转化后芽苗分化能力的影响。结果表明,油菜再生及转化的分化效率均受基因型影响,基因型对油菜再生分化的影响程度大于转化后分化的程度,且不同油菜品种再生分化芽苗效率及转化后分化芽苗效率之间并不存在严格的相关性。

腺病毒介导转化生长因子β1对786-0肾癌细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨腺病毒介导的转化生长因子β-1(TGF-β1)对肾癌细胞迁移与侵袭的影响。方法将肾癌细胞系786-0细胞培养后分实验组及对照组,实验组以腺病毒为载体将TGF-β1转染,采用细胞划痕实验检测TGF-β1对其迁移的影响;采用Transwell小室实验检测TGF-β1对其侵袭的影响。结果 48 h后实验组的划痕宽度明显变窄,且明显小于对照组(P<0.05);48 h后实验组的穿透细胞数明显多于对照组(P<0.05)。结论 TGF-β1能够促进肾癌细胞的迁移与侵袭。

微弹轰击介导转化

渗透压处理促进基因枪介导转化 瑞典农业科学院D.Clapham及其同事研究发现,在微弹轰击前后用渗透处理挪威云杉胚性细胞悬浮培养物可使轰击转移及报道基因表达提高3～20倍。0.25M肌醇或蔗糖对轰击一天后表达率的促进效应比甘露醇+山梨醇约高2倍。脱落酸提高肌醇的效应。轰击10天后测定发现,细胞保存在含有肌醇的培养基上可使基因表达率提高5～12倍,且对生长及其形态学无副作用。

玻璃珠促进土壤杆菌介导转化植物

Bidney等人曾报道,在土壤杆菌介导转化前先对组织进行微弹轰击可促进土壤杆菌介导的植物组织的转化。最近,美农部科学家W.S.Grayburn及B.A.Vick提出了一种通过创伤方法来促进土壤杆菌介导转化向日葵的技术。该方法勿需采用微弹轰击所需的专门的设备。 方法是:先除去向日葵的子叶,露出苗尖,将之与玻璃珠一起摇动,使向日葵胚性籽苗受伤,然后将籽苗与一种携带含gus基因质粒的根癌土壤杆菌毒性株共培养。转化后。