基于UPLC-QQQ-MS技术的仙灵脾颗粒体内药代动力学研究

目的 研究仙灵脾颗粒中主要成分在大鼠血浆内的药代动力学及整合药代动力学行为,以探讨其长期临床用药时间间隔的合理性。方法 取12只雄性SD大鼠,随机分组后给予给药组大鼠仙灵脾颗粒8.1 g/(kg·d),连续给药7 d后,于给药前及给药后0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12 h大鼠眼眶后静脉丛取血0.5 mL,通过UPLC-QQQ-MS技术测定大鼠血浆内不同时间点淫羊藿属苷A、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、淫羊藿次苷Ⅰ及宝藿苷Ⅰ的血药浓度,并分别赋予8个成分抗骨质疏松药效权重系数进行整合,采用DAS 3.2.8软件计算血浆药代动力学参数并得到血药浓度-时间曲线。结果 大鼠连续多次给药后,8种成分在血浆内的药代动力学参数:t_(max)均为0.5 h,C_(max)为1.36~48.76ng·mL^(-1),t_(1/2)为8.50~81.40 h,AUC_(0~t)为14.52~138.19 ng·mL^(-1)·h,MRT_(0~t)为3.27~5.96 h;扣除0 h时间点血药浓度后所有成分在血浆内的药代动力学参数:t_(max)均为0.5 h,C_(max)为0.18~40.37 ng·mL^(-1),t_(1/2)为1.00~3.00 h,AUC_(0~t)为0.40~37.49 ng·mL^(-1)·h,MRT_(0~t)为1.51~4.41 h;8种成分赋予抗骨质疏松药效权重后,整合药代动力学参数:t_(max)=0.5h、t_(1/2)=(1.92±0.42)h。结论 通过对仙灵脾颗粒血浆内药代动力学进行研究,阐明了其临床给药时间间隔的合理性,同时为仙灵脾颗粒抗骨质疏松药效物质基础研究提供依据及参考。

基于网络药理学和分子对接探究国医大师王永钧经验方黄芪仙灵脾汤治疗IgA肾病的作用机制

目的:运用网络药理学和分子对接方法探究黄芪仙灵脾汤治疗免疫球蛋白A(IgA)肾病的作用机制。方法:在TCMSP数据库中收集黄芪仙灵脾汤各中药的活性成分及其蛋白作用靶点,通过UniProt数据库转化为基因靶点;在GeneCards、OMIM数据库中获取IgA肾病相关靶点;将黄芪仙灵脾汤与IgA肾病的交集基因,利用Cytoscape软件进行药物-成分-靶点网络构建及分析,筛选核心靶点及主要活性成分;通过STRING数据库获取蛋白相互作用(PPI)网络关系数据,用Cytoscape软件绘制出PPI网络图并进行网络拓扑学分析;通过R语言对核心靶点进行基因本体(GO)分析、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,筛选出具有显著性差异的的生物学过程及信号通路,并构建靶点-信号通路网络;最后通过AutoDockTools软件,对重要的化学成分和靶点分子进行分子对接。结果:获得黄芪仙灵脾汤药物靶点与IgA肾病靶点的交集共63个。槲皮素、山柰酚、木犀草素等是黄芪仙灵脾汤的主要活性成分,白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)等是其关键靶点,在糖尿病并发症中的作用(AGE−RAGE signaling pathway in diabetic complications)、流体剪切应力和动脉粥样硬化(fluid shear stress and atherosclerosis)、脂质和动脉粥样硬化(lipid and atherosclero⁃sis)等是关键通路。关键活性成分与关键靶点的对接亲和力介于-8.4~-7.0 kcal/mol。结论:本研究初步验证了黄芪仙灵脾汤治疗IgA肾病的药理学作用机制,揭示黄芪仙灵脾汤治疗IgA肾病具有多成分、多靶点的作用特点。

基于全时段多波长融合特征定量指纹图谱的满药仙灵脾颗粒质量控制方法研究

目的建立全时段多波长融合特征定量指纹图谱,为仙灵脾颗粒质量控制提供科学依据。方法选取270 nm、327 nm、353 nm 3个波长,建立10批仙灵脾颗粒的高效液相(HPLC)指纹图谱,确定18个共有峰,通过对照品指认出8个成分;指纹图谱与多指标成分含量测定结合,建立全时段多波长融合特征定量指纹图谱,并将8个成分进行相对于内标物柚皮苷的含量测定;同时选取5个批次的仙灵脾颗粒,对其8个成分进行绝对定量,确定建立的含量测定方法的误差率。结果建立了全时段多波长融合特征定量指纹图谱,运用其对仙灵脾颗粒指认出的成分进行相对定量,其结果与绝对定量相比,误差率小于5%。结论所建立的方法准确可靠,可用于仙灵脾颗粒的质量控制,并为中药复方的质量评价提供参考。

仙灵脾减轻外源性糖皮质激素抑制神经内分泌免疫作用的临床与实验研究

目的：研究仙灵脾对外源性糖皮质激素抑制下丘脑－垂体－肾上腺－胸腺（ＨＰＡＴ）轴作用的保护效应。方法：临床选择需用强的松治疗的患者６５例，随机分为复方强的松组（强的松与仙灵脾合方）与强的松组，观察用药前后皮质醇和促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）及淋巴细胞增殖反应的变化；动物实验用皮质酮皮下注射造成大鼠 ＨＰＡＴ轴抑制模型，观察仙灵脾对 ＨＰＡＴ轴相关指标的影响。结果：血浆 ＡＣＴＨ、皮质醇和淋巴细胞增殖反应两组患者治疗前均无明显差异，治疗后强的松组明显下降，复方强的松组明显上升（ Ｐ＜ ０． ０５）。实验动物表现为下丘脑单胺类递质被激活；垂体、肾上腺、胸腺重量减轻；室旁核、正中隆起 ＣＲＨ神经细胞与神经纤维减少，肾上腺束状带与胸腺皮质萎缩；自然杀伤细胞细胞毒活性及淋巴细胞产生ＩＬ－２、γ－干扰素水平降低（Ｐ＜０．０５）；仙灵脾组上述各项指标较皮质酮组明显改善（Ｐ＜０．０５）。结论：仙灵脾具有减轻外源性糖皮质激素副作用的神经内分泌免疫学效应。

补肾益气中药仙灵脾和黄芪对哮喘大鼠TNF-α和NF-κB的影响

目的观察补肾益气中药仙灵脾和黄芪对哮喘大鼠前炎症因子之一的肿瘤坏死因子α(TNFα)和核转录因子κB(NFκB)的影响。方法将大鼠分为5组:生理盐水对照组、哮喘组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。ELISA法检测和比较各组大鼠血清中TNFα的浓度,免疫组化法检测和比较各组大鼠肺组织NFκB的活性。结果仙灵脾和黄芪可有效减少哮喘大鼠TNFα的生成,抑制NFκB的活性,中药低、中、高剂量组间比较,差异无显著性。结论在哮喘发作期和缓解期给予仙灵脾和黄芪,可有效减少前炎症因子TNFα的生成,抑制NFκB的活性,抑制炎症的发展。

黄芪仙灵脾汤加水蛭胶丸治疗肾病综合征高凝血症临床观察

观察了黄芪仙灵脾汤加水蛭胶丸对35例原发性肾病综合征(NS)患者的血生化及其他实验室指标。结果显示,黄芪仙灵脾汤加水蛭胶丸能明显减少尿蛋白,升高血浆白蛋白,降低血脂(P<0.05或P<0.01);全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、纤维蛋白原明显降低,红细胞电泳时间缩短(P均<0.01);血TXB_2下降、6—酮—PGF_(1α)上升(P均<0.01)。黄芪仙灵脾汤加水蛭胶丸临床疗效明显优于对照组。表明黄芪仙灵脾汤加水蛭胶丸有改善NS患者的高凝状态,缓解蛋白尿及保护肾功能的作用。

基于二仙汤“仙灵脾-知母”药对的中医阴阳平衡理论视角探讨中药抗骨质疏松机制研究策略

中药验方二仙汤治疗骨质疏松症以其不良反应少、标本兼治等特点,已成为临床常用方药。成骨-破骨细胞耦联的骨稳态与中医“阴阳平衡”理论具有微妙的关联性,骨质疏松发病的根本机制即为骨稳态失衡。既往的研究发现二仙汤之“仙灵脾-知母”药对配伍很可能通过“平衡阴阳”改善骨质疏松,是其抗骨质疏松过程中所隐含的规律性特征与辨证施治内涵体现。依托中医阴阳学说诠释成骨细胞与破骨细胞在骨稳态中的阴阳属性,基于二仙汤“仙灵脾-知母”药对的中医阴阳平衡理论视角探讨抗骨质疏松机制研究的策略,阐明这些方法的基本原理以及应用特点,可为阐释药对配伍规律的科学内涵及优化组方的应用提供重要支撑,也可为其他药对的现代研究提供探索性思路与方法。

薄层扫描法测定复方仙灵脾注射液中黄芪甲苷的含量

复方仙灵脾注射液是由淫羊藿、黄芪等中药材组成,临床上用于治疗中风后遗症.黄芪甲苷为黄芪的主要有效成分.曾有报道[1～3]用紫外分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法测定淫羊藿制剂中黄芪甲苷的含量,但复方仙灵脾注射液中黄芪甲苷含量的测定方法笔者尚未见报道.本实验采用薄层扫描法对复方仙灵脾注射液中黄芪甲苷进行了含量测定,该方法较好地排除了制剂中其他成分的干扰,具有简便、快速、准确等特点,为控制该制剂的内在质量提供了可靠的依据.

温补肾阳法治疗慢性肾衰竭──肉桂、附子和仙灵脾的应用比较

温补肾阳是中医治疗慢性肾衰竭的常用治法,温补肾阳多用附子、肉桂和仙灵脾。附子、肉桂偏于温燥,以祛寒见长,仙灵脾偏于温润,以填精见长。现代药理研究提示,附子、肉桂扩张肾血管,增加肾血流量,仙灵脾则可有效缓解肾单位的"三高",减轻肾脏组织学改变。比较此二者治疗慢性肾衰肾阳虚证在中医理论及现代药理研究上存在的差异性,有利于辨证与辨病结合,有助于合理选方用药。

高效液相色谱法同时测定复方仙灵脾颗粒中淫羊藿苷和丹参酮Ⅱ_A的含量

目的建立复方仙灵脾颗粒中的淫羊藿苷和丹参酮ⅡA的测定方法。方法采用高效液相色谱梯度洗脱法,色谱柱：Kromasil C18柱（200 mm×4.6 mm,0.45μm）;流动相：乙腈-水溶液（30.5∶69.5）;流速：1.0 ml/min;检测波长：270 nm;柱温：25℃。结果淫羊藿苷在7.51~375.50μg/ml（r=0.9997）范围内线性关系良好,平均回收率为96.27%,RSD为2.74%（n=6）。丹参酮ⅡA在0.88~35.04μg/ml（r=0.9999）范围内线性关系良好,平均回收率为102.5%,RSD为2.87%（n=6）。结论本法简单、专属性强、重复性好,可用于测定复方仙灵脾颗粒中淫羊藿苷和丹参酮ⅡA的含量。

复方仙灵脾注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤作用的实验研究

目的 :探讨复方仙灵脾注射液 (FFXLPI)对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用大鼠全脑缺血再灌注损伤模型 ,观察脑缺血前后血浆NO、ET和脑组织钙及含水量的变化。结果 :脑缺血再灌注期血浆NO、ET和脑组织钙及含水量显著升高 (P <0 .0 5～ 0 .0 1 ) ,使用复方仙灵脾注射液后 ,血浆NO、ET和脑组织钙及含水量明显降低。结论 :FFXLPI对脑缺血再灌注损伤确有保护作用。

复方仙灵脾颗粒质量标准研究

目的：建立复方仙灵脾颗粒的质量控制方法。方法：采用TLC法对方中淫羊藿、枸杞子进行鉴别;采用HPLC法测定样品中淫羊藿苷的含量。色谱条件：色谱柱为Welchrom C18柱（200 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：乙腈-水（25∶75）;流速为1.0 m L/min;检测波长：270 nm;柱温：30℃。结果：薄层定性鉴别的斑点清晰,分离效果良好;淫羊藿苷含量在3~160μg/m L范围内线性关系良好（r=0.9998）,平均加样回收率为100.20%,RSD为2.55%（n=6）。结论：本方法结果准确、操作简单,重复性良好,适合作为该制剂的质量控制标准。

薄层扫描法测定复方仙灵脾注射液中淫羊藿苷的含量

建立薄层扫描法测定复方仙灵脾注射液中淫羊藿苷含量的方法。线性范围为 1 15 μg～ 5 75 μg,平均回收率 98 84 % ,RSD =1 16%。该方法快速、灵敏、准确、重现性好 ,可用于该制剂的质量控制。

高效液相色谱法测定仙灵脾配方颗粒中5种主要黄酮类成分的含量

目的：建立反相高效液相色谱法同时测定仙灵脾配方颗粒中5种主要黄酮类成分：淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷I的含量。方法：采用RP-HPLC，色谱柱ZORBAX SB-C18（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-水；梯度洗脱程序：（0～15）min乙腈10％～25％，（15～38）min乙腈25％，（38～61）min乙腈25％～71％；流速1mL·min^-1；检测波长270nm；柱温：30℃。结果：5种成分均达到基线分离，线性良好。结论：该方法快速、准确、重复性好，为仙灵脾配方颗粒的质量控制根供了坪论依据。

RP-HPLC法测定复方仙灵脾注射液中淫羊藿苷含量

目的 :建立HPLC测定复方仙灵脾注射液中淫羊藿苷的含量。方法 :采用色谱注 :ODS柱 ,流动相 :甲醇 水 (30∶70 ) ,以淫羊藿苷为对照品 ,外标法峰面积定量 ,紫外检测波长 2 70nm。结果 :回收率为 98.32 % ,RSD =1.4 8%。结论 :方法简便、快速准确 。

仙灵脾对免疫功能低下小鼠作用的实验研究

前言补益类中草药对免疫机能的影响已越来越受到免疫学界的重视,仙灵牌(又名淫羊藿)作为重要的补益药物已有人对它进行了初步研究,认为对低下的免疫机能有恢复作用。但在以往研究中多采用注射氢化考的松造成小鼠免疫低下模型,以这种模型研究中草药对免疫机能的影响目前尚有争议。我们根据文献采用注射抗淋巴细胞血清(ALS)造成小鼠免疫低下模型、并用仙灵牌进行治疗,试图了解仙灵牌刺激免疫的作用机制。

肉桂、仙灵脾对大鼠心、肾组织LDH同工酶谱变化影响初探

乳酸脱氢酶（LDH）是催化乳酸和丙酮酸代谢变化的关键酶之一。LDH同工酶由M和H两种亚基组成5种四聚体酶带,称为LDH1～LDH5。LDH1（H4）酶促乳酸成丙酮酸。

复方仙灵脾注射液对实验性大鼠脑缺血保护作用的实验研究

选用复方仙灵脾注射液对实验性脑缺血大鼠进行腹腔注射给药，并对其脑组织Ca2＋、Mg2＋含量及脑组织含水量进行测定。结果表明：复方仙灵脾注射液可明显抑制脑缺血后细胞内Ca2＋超载，提高微量元素Mg2＋含量，减轻脑水肿，从而起到对缺血性脑组织的保护作用。