从心论治方上调PI3K/Akt磷酸化减轻HUVEC炎症损伤的体外实验研究

目的探讨从心论治方对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用机制。方法细胞随机分为对照组、模型组(100μg/mL ox-LDL干预24 h)、从心论治方含药血清不同浓度组(预先用2.5%、5%、10%、20%药物血清孵育2 h,再加入100μg/mL ox-LDL干预24 h);CCK-8法检测细胞活力;eGFP Annexin V染色检测细胞凋亡;ELISA检测细胞炎症因子核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)与白细胞介素-10(IL-10)水平;Western blotting检测细胞内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)以及p-Akt的表达量;收集细胞培养液,按照相应试剂盒分别检测细胞还原型谷胱甘酸(GSH)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果与对照组相比,模型组细胞凋亡增多,LDH含量显著增加,NF-κB和TNF-α水平升高,同时TGF-β与IL-10水平降低,PI3K表达量及Akt磷酸化降低。与模型组比较,含药血清各组细胞凋亡率降低,LDH、NF-κB和TNF-α水平降低,GSH、TGF-β、IL-10与p-Akt水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论从心论治方可能通过PI3K/Akt信号通路减轻ox-LDL诱导的HUVEC细胞炎症损伤。

从心论治方对ApoE^-/-小鼠血脂和肠道菌群的影响

目的探讨从心论治方对APOE基因敲除(ApoE^-/-)小鼠血脂和肠道菌群的影响。方法将36只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为6组:模型组、对照组、辛伐他汀组,从心论治方高、中、低组。高脂饲料喂养12周制备高脂血症小鼠模型,进行药物处理;检测小鼠血脂水平;油红染色观察肝脏组织学变化;16s rDNA高通量测序检测小鼠肠道菌群组成和结构。结果模型组小鼠血脂水平明显升高,肝脏出现明显脂肪变性,肠道菌群结构紊乱。给药组小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均降低(P<0.01,P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平升高(P<0.05),肝脏脂肪变性情况缓解。从心论治方组小鼠肠道菌群中厚壁菌门与拟杆菌门的比例降低,菌群多样性增加,肠道菌群失调得到改善。结论从心论治方能调节高脂喂养ApoE^-/-小鼠血脂水平,改善肝脏脂肪变性情况,改变肠道菌群组成结构。

从心论治方改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化及上调ACE2蛋白表达

目的探讨从心论治方(CXLZF)对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)损伤的作用机制。方法采用高脂饮食喂养ApoE^(-/-)小鼠12周建立AS模型,随机分为模型组,CXLZF低(4.5 g·kg^(-1)·d^(-1))、中(9 g·kg^(-1)·d^(-1))、高(18 g·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,辛伐他汀(5 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,同时以普通饮食喂养C57BL/6小鼠作为对照组,6只/组。各组小鼠给予相应药物灌胃,对照组、模型组灌胃等体积生理盐水,干预12周。分别采用油红O、Masson、HE染色法观察斑块及肝脏病变情况,检测血脂、血糖及肝功指标;Westernblotting法检测血管紧张素转换酶2(ACE2)、E-选择素(E-selectin)蛋白表达,免疫荧光法对ACE2蛋白表达进行定位。在体外,以CXLZF灌胃SD大鼠制作含药血清、生理盐水灌胃大鼠制作对照血清后,采用100μg/m Lox-LDL干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立细胞损伤模型,CXLZF含药血清(5%、10%、20%)干预人脐静脉内皮细胞,对照组、模型组细胞给予10%对照血清。检测细胞ACE2表达。结果CXLZF低、中、高剂量干预均有效缩小AS小鼠主动脉斑块面积,增加斑块稳定性;同时,CXLZF干预显著降低AS小鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平(P<0.05),高剂量组降脂效果最佳;CXLZF干预还可降低AS小鼠血清天门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶含量(P<0.05)、改善肝脏脂肪变性。CXLZF干预显著上调AS小鼠主动脉ACE2、下调E-selectin表达(P<0.05)。细胞实验中,CXLZF含药血清(5%、10%、20%)显著上调氧化低密度脂蛋白干预人脐静脉内皮细胞的ACE2表达(P<0.05)。结论CXLZF可有效减轻小鼠AS损伤,可能与调控ACE2蛋白有关。