白细胞介素4调控巨噬细胞极化及骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:白细胞介素4可以提高骨替代材料的成骨效应,但其分子机制尚未明确,进一步阐明白细胞介素4提高成骨效应的作用机制,有助于为牙槽骨缺损患者的再生治疗找到安全、经济和有效的方法。目的:探讨白细胞介素4对巨噬细胞极化转化和骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其可能的作用机制。方法:M1组RAW264.7细胞用干扰素γ+脂多糖诱导24 h,白细胞介素4+M1组RAW264.7细胞用干扰素γ+脂多糖诱导24 h后加入白细胞介素4诱导24 h,白细胞介素4+AG+M1组RAW264.7细胞用干扰素γ+脂多糖诱导细胞24 h后加入白细胞介素4和JAK/STAT通路抑制剂AG-490诱导24 h。干预结束后,采用免疫荧光染色分析巨噬细胞表型标记蛋白诱导型一氧化氮合酶、CD206的表达;采用ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中白细胞介素10、肿瘤坏死因子α水平;采用RT-qPCR检测NLRP3、白细胞介素1β、caspase-1的mRNA表达;采用Western blot检测JAK1/p-JAK1、STAT6/p-STAT6、NLRP3、pro-IL-1β和pro-caspase-1通路蛋白的表达水平。随后将以上4组RAW264.7细胞与骨髓间充质干细胞transwell间接共培养24 h,然后进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色,采用RT-qPCR检测碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原和骨钙素的mRNA表达。结果与结论:①免疫荧光、ELISA检测结果显示白细胞介素4可促进M2样巨噬细胞CD206和白细胞介素10的表达,抑制诱导型一氧化氮合酶和肿瘤坏死因子α的表达;②RT-qPCR结果显示白细胞介素4可抑制NLRP3、白细胞介素1β、caspase-1 mRNA表达;③Western blot结果显示白细胞介素4可促进JAK1/p-JAK1、STAT6/p-STAT6和NLRP3蛋白表达明显增加;④与白细胞介素4+M1组RAW264.7细胞共培养的骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶染色、茜素红染色明显增强,碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原和骨钙素的mRNA表达明显升高。结果表明,白细胞介素4可能通过上调JAK1/STAT6通路,抑制NLRP3活化,从而促进巨噬细胞从M1向M2样极化转换,最终增强骨髓间充质干细胞的成骨分化能力。

口腔扁平苔藓患者血清中γ干扰素、白细胞介素4表达水平对免疫应答的调节作用

目的:探讨口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者血清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)表达水平对免疫应答的调节作用。方法:选取2019年1月—2021年12月首都医科大学附属北京口腔医院王府井部收治的83例OLP患者为实验组,另纳入同期来院的61例健康志愿者为对照组。比较2组患者血清中IFN-γ、IL-4及免疫功能指标的表达情况,并分析实验组IFN-γ、IL-4表达水平与免疫功能指标的关系。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实验组IFN-γ、IL-4水平显著高于对照组(P<0.05)。实验组网纹型OLP、糜烂型OLP患者的IFN-γ水平对比差异无统计学意义(P>0.05),实验组糜烂型OLP患者的IL-4水平显著高于网纹型OLP患者(P<0.05)。实验组CD3^(+)、CD4^(+)、CD16^(+)+CD56^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平显著低于对照组(P<0.05),实验组CD8^(+)、CD19^(+)水平显著高于对照组(P<0.05)。实验组IgG、IgM、CH50水平显著高于对照组(P<0.05),实验组IgA、C3、C4水平显著低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,实验组IFN-γ水平与CD16^(+)+CD56^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)呈负相关(P<0.05);实验组IL-4水平与CD16^(+)+CD56^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)呈负相关(P<0.05),实验组IL-4水平与IgG呈正相关(P<0.05)。结论:OLP患者血清中IFN-γ、IL-4异常高表达且糜烂型OLP患者IL-4表达更高,OLP患者细胞免疫及体液免疫功能紊乱且与CD16^(+)+CD56^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、Ig G免疫应答调节有关。

骨替代材料引导骨组织再生过程中白细胞介素4对破骨细胞分化的调控

背景:研究显示,一定剂量的白细胞介素4干预可以得到适宜比例的M1/M2巨噬细胞谱,产生利于骨愈合的微环境,促进骨再生。目的:探讨在骨替代材料引导骨组织再生的过程中,白细胞介素4对NLRP3炎性小体及破骨细胞分化的影响。方法:选取6-8周龄雄性SD大鼠48只,在左侧颅骨制备直径5 mm的骨缺损并同期植入Bio-Oss骨替代材料,缝合骨膜。术后第3天,采用随机数字表法分为实验组与对照组,每组24只,实验组、对照组分别于骨缺损区局部注射白细胞介素4或PBS,1次/d,连续注射5 d。注射后1,2周,取颅骨样本,免疫组织化学染色检测裂解caspase-1和白细胞介素1β蛋白的表达,免疫荧光染色观察M1表面标志物(诱导型一氧化氮合酶)、NLRP3指标(裂解caspase-1)的表达,RT-qPCR检测caspase-1、白细胞介素1β及组织蛋白酶K基因的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞分化及数量。注射后6,12周,取颅骨样本,行Micro-CT检测及苏木精-伊红染色。结果与结论:(1)免疫荧光染色显示,实验组注射后1,2周的诱导型一氧化氮合酶、裂解caspase-1双染细胞数量显著少于对照组(P<0.05);(2)免疫组织化学染色显示,实验组注射后1周的裂解caspase-1和白细胞介素1β蛋白的表达低于对照组(P<0.05);(3)RT-qPCR检测显示,实验组注射后1周的caspase-1 mRNA表达低于对照组(P<0.05),注射后1,2周的白细胞介素1β及组织蛋白酶K mRNA均低于对照组(P<0.05);(4)抗酒石酸酸性磷酸酶染色,实验组注射后1,2周的破骨细胞数量均明显少于对照组(P<0.05);(5)Micro-CT检测显示,实验组注射后6,12周的骨缺损部位骨体积分数、骨密度值均高于对照组(P<0.05);苏木精-伊红染色显示,注射后12周,实验组缺损中央形成多个骨化中心,散在成熟骨细胞及陷窝分布其中,可见材料周边成骨细胞大量排列成单层参与骨基质形成;(6)结果显示,白细胞介素4可能参与下调NLRP3炎性小体表达、抑制caspase-1的活化进而减少白细胞介素1β的分泌,减轻局部微环境炎性状态,同时抑制破骨细胞分化,发挥促进骨替代材料引导骨组织再生过程中新骨生成的作用。

宫颈病变患者血清白细胞介素2、白细胞介素4、干扰素γ水平与高危型HPV感染相关性研究

目的:探讨宫颈病变患者血清白细胞介素2(IL-2)、IL-4、干扰素γ(IFN-γ)水平与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的相关性。方法:选择126例HR-HPV阳性并经病理确诊上皮类瘤变(CIN)或宫颈癌患者为观察组,另选同期42例正常体检女性为对照组,检测两组患者阴道微环境[乳酸杆菌、需氧菌性阴道炎(AV)、细菌性阴道炎(BV)、外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)、滴虫性阴道炎(TV)]情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平,分析IL-2、IL-4、IFN-γ与HR-HPV感染的关系,并进行HR-HPV感染的多因素Logistic回归分析。结果:CINⅠ级HR-HPV负荷量>1000患者比例低于宫颈癌、CINⅡ级、CINⅢ级患者,HR-HPV负荷量1~100患者比例大于宫颈癌、CINⅡ级、CINⅢ级患者,差异有统计学意义(均P<0.05)。宫颈癌患者乳酸杆菌分级、pH值>4.5、BV、TV、VVC比例高于CINⅠ级患者(均P<0.05)。BV、TV、VVC、乳酸杆菌为HR-HPV感染的独立危险因素(均P<0.05)。对照组血清IL-2、IFN-γ水平高于CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈癌患者,IL-4低于CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈癌患者(均P<0.05)。血清IL-2、IFN-γ与HR-HPV感染呈负相关,IL-4与HR-HPV感染呈正相关(均P<0.01)。结论:HR-HPV感染患者阴道微环境改变,血清IL-2、IFN-γ水平下降,IL-4升高,HR-HPV感染与血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平有关,通过检测IL-2、IL-4、IFN-γ水平和阴道局部微环境可能判断CIN的进展情况,并筛选高危人群并密切监测,对减少宫颈癌的发生可能具有重要意义。

白细胞介素4参与调控骨改建的研究进展

骨骼系统的稳定依赖骨改建的动态平衡,其受到体内复杂微环境的调控,免疫系统也参与其中。异常的免疫微环境会打破机体内骨改建的平衡,进而诱发多种骨相关疾病。白细胞介素4(IL-4)作为一种经典的适应性免疫调节细胞因子,通过多种途径直接或间接参与骨改建的调控,在很多骨相关疾病中发挥重要作用。IL-4可通过信号通路直接影响成骨细胞和破骨细胞,还可通过影响T细胞、B细胞和巨噬细胞间接调控骨改建,且参与骨相关疾病(关节炎、骨质疏松症、牙周炎、骨移植不良反应)的发生、发展。

白细胞介素4和受体基因多态性与儿童变应性哮喘的相关分析

目的探讨白细胞介素4(IL-4)及受体(IL-4R)基因多态性与儿童变应性哮喘易感性及与血浆总IgE的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切多态性方法检测IL-4基因启动子区-589位和IL-4Rα亚单位Q576R两位点基因多态性,并观察对血浆总IgE的影响。结果(1)白细胞介素-4基因-589基因多态性与儿童支气管哮喘无相关关系;(2)IL-4受体α亚单位RR基因型和R576等位基因频率在儿童支气管哮喘与对照组相比差异显著(P<001,P<001),且R576与高IgE相关。结论这些数据表明IL-4Rα亚单位R576是中国汉族变应性哮喘患儿的危险因子,且与高IgE相关。

白细胞介素4的研究进展

白细胞介素4(IL-4)主要是活化T细胞产生的,来源于多种细胞的细胞因子。IL-4对人体多种细胞具有生物学转化作用,IL-4与效应细胞表面IL-4Rα结合,促进靶基因转录,其生物学信号转导主要通过JAK-STAT通路、Ras-ERK通路、PI3K-PKB通路三种途径。IL-4对肿瘤、过敏性疾病、类风湿关节炎、造血干细胞移植、妊娠、再生障碍性贫血、缺血性心脏病、疫苗免疫等疾病具有多重生物学功能和治疗作用。

白细胞介素4及受体基因多态性与哮喘易感性研究

目的探讨白细胞介素4(IL-4)及白细胞介素4受体(IL-4R)基因多态性与郑州地区儿童哮喘易感性及与血浆总IgE的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切多态性方法((PCR-RFLP)检测IL-4基因启动子区C-589T位和IL-4Rα亚单位576QR两位点基因多态性,并观察对血浆总IgE的影响。结果白细胞介素4基因C-589T基因多态性与儿童哮喘无相关性;IL-4受体α亚单位576QR基因型和576R等位基因频率在儿童哮喘与对照组相比差别有显著性(P<0.01,P<0.01),且576R与高IgE相关。结论本研究表明IL-4Rα亚单位576R与中国郑州儿童哮喘有关,且与高IgE相关。

白细胞介素4基因和白细胞介素4受体基因多态性与儿童哮喘的关系研究

目的探究白细胞介素4(IL-4)基因和白细胞介素4受体(IL-4R)基因多态性与儿童哮喘的关系。方法选取60例哮喘患儿(哮喘组)及60例健康体检儿(健康组)作为研究对象,采用聚合酶链反应-限制性酶切多态性方法 (PCR-RFLP)检测IL-4基因启动子区C-589T位和IL-4Rα亚单位576QR两位点基因多态性。结果两组IL-4-589等位基因频繁比较,差异无统计学意义(χ2=0.212,P>0.05)。两组IL-4Rα链576QR等位基因频率比较,差异有统计学意义(χ2=4.32, P<0.05)。结论 IL-4基因-589基因多态性与哮喘无相关性,而IL-4RαR576是小儿哮喘的危险基因因子。

肿瘤细胞靶向性白细胞介素4(IL-4)融合蛋白的研究(英文)

白细胞介素 4受体 (IL 4R)特异地存在于多种肿瘤细胞表面 ,这为某些肿瘤的治疗提供了一个靶向标记。在以前的研究中 ,人白细胞介素 4 (hIL 4 )与白喉毒素 (DT)的融合蛋白 (DT4H)被构建 ,且它对某些肿瘤细胞系的高毒性得到了证明。但是 ,由于毒素部分的强免疫原性 ,它可以诱导人体的免疫反应。该研究中我们构建了白细胞介素 4与绿脓杆菌外毒素 (PE) 2 5 3～ 6 0 8aa的融合蛋白 ,并在其N端添加了 6×His标记方便纯化 ,在其C端添加了KDEL提高毒性。为了改善与IL 4R的亲和力我们将IL 4进行了环式重组 ,构建的融合毒素 ,H4 0 4K ,经DEAE$CSepharoseFastFlow及Ni NTA纯化后 ,纯度达 90 %。纯化后的H4 0 4K与DT4H相似 ,对U2 5 1高度敏感 ,对MCF 7及HepG2中度敏感 ,且我们首次证实该毒性不会被兔抗白喉毒素的多克隆抗体所抑制。这些研究表明 ,H4 0

白细胞介素4和受体基因多态性与乙型肝炎肝硬化易感性的关系

目的：探讨白细胞介素4（IL-4）及受体（IL-4R）基因多态性与乙型肝炎肝硬化易感性的关系。方法：应用聚合酶链反应．限制性片断长度多态性（PCR—RFLP）分析方法，检测124例健康人群和100例乙型肝炎肝硬化患者IL-4基因启动区．589C／T及IL-4Rα链576位点谷氨酰胺／精氨酸（Q／R）这两个多态性位点，确定其基因型和等位基因频率的分布。结果：肝硬化组与对照组IL-4-589C／T位点其基因型和等位基因频率差异无显著性意义（P〉0．05），而肝硬化组IL-4Rα仅576R中RR基因型和R576等位基因频率与对照组相比差异具有显著性意义（P〈0．05，P〈0．01），Q等位基因相对于R等位基因患肝硬化的机会比为0．569（95％CI：0．332～0．963）。结论：IL-4Rα亚单位Q576R与乙型肝炎肝硬化易感有关，RR基因型携带者肝硬化易感性高，而IL-4—589位点基因多态性与乙型肝炎肝硬化无相关性。

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞γ干扰素和白细胞介素4的水平变化

目的研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中外周血T细胞表达细胞因子的调节作用。方法 60例慢性HBV感染者分为免疫耐受期组、免疫清除期组和非活动期组,20例健康人群作为对照组。另收集21例乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)阳性的慢性乙型肝炎患者,进行恩替卡韦治疗6个月。全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,PCR法检测HBV DNA载量,流式细胞术检测T细胞γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平。结果慢性HBV感染者的外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的IFN-γ水平与HBV DNA载量呈反比,IFN-γ/IL-4比率与HBV DNA载量和血清ALT水平均呈反比。此外,从免疫耐受期到非活动病毒携带期,T细胞的IFN-γ水平逐渐增加、IL-4水平逐渐降低,且与对照组相比,免疫耐受期患者的T细胞表达IL-4增加且IFN-γ减少,到非活动携带期其细胞因子表达逐渐恢复。慢性乙型肝炎患者经恩替卡韦抗病毒治疗后,血清HBV DNA载量和ALT水平均明显降低,同时其外周血CD8^+T细胞的IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比率均明显增加。结论慢性HBV感染过程中,外周血T细胞的IFN-γ和IL-4发挥双向调节作用,与恩替卡韦抗病毒疗效相关。

白介素4与白介素12在变应性鼻炎、哮喘和特应性皮炎中的表达及意义

目的探讨Th2型细胞因子白介素4(interleukin 4,IL-4)及Th1型细胞因子白介素12(interleukin12,IL-12)在3种常见的Ⅰ型变态反应性疾病中的表达情况及临床意义。方法采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对临床诊断为屋尘螨过敏的变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)、哮喘(bronchial asthma,BA)、特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)患者以及健康人的外周血血清IL-12、IL-4、屋尘螨特异性IgE(specific IgE,SIgE)进行检测,并对3种疾病人群的IL-12和IL-4与血清SIgE进行相关性分析。结果IL-4在AR及BA患者中显著高于正常对照组(P=0.032,P=0.041),IL-12在AR及BA患者中表达显著低于正常对照组(P=0.007,P=0.003),二者在AD中的表达与正常对照组差异无显著性。AR和BA中IL-4的表达与SIgE呈正相关(AR:r=0.522,P=0.001;BA:r=0.622,P=0.001),IL-12的表达与SIgE的表达呈负相关(AR:r=-0.436,P=0.006;BA:r=-0.499,P=0.009)。AD中IL-12及IL-4与SIgE的表达无相关性。结论AR与BA在发病机制上具有共性,而AD与另外两种疾病存在差异性。提示皮肤变应性疾病与呼吸道变应性疾病的发病存在差异。

平喘方对哮喘模型小鼠肺组织炎症及γ干扰素和白细胞介素4的影响

目的:研究1型辅助性T细胞(T helper1)/Th2(Th1/Th2)相关因子γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)在哮喘模型小鼠气道炎症进展过程中的改变以及中药平喘方对其的影响,探讨平喘方对支气管哮喘防治作用的机制。方法:80只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组及平喘方组,20只/组。除空白对照组外,其余大鼠采用卵清白蛋白致敏、激发诱导支气管哮喘,并均于致敏2周后开始灌胃,1次/d,共4周。于激发7d后和激发后2周分批处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveo larlavage fluid,BALF)和肺组织。经苏木精和伊红染色、胶原染色检测肺组织病理学改变,并进行胶原染色图像分析;酶联免疫吸附测定法检测BALF中IFN-γ及IL-4水平。结果:激发7d后:与空白对照组比较,模型组BALF中IFN-γ水平明显降低,IL-4水平明显升高;与模型组比较,两治疗组IL-4水平均明显降低,IFN-γ/IL-4比值均明显升高;两治疗组间IFN-γ、IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值比较,差异均无统计学意义。激发后2周:与空白对照组比较,模型组IFN-γ水平明显降低,而IL-4水平明显升高,IFN-γ/IL-4比值明显降低;与模型组比较,两治疗组的IL-4水平明显降低,IFN-γ/IL-4比值明显升高,且平喘方组IFN-γ水平明显升高;两治疗组间IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4比值比较,差异均无统计学意义。哮喘激发7d后及激发后2周,模型组肺组织胶原染色面积、面积与光密度乘积均较空白对照组明显增加;两治疗组细支气管壁上胶原纤维沉积较模型组明显减少,胶原染色面积与光密度乘积亦较模型组明显降低;两治疗组间胶原染色面积、面积与光密度乘积比较,差异均无统计学意义。结论:平喘方可调节哮喘模型小鼠IFN-γ、IL-4水平,改善气道炎症,抑制气道重建,疗效与地塞米松相近。

冬虫夏草对肝纤维化小鼠白细胞介素4与γ-干扰素表达的影响

目的探讨冬虫夏草抗肝纤维化作用与其调节辅助性 T 淋巴细胞免疫功能的关系。方法 CCl_4皮下注射复制 BALB/c 小鼠肝纤维化模型,虫草组在造模同时予以虫草煎剂,直至造模结束。HE 染色观察肝组织炎症,天狼猩红染色观察肝脏胶原沉积,生化法测定血清肝功能变化与肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,Western 印迹法检测肝脏白细胞介素4(IL-4)与γ-干扰素(IFN-γ)蛋白表达。结果与正常小鼠比较,肝纤维化小鼠肝脏肝静脉与汇管区周围肝细胞明显脂肪变性,血清 ALT 水平上升而白蛋白含量下降,肝脏胶原沉积,可见纤维间隔形成,肝脏 Hyp 含量、IL-4与 IFN-γ蛋白表达量均显著增加。与模型组比较,虫草组小鼠血清 ALT 水平下降、白蛋白含量上升,肝脏炎症与胶原沉积减轻,IL-4与 IFN-γ蛋白表达量明显降低。结论肝纤维化 BALB/c 小鼠的肝脏 IL-4与 IFN-γ均明显上升,虫草制剂有良好的抗肝损伤与肝纤维化作用,其作用机制与下调异常增高 Th 免疫应答有关。

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体外生物学特性及体内致瘤性的研究

观察了白细胞介素４（ＩＬ－４）基因转移的肿瘤细胞体内致瘤性的变化。构建了含５００ｂｐ的小鼠ＩＬ－４ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－４．用该表达载体将ＩＬ－４基因转移至小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及ＩＬ－４活性检测，获得了高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞克隆株并经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹鉴定，将其接种于小鼠皮下后观察到肿瘤生长缓慢、小鼠存活期延长，表明高分泌ＩＬ－４的细胞克隆株体内致瘤性显著下降。该结果为进一步研究肿瘤的ＩＬ－４基因治疗打下了基础。

猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用

目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。

干扰素白介素4在小儿肺炎支原体肺炎合胞病毒性肺炎发病中的作用

目的 探讨干扰素（ＩＦＮ－γ）、白介素４（ＩＬ－４）在小儿肺炎支原体、合胞病毒性肺炎发病中的作用。方法 采用酶联免疫吸附法对４０例肺炎支原体肺炎以及３５例呼吸道合胞病毒肺炎患儿血清γ干扰素（ＩＦＮ－γ）和白细胞介素４（ＩＬ－４）进行检测，并与２０例正常儿童对照。结果 支原体肺炎患儿血清ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４水平明显高于对照组（Ｐ＜０．０１＝，且二者呈显著的正相关（ｒ１＝０．９５８，Ｐ１＜ ０．０１＝， ＩＬ－４明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；且二者间呈显著的负相关（ｒ２＝－０．７２９６，Ｐ２＜０．０１）． 结论 细胞免疫紊乱以及免疫损伤在这二种感染的发病机制中起了一定的作用。

重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制

目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为免疫原,用纯化的rGST-BoIL-4为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIL-4的mAb。结果:获得表达BoIL-4基因的重组菌BL21(pGEX-6p-1-BoIL-4)和BL21(DE3)(pET-BoIL-4),重组蛋白相对分子质量(Mr)的大小分别为39 000和19 000,且以包涵体的形式存在。获得7株可稳定分泌抗rBoIL-4 mAb的细胞株,命名为2B8、4A10、5D6、5D8、7G10、8B7和10F8,这些mAb腹水的效价依次为5 000、160 000、10 000、640 000、5 000、40 000和40 000,mAb亚类均为IgG1。Dot-ELISA的结果表明,7株mAb只与融合蛋白rHis-BoIL-4和rGST-BoIL-4起反应,而不与其他重组细胞因子和对照细菌起反应,显示出良好的特异性。Western blot试验显示,7株mAb均能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带。同时7株mAb均能与BoIL-4的标准品起反应。结论:7株抗rBoIL-4的mAb均具有高度的特异性,为进一步研究其在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础。

藏猪白细胞介素4基因cDNA的克隆及序列分析

目的 :克隆藏猪白细胞介素 4基因cDNA。方法 :从体外ConA刺激 70小时的藏猪外周血淋巴细胞中提取总RNA ,应用RT PCR技术扩增 ,pMD T载体连接 ,常规转化后 ,进行酶切及序列测定进行鉴定。结果 :研究表明克隆得到的IL 4基因cDNA与成华猪的IL 4同源性达到 99% ,与长白杂交猪的同源率为 98%。结论 :从藏猪外周血淋巴细胞中成功地分离到IL 4基因。