犬乳腺肿瘤他莫昔芬耐药细胞中差异表达circRNAs的筛选与分析

【目的】筛选和分析环状RNA(circRNA)在犬乳腺肿瘤(CMGT)耐药中的作用,为肿瘤诊断和治疗提供新靶点。【方法】以CMGT细胞CHMm作为研究对象,首先通过浓度梯度法和浓度维持法构建CMGT他莫昔芬(TAM)耐药细胞系,然后采用CCK-8法检测CMGT细胞对TAM的敏感性,最后通过高通量测序技术筛选耐药细胞中差异表达的circRNAs,通过GO功能和KEGG信号通路分析其可能参与的生物过程。【结果】经过TAM持续刺激,CHMm形态变为长梭形,半数抑制浓度(IC 50)由4.07提高至13.75μmol/L,说明耐药细胞展现更强TAM抗性。测序结果显示,耐药细胞中差异表达的circRNAs 46个,GO功能分析涉及肿瘤细胞外基质、蛋白质类泛素化、细胞黏附和细胞迁移等过程,主要信号通路为Notch、Rap1、ErbB、FoxO和PI3K等通路。【结论】本研究成功构建犬乳腺肿瘤TAM耐药细胞系CHMm TAM,耐药细胞展现更强的增殖能力和TAM抗性。高通量筛选了亲本和耐药细胞中差异表达的circRNAs,耐药性产生可能通过Notch、Rap1和ErbB通路影响细胞信号转导、细胞泛素化、细胞转移等生物学过程,最终参与肿瘤耐药。

三黄煎剂降低ROS促进乳腺癌他莫昔芬耐药细胞凋亡的实验研究

目的探讨三黄煎剂对MCF-7他莫昔芬耐药(MCF-7/TAMR)细胞ROS水平和凋亡的影响。方法建立MCF-7/TAMR细胞系,采用CCK-8法检测他莫昔芬对乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/TAMR增殖的影响,并检测耐药指数;同时检测三黄煎剂对MCF-7/TAMR增殖的影响。免疫荧光法评价MCF-7、MCF-7/TAMR及各给药组的ROS的水平;流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡情况;Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7/TAMR细胞凋亡相关蛋白表达对的影响。结果成功构建了MCF-7/TAMR细胞株,不仅在形态上发生了改变,而且对他莫昔芬的抵抗能力得到了增强,其RI指数为(3.61±0.35)(P<0.05),三黄煎剂对MCF-7/TAMR细胞株有明显的抑制作用,IC50值为(4.28±0.06)mg/m L,能够降低耐药细胞株的ROS水平,同时能够下调MCF-7/TAMR细胞的Bcl-2活性,上调Ba X/Bak,促使MCF-7/TAMR细胞产生凋亡。结论三黄煎剂通过降低乳腺癌MCF-7TAMR细胞内的ROS水平,抑制乳腺癌MCF-7TAMR细胞增殖并促进乳腺癌MCF-7TAMR细胞凋亡。

SUMO E3连接酶介导雄激素受体的转录促进乳腺癌他莫昔芬耐药

目的:探讨SUMO化的雄激素受体(androgen receptor,AR)参与他莫昔芬耐药的机制以及SUMO抑制剂银杏酸在耐药中的作用。方法:通过Real-Time PCR检测亲本细胞MCF-7W和耐药细胞MCF-7R中AR mRNA水平,Western blot检测MCF-7W和MCF-7R细胞中AR蛋白水平以及SUMO水平,免疫沉淀和染色质免疫沉淀(CB/IP)检测MCF-7R细胞染色质中AR与SUMO E3连接酶PIAS1、HSP27相互作用,荧光报告基因实验检测SUMO化AR的转录活性,CCK-8法、台盼蓝拒染法分别检测细胞活性和细胞活力。结果:MCF-7R细胞中AR的mRNA和蛋白表达水平表达量明显高于MCF-W7细胞(P<0.05),并且MCF-7R细胞中显示高SUMO化的AR;进一步研究发现MCF-7R细胞染色质中AR与SUMO E3连接酶PIAS1、HSP27存在明显相互作用,即SUMO化的AR是由E3连接酶修饰的;双荧光素酶报告基因试剂盒检测发现雄激素R1881呈浓度依赖性增强SUMO化的AR的转录活性;与单用银杏酸相比,10μmol/L银杏酸联合10μmol/L恩杂鲁胺治疗处理MCF-7R细胞3 d后,细胞数明显降低,细胞死亡数明显增加(P<0.05)。结论:他莫昔芬耐药机制可能是由于高活性SUMO化的AR使AR转录增强、活性增高,SUMO抑制剂银杏酸联合AR拮抗剂恩杂鲁胺可成为治疗他莫昔芬耐药的新策略。

解毒祛瘀方通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路逆转乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的机制研究

目的探讨解毒祛瘀方通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的逆转作用及机制。方法采用低浓度逐步加量诱导法建立乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株MCF-7C,并分为空白对照组、解毒祛瘀方(2.5 g/L)组、他莫昔芬(10μmol/L)组、他莫昔芬(10μmol/L)+解毒祛瘀方(2.5 g/L)组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)(10μg/L)+他莫昔芬(10μmol/L)+解毒祛瘀方(2.5 g/L)组。采用噻唑蓝法验证MCF-7C细胞的耐药性、解毒祛瘀方的细胞毒性以及对MCF-7C细胞他莫昔芬耐药性的影响。利用流式细胞术检测细胞凋亡率。利用蛋白质印迹法检测各组MCF-7C细胞中PI3K/Akt/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白的表达。结果 MCF-7C细胞对他莫昔芬的耐药指数为7.20;而经解毒祛瘀方(2.5 g/L)协同作用后,MCF-7C细胞对他莫昔芬的耐药指数为2.02。他莫昔芬+解毒祛瘀方组MCF-7C细胞凋亡率明显高于他莫昔芬组[(56.72±7.25)%比(13.24±0.76)%],同时p-PI3K[(0.37±0.06)比(0.68±0.07)]、p-Akt[(0.17±0.02)比(0.51±0.05)]、p-mTOR[(0.10±0.02)比(0.39±0.02)]蛋白表达量也明显低于他莫昔芬组(均P <0.05)。而加入PI2K/Akt通路激活剂IGF-1后,IGF-1+他莫昔芬+解毒祛瘀方组MCF-7C细胞增殖抑制率和凋亡率较他莫昔芬+解毒祛瘀方组均明显降低(均P <0.05)。结论解毒祛瘀方可逆转乳腺癌细胞他莫昔芬的耐药性,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路活化有关。

基于GEO及TCGA数据库建立乳腺癌他莫昔芬耐药相关预后模型

目的通过生物信息学的方法,构建并验证预测雌激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬治疗预后的长链非编码RNA(lncRNA)模型。方法利用基因表达综合(GEO)数据库提取雌激素受体阳性乳腺癌芯片测序数据,并从中下载他莫昔芬耐药及敏感细胞系的lncRNA表达数据集,通过单因素和多因素Cox回归分析构建预后模型。根据模型计算风险比(HR),分析高危组、低危组的临床病理参数与预后的关系,并用验证集样本对训练集的结果进行验证。结果在GEO数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库对他莫昔芬敏感与他莫昔芬耐药乳腺癌患者的差异lncRNA进行比对筛选,最终获得116个差异lncRNA。对差异lncRNA进行单因素Cox回归分析,计算每个lncRNA与乳腺癌患者总生存率的HR及P值,最终得到8个相关的lncRNA(P<0.05)。通过多因素Cox回归分析最终建立由6个lncRNA组成的预后模型。按照训练集中HR的中位数将训练集及验证集中的患者分为高危组、低危组,Log-rank检验结果发现,高危组与低危组在训练集和验证集中的生存率差异均有统计学意义(P=7×10^(-7)、0.008)。结论乳腺癌他莫昔芬耐药相关预后模型6个lncRNA对雌激素受体阳性乳腺癌患者预后具有一定价值,可为逆转他莫昔芬耐药、治疗癌症的研究提供依据。

抑癌基因LKB1与乳腺癌他莫昔芬耐药性之间的关系

目的:研究抑癌基因LKB1对乳腺癌他莫昔芬耐药的影响及机制。方法:运用免疫组化技术对68例乳腺癌组织中LKB1、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达进行检测,并且利用GEPIA数据库验证实验结果;利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析LKB1基因与ER/PR阳性的Luminal A/B亚型乳腺癌预后之间相关性;运用实时定量PCR、免疫印迹和免疫荧光技术分析LKB1在他莫昔芬耐药细胞系中的表达及定位;运用免疫印迹和免疫荧光技术分析他莫昔芬对LKB1表达及定位的影响。结果:在乳腺癌中LKB1与ER/PR的表达呈现显著的正相关性,ER/PR(+++)和ER/PR(+)两组间LKB1的表达差异具有显著的统计学意义(P<0.001);LKB1的表达量与乳腺癌预后呈现正相关性,在Luminal A/B亚型的乳腺癌中LKB1表达越低其预后越差;在他莫昔芬耐药细胞系及对照细胞中LKB1的mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义,但是在耐药细胞中LKB1的定位发生了从细胞质向细胞核的移行;在体外他莫昔芬能够诱导LKB1表达并且促进LKB1从细胞质向细胞核的移行。结论:在Luminal A/B亚型的乳腺癌中,LKB1的低表达是一种不良预后的指标,并且该蛋白从细胞质向细胞核的移行与乳腺癌他莫昔芬耐药密切相关,而耐药与蛋白的表达量无关。

IL-6经MEK/ERK途径促进ERα-Ser118磷酸化影响卵巢癌细胞他莫昔芬耐药

目的研究IL-6信号通路对ERα的Ser118位点磷酸化影响、对ERα转录活性的影响及IL-6诱导卵巢癌TAM耐药的机制。方法脂质体转染法获得内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞株和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌CAOV3细胞株,Western blot法检测内源性和外源性IL-6对ERK和ERα的Ser118位点磷酸化影响,MTT法检测IL-6的MEK/ERK信号通路对A2780细胞TAM耐药性的影响,荧光素酶活性检测IL-6的MEK/ERK信号通路对ERα转录活性的影响。结果过表达IL-6能上调A2780细胞中ERα-Ser118的磷酸化水平,而抑制IL-6表达下调CAOV3细胞中ERα-Ser118的磷酸化水平;外源性IL-6上调A2780细胞中ERK的磷酸化水平,而MEK1/2特异性抑制剂PD98059则可以逆转IL-6介导的ERK及ERα-Ser118的磷酸化;PD98059可明显降低IL-6导致的A2890细胞对TAM的耐药性;IL-6明显促进ERα转录活性,而PD98059可逆转这一作用。结论 IL-6经MEK/ERK通路磷酸化ERα的Ser118位点促进ERα转录活性而激活ER途径,诱导OVCA细胞对TAM的耐药性。

miR-21通过调控PTEN介导乳腺癌他莫昔芬耐药的作用机制

目的:研究miR-21在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用,寻求逆转他莫昔芬耐药的靶点。方法:荧光实时定量PCR(RT-QPCR)检测乳腺癌MCF-7细胞与乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株MCF-7/TAM细胞中miR-21的表达;将miR-21 mimics转染到MCF-7细胞内,将miR-21 inhibitors转染到MCF-7/TAM细胞内,并应用RT-QPCR分别检测细胞内miR-21的表达变化,给予细胞4-羟他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen,OHT)处理后,利用MTT法检测细胞增殖的变化;转染MCF-7/TAM细胞miR-21 inhibitors及mimics,利用RT-QPCR检测细胞中PTEN的表达变化。结果:miR-21在MCF-7/TAM细胞表达高于MCF-7细胞,转染miR-21 mimics的MCF-7细胞miR-21高表达,PTEN表达降低,转染miR-21 inhibitors的MCF-7/TAM细胞miR-21表达降低,PTEN表达增高;过表达miR-21的MCF-7细胞给予OHT处理后,细胞的增殖抑制不明显,而沉默miR-21的MCF-7/TAM细胞给予OHT处理后,细胞增殖明显受到阻滞;转染耐药细胞miR-21 inhibitors后,PTEN表达增高,转染miR-21 mimics后,PTEN表达降低。结论:miR-21通过调控PTEN的表达在乳腺癌TAM耐药中发挥重要作用。

基于基因表达谱筛选乳腺癌他莫昔芬耐药的生物标志物与治疗药物

目的:利用基因表达谱和关联性图谱数据库筛选乳腺癌他莫昔芬耐药的潜在生物标志物和治疗药物。方法:在GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中筛选得到他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞基因表达谱数据集GSE67916和GSE26459,利用R语言和Bioconductor包筛选差异表达基因。Metascape对差异表达基因进行功能注释,Cytoscape构建差异表达基因编码蛋白互相作用网络图并确定核心基因。利用数据集GSE9893验证核心基因在他莫昔芬耐药患者中的表达及与临床预后的关系。最后将差异表达基因导入关联性图谱数据库筛选他莫昔芬耐药的候选治疗药物并进行细胞实验验证。结果:共获得差异表达基因462个,这些基因显著富集于雄激素响应、糖酵解和胆固醇平衡等通路。ATP-柠檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACLY)为乳腺癌他莫昔芬耐药的核心基因,ACLY在耐药患者中的表达水平显著高于敏感患者(P<0.05),ACLY低表达患者无复发生存率显著高于高表达患者(P<0.05)。最终筛选得到匹莫齐特、LY-294002等10种候选治疗药物,经证实LY-294002可有效抑制耐他莫昔芬乳腺癌细胞的增殖。结论:ACLY可作为他莫昔芬耐药的生物标志物。利用基于关联性图谱数据库可快速筛选出他莫昔芬耐药的潜在治疗药物。

双特异性磷酸酶1在乳腺癌及他莫昔芬耐药病例中的表达变化

目的初步探讨双特异性磷酸酶1(DUSP1)在乳腺癌患者以及乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药患者中的表达变化及其与临床预后的关系。方法使用TCGA数据库分析DUSP1在1 215名不同临床病理特点的乳腺癌患者中的分布和表达情况,使用生存分析数据库分析DUSP1表达水平与乳腺癌患者生存情况的关系;收集8例乳腺癌TAM耐药前后的配对标本进行免疫组化染色,分析DUSP1在耐药前后肿瘤标本中蛋白表达的变化情况。结果 DUSP1在乳腺癌组织中的表达水平显著低于正常乳腺组织(P<0.001),且在Luminal A亚型中的表达高于其他亚型(P<0.001);DUSP1的表达水平与乳腺癌患者的总生存(P<0.05)和无复发生存(P<0.001)呈正相关,与接受内分泌治疗的乳腺癌患者的无复发生存呈正相关(P<0.001);DUSP1在8例TAM耐药患者的配对标本中表达变化未见统计学差异(P>0.05)。结论在接受内分泌治疗的患者中DUSP1高表达的患者有更好的无复发生存,但是在8例配对标本的检测中未发现DUSP1的表达差异有统计学意义。提示DUSP1与TAM耐药之间关系的探索有待更大样本的临床研究和更深入的细胞和分子生物学实验。

雄激素受体在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用和机制研究进展

他莫昔芬(tamoxifen,TAM)为人工合成的非甾体类抗雌激素药物,被普遍的应用于雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌患者中。但大约一半的ER阳性的患者会出现耐药。可见内分泌耐药是当前临床迫切需要解决的问题。随着对耐药机制的深入研究:发现雄激素受体(androgen receptor,AR)在72.9%的原发性乳腺癌病例中表达,并在约65%的乳腺癌中与ER同时表达。有研究显示:AR/ER越高预示着TAM治疗率越低;AR与人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)之间所形成的正反馈循环能够增加TAM耐药;AR、髓样细胞白血病-1蛋白(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)与TAM耐药有可能相关。所以探讨AR在TAM耐药中的作用和机制是非常有意义的。为乳腺癌的靶向治疗掀开了新的一页。

基于差异基因网络特性探究乳腺癌他莫昔芬耐药的关键标志物

他莫昔芬适用于绝经前或绝经后的患者,能有效降低雌激素受体阳性(estrogen receptor positive,ER+)患者的死亡率和复发率,目前仍然是乳腺癌内分泌治疗的基础用药,然而在临床应用中已经发现约半数患者出现原发或继发性他莫昔芬耐药.因此,鉴定有效的他莫昔芬耐药关键基因将为TAM治疗ER+的乳腺癌患者提供重要的参考价值.本文首先联合Cancer Cell Line Encyclopedia(CCLE)数据库中的乳腺癌细胞系表达谱和STRING数据库中人类蛋白相互作用数据,得到了基于乳腺癌的蛋白互作(breast cancer-based PPI,B_PPI)网络.再通过walktrap算法对B_PPI网络中的基因进行聚类分析,产生不同大小的群落.同时,收集并分析GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中与他莫昔芬耐药相关的乳腺癌转录组数据,从而得到表达差异基因.再用reciprocal best-hit方法对群落与表达差异基因进行相似性分析找出与他莫昔芬耐药相关的群落.依据群落的功能特性和差异基因网络特性筛选耐药核心基因.最后选用核心基因STAT1和CDH1作为示例,探究基因表达情况与预后的关系.构建了包含7904个基因和213422个连接数的乳腺癌蛋白互作网络.经预后标记物验证发现CW4、CW5、CW13、CW21和CW33群落(共3863个基因)与他莫昔芬耐药相关,且CW5的显著性最高.功能分析发现CW5中基因参与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路.选取前5个具有高节点度的表达差异基因STAT3、STAT1、CDH1、EGR1和PRKCA作为TAM耐药的核心基因,并通过他莫昔芬治疗后预后数据及文献证据验证核心基因表达与他莫昔芬耐药密切相关.耐药核心基因的表达情况与他莫昔芬治疗ER+乳腺癌患者的疗效关系密切.表达差异基因网络特性可以用于筛选乳腺癌他莫昔芬耐药的关键基因.

Gαs在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用

目的:研究Gαs在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用,寻求逆转乳腺癌他莫西芬耐药的分子靶点。方法:通过RNA干涉技术沉默乳腺癌他莫昔芬耐药(TAM-R)细胞中Gαs的表达,QPCR及Western blot检测其沉默效果,给予细胞4-羟他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen,OHT)处理,通过MTT检测Gαs表达改变对耐药细胞增殖的影响,并检测细胞中AKT磷酸化水平。结果:Gαs-RNAi可以有效沉默Gαs在mRNA及蛋白水平的表达,而沉默Gαs的他莫昔芬耐药细胞给予4-羟他莫昔芬10 nmol/L处理后,细胞增殖明显受到阻滞,AKT磷酸化水平明显降低。结论:Gαs通过诱导AKT磷酸化在乳腺癌他莫昔芬耐药中发挥着重要作用。

热休克蛋白90α激活PI3K/Akt通路介导乳腺癌他莫昔芬耐药的机制研究

目的:探讨乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药的潜在机制。方法:筛选乳腺癌细胞HCC1937和MCF7的抗性细胞系(HCC1937/TR和MCF7/TR细胞)。TAM处理后,通过高通量测序和siRNA筛选鉴定乳腺癌细胞TAM耐药的关键分子。结果:高通量测序发现TAM可影响多个基因的表达水平。当敲低HSP90α时,HCC1937/FR细胞凋亡水平升高(P<0.05)。过表达HSP90α后,HCC1937/TR和MCF7/TR细胞凋亡水平显著降低(P<0.05)。敲低HSP90α后,MCF7/TR细胞凋亡水平显著升高(P<0.05)。在HCC1937和MCF7细胞中过表达HSP90α后用TAM处理,HCC1937和MCF7显示出对TAM抑制增殖的抵抗(P<0.05)。敲低HSP90α后,PI3K/Akt通路受到抑制。过表达HSP90α后,PI3K/Akt通路激活。PI3K/Akt通路抑制剂Pectolinarin或Miltefosine处理后再以TAM处理,HCC1937/TR和MCF7/TR细胞凋亡水平显著升高(P<0.05)。TAM处理后,MCF7/TR和HCC1937/TR细胞中miR-5003-3p表达水平降低(P<0.05)。在HCC1937/TR和MCF7/TR细胞中,过表达miR-5003-3p后HSP90α表达水平降低(P<0.05);敲低miR-5003-3p后,HSP90α表达水平升高(P<0.05)。TAM处理后过表达miR-5003-3p,HCC1937和MCF7细胞凋亡水平升高(P<0.05);TAM处理后敲低miR-5003-3p,HCC1937和MCF7凋亡水平降低(P<0.05)。此外,敲低miR-5003-3p后,PI3K/Akt通路激活。过表达miR-5003-3p后PI3K/Akt通路受到抑制。结论:在受到持续化疗药物TAM处理后,乳腺癌细胞HCC1937和MCF7中靶向HSP90αmRNA的miR-5003-3p表达水平降低,HSP90α表达水平升高可激活PI3K/Akt通路,最终引起乳腺癌细胞对TAM耐药。

微小RNA-122在人乳腺癌组织中的表达及对体外培养人乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的影响

目的探讨微小RNA-122(miR-122)在人乳腺癌组织中的表达及对体外培养人乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的影响。方法收集2015年1-6月河北省保定市第二中心医院行乳腺切除术的56例Luminal型乳腺癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法检测miR-122表达量。所有患者规范口服他莫昔芬3年,按照实体瘤疗效评价标准划分为他莫昔芬敏感者和他莫昔芬耐药者。体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,他莫昔芬长期浓度梯度递增法体外建立MCF-7TamR耐药细胞株;转染miR-122抑制剂(抑制剂组),采用噻唑蓝(MTT)法检测他莫昔芬对MCF-7细胞、MCF-7TamR细胞以及抑制剂组MCF-7TamR细胞增殖活性的影响。采用q PCR法检测雌激素受体α(ER-α)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3) mRNA表达。采用蛋白质印迹法检测ER-α、HER-2、细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)、磷酸化ERK-MAPK(p-ERK/MAPK)蛋白表达。结果乳腺癌组织中miR-122相对表达量明显高于癌旁组织[(0. 70±0. 38)比(0. 24±0. 10)],他莫昔芬耐药患者(11例)肿瘤组织中miR-122相对表达量明显高于敏感患者(45例)[(0. 89±0. 13)比(0. 67±0. 15)](均P <0. 001)。体外成功建立MCF-7TamR耐药细胞株,不同浓度他莫昔芬(0. 1、0. 5、2. 5、12. 5、62. 5、312. 5μmol/L)对MCF-7TamR细胞的增殖抑制率分别均明显低于MCF-7细胞(均P <0. 05);MCF-7TamR细胞的耐药指数为4. 97。转染miR-122抑制剂后,抑制剂组MCF-7TamR细胞miR-122表达量为(0. 14±0. 04),明显低于空白对照组[CTL组:(0. 67±0. 09)]和空转染组[NC组:(0. 65±0. 08)](均P <0. 001)。不同浓度他莫昔芬对抑制剂组MCF-7TamR细胞的增殖抑制率明显高于CTL组和NC组(均P <0. 05)。经q PCR法,抑制剂组MCF-7TamR细胞ER-αmRNA表达量为(1. 02±0. 17),明显高于CTL组和NC组;HER-2和MAPK3 mRNA表达量为(0. 37±0. 09)和(0. 25±0. 07),明显低于CTL组和NC组(均P <0. 05)。经蛋白质印迹法,抑制剂组MCF-7TamR细胞ER-α蛋白表达量为(0. 91±0. 18),明显高于CTL组和NC组;HER-2和p-ERK/MAPK蛋白表达量为(0. 24±0. 09)和(1. 15±0. 26),明显低于CTL组和NC组(均P <0. 05)。结论乳腺癌组织中miR-122表达增高,下调miR-122可明显逆转乳腺癌MCF-7TamR耐药细胞对他莫昔芬的抗性,并抑制MCF-7TamR细胞增殖,其机制可能与阻断ERK/MAPK信号通路,提高ER表达有关。

CRB3诱导乳腺癌他莫昔芬耐药细胞LCC2凋亡的机制研究

目的:探讨细胞极性蛋白CRB3诱导乳腺癌他莫昔芬耐药细胞LCC2凋亡的作用机制。方法:运用免疫组织化学和WesternBlot技术分析CRB3在乳腺癌他莫昔芬耐药组织和细胞中的表达情况,流式技术和Western Blot观察CRB3对乳腺癌耐药细胞LCC2凋亡的影响及分子机制。结果:IHC结果证实,CRB3在乳腺癌他莫昔芬耐药组织中表达降低(P=0.004),Western Blot结果也显示CRB3在LCC2中表达较对照细胞MCF7表达降低;流式结果显示CRB3过表达引起LCC2的凋亡增加(P<0.05),Western Blot结果显示CRB3过表达引起LCC2的caspase3的活化增加,促凋亡因子Bax表达水平升高。抑凋亡因子Bcl2表达水平降低。结论:CRB3可通过激活caspase3途径诱导LCC2细胞的凋亡,以期成为乳腺癌他莫昔芬耐药预测和治疗的靶标。

乳腺癌他莫昔芬耐药相关基因及通路的筛选

目的:利用美国国家生物技术信息中心基因表达数据库中雌激素受体阳性乳腺癌表达谱芯片进行生物信息学分析,筛选他莫昔芬耐药的关键基因和信号通路。方法:利用基因芯片GSE26459,R软件分析得到差异基因,DAVID进行Gene Ontology和KEGG富集分析,STRING绘制蛋白作用网络。GSEA富集分析得到耐药相关通路及基因。结合蛋白作用网络筛选目标基因并验证。结果:筛选出差异基因1 516个,上调基因505个,下调基因624个。通路富集分析发现脂肪酸代谢通路、细胞粘附、胰岛素抵抗等信号通路在乳腺癌的他莫昔芬耐药中起重要作用,并在富集通路中筛选出ACSL1等候选目标基因并验证。结论:利用生物信息学有效分析他莫昔芬耐药的基因芯片数据,为他莫昔芬耐药的治疗靶点提供重要依据。

表观遗传修饰-他莫昔芬耐药机制研究的新方向

他莫昔芬(tamoxifen,TAM)为人工合成的非甾体类抗雌激素药物,被广泛用于雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌患者的治疗。但是仍有约40%的ER阳性乳腺癌患者对TAM产生继发性耐药。目前对TAM耐药机制研究众多,而表观遗传学是最新的研究方向。在本综述中,我们将从表观遗传调控方面阐述当前对TAM耐药机制研究的新进展,以便更好地了解TAM耐药,并为乳腺癌治疗提供新的策略。

生物信息学技术筛选乳腺癌他莫昔芬耐药关键基因及相关通路分析

目的 应用生物信息学技术筛选乳腺癌他莫昔芬耐药关键基因并分析相关通路,为预测乳腺癌潜在治疗靶点奠定基础。方法 选取NCBI-基因表达综合数据库(GEO)中的基因表达芯片“GSE67916”和“GSE96670”,利用GEO2R在线分析工具对乳腺癌他莫昔芬耐药样本和敏感样本中的差异基因进行筛选。利用DAVID和KOBAS在线工具对差异基因进行GO分析和KEGG分析。使用蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析STRING数据库构建靶点互作网络模型。结果 筛选了132个差异基因,包括103个上调基因和29个下调基因,通过Cytoscape确定4个关键基因:IFI27、IRF9、OAS1、ISG15。GO分析显示差异基因主要参与细胞黏附、细胞质外泌体、蛋白结合功能。KEGG分析显示差异基因主要参与内吞作用、癌蛋白多糖、雌激素信号通路。结论 乳腺癌他莫昔芬耐药与IFI27、IRF9、OAS1、ISG15有关,其可作为乳腺癌治疗的潜在靶点。

基于芯片数据的雌激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药相关基因分析

目的:从分子水平揭示激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药的机制,并寻找潜在的治疗他莫昔芬耐药的靶点。方法:从公共基因芯片表达数据库(GEO)中下载雌激素受体阳性乳腺癌的相关基因芯片数据GSE67916,利用GEO2R在线分析工具筛选他莫昔芬耐药性与敏感性乳腺癌的差异表达基因;并利用DAVID软件对所筛选差异表达基因进行相关功能及通路富集分析;通过STRING、Cytoscape等工具对其进行蛋白间相互作用网络的构建和分析。结果:筛选出438个差异表达基因,其中300个上调表达基因,138个下调表达基因。GO功能分析发现这些差异基因主要参与蛋白结合、细胞对雌激素的反应、免疫应答、细胞质及细胞外基质等分子功能及生物学过程;KEGG通路富集分析显示主要富集在MAPK信号通路和HIF-1信号通路等。STRING、Cytoscape分析显示MAPK1、ESR1、SMARCA4、RANBP2和PRKCA为潜在的关键节点基因,对其进行文献挖掘及分析显示与激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药相关。结论:利用生物信息学方法对他莫昔芬耐药与他莫昔芬敏感的雌激素受体阳性乳腺癌的差异表达基因分析,可有效发掘这些差异表达基因的相互作用,为雌激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药寻找新的治疗靶点提供新方向。