辣椒农杆菌介导转化体系的建立及外源基因的转化

辣椒农杆菌介导转化体系主要包括无菌苗制备、菌株培养、农杆菌介导转化、芽诱导、芽伸长、生根及移栽等 6个步骤。芽诱导培养基以MS +4.0～ 6 .0mg/L 6 BA +0 .5mg/LNAA +2 .0mg/LAgNO3 较好 ,诱芽分化率因品种不同而异 ,高的可达 70 %以上 ,子叶的分化率明显高于下胚轴 ;诱芽伸长培养基以MS +3.0mg/L 6 BA +0 .3mg/LNAA +1.0mg/LGA3 较好 ,伸长率达 4 0 % ;生根培养基以 1/2MS +0 .3mg/LNAA(或 0 .5mg/LIAA)较好 ,平均生根率达 6 5 %。经过对 3个品种的抗虫基因转化研究 。

小白菜再生和农杆菌介导转化体系的建立

探讨植物激素、外植体类型、抗生素、外植体预培养时间、共培养时间等多因素对小白菜再生体系和转化体系建立的影响。结果表明,基本(播种)培养基中添加6-BA3mg·L-1+NAA0.3mg·L-1,有助于提高不定芽的诱导频率;带柄子叶的不定芽再生频率显著地高于下胚轴;将外植体预培养2d后,再感染,转化频率较高;共培养2d有助于提高转化效果。经优化组合这些技术参数,初步建立了小白菜农杆菌介导的转化体系,获得了转抗虫基因sck的小白菜植株。PCR检测结果证明,sck基因已整合到小白菜的基因组中。