苏北不同代次和林龄杨树人工林土壤酶活性季节变化特征

研究了苏北不同代次和林龄的杨树人工林土壤酶活性的季节变化特征。结果表明:不同样地土壤酶活性存在季节性差异,土壤蔗糖酶活性的季节变化表现为春夏秋相对高,冬季低;土壤脲酶活性为春季最高,夏秋冬相对低。各季节土壤磷酸酶活性从大到小为秋、夏、春、冬,过氧化氢酶季节变化不明显;表层的土壤蔗糖酶、脲酶、磷酸酶活性均高于亚表层,而过氧化氢酶变化不明显。杨树种植代次与林龄的差异对土壤酶活性产生一定的影响:一代10年生林地土壤磷酸酶、脲酶、蔗糖酶均高于对应季节二代10年生林地,一代10年生林地土壤磷酸酶、脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶均高于对应季节一代15年生林地土壤酶的活性。

猪瘟病毒石门株不同代次E2基因主要抗原编码区序列差异分析

利用 RT- PCR及序列测定对猪瘟病毒石门株不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区及同一代次不同年代主要抗原编码区序列进行了分析 ,结果所有毒株 E2基因主要抗原编码区序列呈现较高的同源性 ,石门株不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区核苷酸及氨基酸同源性分别为 97.7%～ 10 0 %、97.3%～ 10 0 % ;同一代次不同年代主要抗原编码区序列核苷酸及氨基酸同源性均为 98.6 %～ 10 0 %。只有 3个代次毒株发生较小的变异 ,核苷酸及氨基酸呈现 1～ 3个碱基或氨基酸的变异 ,其他代次的毒株序列完全一致。初步证实了猪瘟病毒分子结构的遗传稳定性 。

不同代次骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的体外研究

目的观察不同代次人骨髓间充质干细胞(MSC)体外成骨分化能力,为优化组织工程种子细胞提供更多参数。方法应用全骨髓直接贴壁法分离培养10例健康志愿者MSC,依照年龄将MSC分为4组,<20岁,20岁～,30～40岁,>40岁组。取P1(passage 1)～P5诱导成骨分化,诱导分化14d予以碱性磷酸酶染色,21d茜素红染色,Image-Pro Plus软件分析细胞染色阳性区域平均吸光度值。结果 <20岁组P1～P5成骨分化能力无显著差异(P>0.05);30～40岁组P3分化能力低于P1、P2(P<0.05);>40岁组P3分化能力下降更明显(P<0.05or P<0.01),P4、P5几乎分化受阻。结论不同代次的MSC分化能力具有异质性,与年龄有关。>40岁组MSC在超过P3代时,细胞倍增时间明显延长,诱导成功率降低,成骨分化潜能明显下降,选择P2代作为种子细胞更有利于细胞治疗的安全及质量控制。

代次视角下农民工组织参与对政治参与意愿的影响研究——基于西安市1215名农民工的调查

利用2012年"西安市农村流动人口发展状况调查"数据,使用卡方检验和二分Logistic回归,在代次视角下分析农民工政治参与意愿的特征和组织参与对农民工政治参与意愿的影响。研究发现:农民工政治参与意愿具有稳定的制度性偏好,但新生代农民工非制度化参与的风险增加;组织化能够显著提升农民工的政治参与意愿,随着代次更替,作用方向不变,但程度减弱;农民工经济收入的增加,具有同时促进制度化和抑制非制度化参与倾向的作用。

中国城镇化背景下农民工公共服务需求层次的代次差异研究

利用深圳市P区农民工调查数据,采用有序逻辑斯特(Logistic)模型对农民工公共服务需求层次代际差异进行分析;研究发现:农民工整体处于初级公共服务需求层次,其中,第三代农民工的最高公共服务需求层次高于第一、二代,第一代农民工的公共服务需求层次主要受到社会经济地位的影响,第三代的需求层次主要受到与"留城意愿"相关的社会因素的影响,第二代的需求层次同时受到两方面因素的共同影响;在此基础上,提出不同代际农民工存在不同的公共服务需求层次,认为社会经济地位和留城意愿是影响农民工公共服务需求层次的主要影响因素,其中第三代农民工的公共服务需求层次最高,是未来公共服务供给的重要参考。

平茬更新代次对杞柳生长及柳条产量和质量的影响

选择淮河低湿地不同平茬更新代次的杞柳林分,对其生长情况及柳条产量、质量进行调查,并对平茬更新代次的影响进行评价。结果表明:0～4代杞柳林分在叶面积指数、柳条平均直径和长度以及生物量方面均不存在显著差异;1代林分柳条分化严重,整齐度低,细弱型柳条(D<0.4 cm)比例达44%,需要在栽培过程中加以人工调控;4代林分柳条的整齐度较高,但产条数量较0～2代林分低20%以上,并且粗大型柳条(D>0.8 cm)所占比例略高于其他代次,建议在生产中采用1年2次收获的方式以增加中细型柳条的产量。

甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)快速繁殖株不同代次全基因序列比较

为探索甲型肝炎减毒活疫苗 (H2株 )细胞适应的分子机制 ,将甲型肝炎减毒活疫苗毒株(HAVH2K7)在人胚肺二倍体细胞KMB17上快速连续系列传代增强适应 ,繁殖周期由原来的 2 8d缩短为 14d ,连续传代后抗原滴度和感染性滴度不断增加 ,传至 2 2代抗原滴度达 1∶10 2 4 ,感染性滴度lgCCID50 (每ml)为 7 83 .分别将第 6代和第 2 2代病毒用AC PCR法和PCR法扩增 .扩增片段分别与pGEM T载体连接得到重组质粒 ,测定cDNA插入片段的序列 .对 2个不同代次全基因序列及氨基酸序列比较分析表明 ,HAVH2K7适应至第 6代时 ,整个基因组有 6个核苷酸变异 ,全部位于编码区内 ,变异率为 0 0 7% ,导致 3个氨基酸变化 ,分别位于VP2 (A S) ;2C(N H) ;3A(R C) .适应至第 2 2代时 ,整个基因组出现 18个核苷酸突变 ,变异率为 0 2 4 % ,13个是该代次产生的 ,变异最大区域 5′端非编码区 (5′UTR)有 5个核苷酸变异 .编码区突变导致 7个氨基酸变化 ,其中 4个氨基酸变化是该代次在 6代基础上特有的变异 (2C ,Q P ;3A ,A S ;3C ,T A ;3D ,V G) .2C区是编码区变异最多区域 ,共有 4个核苷酸突变 ,在 6代变异基础上出现 3个新突变 ,导致 1个氨基酸变异 .说明 5′UTR的2C区变异对病毒的翻译效率、感染性滴度提高具有重要作用 .

体外培养不同代次人成纤维细胞的衰老程度

目的:探讨体外培养不同代次人成纤维细胞的衰老程度,为组织工程化皮肤提供合适的种子细胞。方法:实验于2000-09/2002-06在潍坊医学院整形外科研究所完成。取6～8岁正常男性儿童20例包皮环切术切除的健康包皮组织,将包皮二倍体成纤维细胞进行传代培养,以不同代次(P0,P5,P10,…,P65)的细胞为实验对象,通过倒置相差显微镜、透射电镜、衰老相关β-半乳糖苷酶染色一系列检测方法,对不同代次成纤维细胞的衰老程度进行观察。结果:①成纤维细胞的形态学:P45以内成纤维细胞生长迅速,两三天即呈汇合状态,细胞排列紧密,多呈放射状、编织状或漩涡状走行,有的交叉重叠生长。P46以后细胞排列不规则,体积较大,形状扁平,胞浆区域增大,胞质突起多而大,胞内出现颗粒和空泡,边界不清,形态不规则;成批的细胞出现固缩、脱落,有离壁漂起的现象。②透射电镜结果:P0～P40:成纤维细胞胞质内有丰富的粗面内质网;细胞核大,核仁明显;细胞表面有许多短小突起,可见微绒毛和胞浆皱褶。P41～P65:细胞核/浆比例减小,细胞表面突起和微绒毛减少;核膜内折,有凋亡现象。③细胞生物学行为的改变:P60增殖速度较P10明显减慢。P10最大增殖数为47.3×105,对数生长期在3～6d,细胞倍增时间为2.18d;P60最大增殖数为8.5×104,对数生长期在4.0～7.5d,群体倍增时间为3.86d。④衰老相关β-半乳糖苷酶染色结果:与P10相比,P60中阳性细胞率大为增强(阳性细胞率为4%和60%);直线相关分析结果显示,β-半乳糖苷酶染色的阳性率和细胞代龄之间呈显著正相关(r=0.92,P<0.01)。结论:各代成纤维细胞老化程度不同,46代后的细胞老化明显,不适合作为组织工程化皮肤的种子细胞。

猪瘟野毒不同代次E2基因主要抗原编码区序列差异分析

利用 RT-PCR及序列测定对 5株猪瘟野毒 1 4个不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区序列进行了分析。结果表明每个野毒的不同代次毒株核苷酸及氨基酸序列均呈现较高的保守性 ,核苷酸及氨基酸序列均无变化 ,核苷酸及氨基酸同源性均为 1 0 0 %。与 0 2号野毒相比 ,其他 4株野毒核苷酸及氨基酸同源性分别为 82 .0 %～ 99.5%、84.1 %～ 98.6 %。遗传衍化分析结果表明所有毒株被分成 2个基因组 ,每个基因组又分成 2个基因亚组。 0 3、0 5和 2 2号毒株位于第一基因组 ,0 2、0 6号毒株位于第二基因组。每一个毒株的不同代次毒株均位于同一基因组、同一基因亚组。

用于包装复制缺陷性腺病毒的低代次293细胞的培养

目的:建立体外培养低代次293细胞的方法。方法:细胞复苏,将冻存的低代次293细胞于37℃水浴中快速融解,移入75cm^2细胞培养瓶中,加入10mL低代次293细胞培养基,6～8h细胞贴壁后更换培养基。细胞传代,吸出培养基,用1×柠檬酸盐细胞消化液洗2遍,留取0.5mL37℃消化5～10min,待细胞脱壁后加入3mL培养基,轻轻吹匀以1∶2比率传代培养。细胞冻存,以1×柠檬酸盐细胞消化液消化5～10min,细胞脱壁后加入5mL细胞培养基中和消化液,离心收集细胞,以1mL的细胞冻存液(90%FBS+10%DMSO)重悬、冻存。结果:细胞传代后8h细胞完全贴壁;以腺病毒感染质粒感染293细胞14d后可观察到腺病毒空斑形成。结论:该方法操作简便,对细胞损伤小且保持细胞生物学特性不变。

西门塔尔杂种母牛适宜级进杂交代次的线性模型分析

利用最小二乘线性模型对西门塔尔杂种母牛各杂交代次的产奶量及其产犊效果进行评估 ,确定了在丰定县饲养条件下的西门塔尔杂种母牛适宜级进杂交代数为3代 ,从而为西门塔尔母牛产奶和产犊的综合利用 。

体外培养不同代次成纤维细胞胶原基因表达及成纤维细胞对表皮细胞生长因子刺激的反应(英文)

背景:成纤维细胞是构建组织工程化皮肤的种子细胞,其质量好坏直接影响组织工程化皮肤的质量。其在体外培养过程中胶原基因表达及对表皮细胞生长因子刺激反应,可以反映不同代次成纤维细胞的增殖能力,为皮肤组织工程筛选合适的种子细胞提供依据。目的:观察体外培养不同代次人成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达及对表皮细胞生长因子刺激的反应性,为组织工程化皮肤种子细胞的选择提供部分依据和参数。设计:自身对照实验。单位:潍坊医学院整形外科研究所。材料:实验于2000-09/2002-06在潍坊医学院整形外科研究所完成。实验样本来源于在潍坊医学院附属医院普外科行包皮环切术的6～8岁正常男性儿童(n=20)切除的健康包皮组织,均自愿提供。方法:①成纤维细胞培养:取包皮组织,去除皮下疏松结缔组织,分离真皮和表皮,真皮部分用含100mL/L胎牛血清DMEM培养液终止胰蛋白酶作用,再用200U/mLⅠ型胶原酶37℃条件下消化30min,收集细胞悬液,用血细胞计数板做细胞计数,观察细胞活性,接种于培养皿中,细胞培养达到80%汇合时,用混合消化液消化,镜下见胞质回缩终止消化,以1:2接种入新培养皿,进行传代培养。②细胞鉴定:用相差显微镜动态观察细胞形态变化及生长增殖情况、透射电镜及抗vimentin免疫细胞化学染色。③不同代次成纤维细胞胶原基因表达的分析:抽提不同代次(P0,P5,…,P65)成纤维细胞总核糖核酸,获得样本cDNA,进行逆转录聚合酶链反应,所得反应产物经10g/L琼脂糖凝胶电泳对照分子量标准,分析扩增产物是否为所预期。④氚-胸苷(3H-TdR)掺入量测定对表皮生长因子刺激的反应性:取P10和P60代成纤维细胞,实验组均添加含表皮生长因子的条件培养液,对照组用不加表皮生长因子的条件培养液。细胞培养至80%汇合时,血清饥饿72h。加入含200μL/L表皮生长因子无血清DMEM培养液,培养24h;弃上清,各组均加入含氚-胸苷的培养液37MBq/L,再培养24h,收集细胞;用预冷的100g/L三氯乙酸沉淀DNA,再用0.5mL1mol/LNaOH提取,液闪计数仪上测定每分钟放射性脉冲数。主要观察指标:①不同代次成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA含量。②不同代次成纤维细胞对表皮细胞生长因子刺激的反应。结果:①不同代次成纤维细胞胶原基因的表达:随细胞代次的增加,Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA含量逐渐降低。②不同代次成纤维细胞对表皮细胞生长因子刺激的反应:氚-胸苷掺入量在P60细胞(实验组:132.5±23.6,对照组:124.9±16.8)均低于在P10细胞中(实验组:512.8±56.4,对照组:306.4±22.5);对于P60细胞,实验组与对照组间差异无显著性意义(P>0.05),对于P10细胞,实验组与对照组间的差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:①随成纤维细胞代龄的增加,其合成Ⅰ型和Ⅲ型胶原的量逐渐降低。②P60细胞对表皮细胞生长因子刺激的反应均低于P10细胞,添加表皮细胞生长因子的条件培养液对P60细胞生长增殖无明显调控作用,对P10细胞有非常显著的促增殖作用。提示:随着细胞代次的增加,氚-胸苷掺入量降低,表皮细胞生长因子对衰老成纤维细胞生长增殖的调控能力减弱。③本实验为建立成纤维细胞衰老模型提供了实验依据,同时也为组织工程学、老年学及肿瘤生物学及发展提供科学依据。

不同代次毒种乙脑减毒活疫苗的滴度和安全性实验结果比较

为比较不同代次的乙脑毒种在疫苗制备过程中对疫苗质量的影响,特制备不同代次的工作种子SA14 14 2PHK7、PHK8、PHK9,检定合格后,分别用这几批毒种制备乙脑减毒活疫苗,检定和比较疫苗的滴度和各项安全性指标。实验表明SA14 -14 -2PHK7、PHK8和PHK9三个代次的乙脑毒种制备的乙脑疫苗平均滴度为 6. 43lgPFU/ml;乳鼠传代返祖试验均值为 1. 1lgLD50 /0. 03ml;致病力均为阴性。证实乙脑毒种SA14 -14 -2 10代以内的生物学特性是稳定的,对疫苗的影响无显著差异。10代以内的乙脑毒种可安全的用于疫苗生产。

不同级进代次夏寒杂交羊生产性能、屠宰性能的分析研究

本研究以夏洛莱和小尾寒羊杂交羊F1、F2、F3代(分别含1/2、3/4、7/8夏洛莱血液)为研究对象,与小尾寒羊进行比较,对其生产性能、屠宰性能进行分析研究。结果表明:夏寒杂交羊F1、F2、F3代的生产性能和屠宰性能均极显著高于(p<0.01)纯种小尾寒羊。其中在F1、F2、F3代中,F2代羊既有较高的生产性能和产肉性能,又有较高的繁殖率,是具有最大杂交优势的一代。

不同代次的猪细小病毒(PPV S-1株)NS1基因的克隆与序列分析

根据GenBank中猪细小病毒PPV NADL-2株NS1基因序列设计了一对引物,以PPV S-1分离株不同传代代次的DNA为模板,进行PCR扩增,将扩增产物分别克隆到pGEM-T载体中进行测序。结果表明:扩增片段长约2.2 kb,包含完整的NS1基因,共编码662个氨基酸。应用DNAStar软件进行序列分析,结果显示:所有代次的NS1核苷酸同源性在99.4%以上,氨基酸同源性在98.5%以上;PPV S-1分离株在传代致弱的过程中,NS1基因出现了一些变异,有4处较为一致的突变,即1 052位C→T、1 636位G→A、1 717位A→G、1732位T→G,对应的氨基酸变化分别为Thr^(351)→Met^(351)、Val^(546)→Met^(546)、Asn^(573)→Asp^(573)、Ser^(578)→Ala^(578),这可能是PPV S-1在ST细胞上传代致弱的分子基础之一。

不同代次兔髓核细胞中Ⅱ型胶原和SOX9的表达

目的：通过培养不同代次兔髓核细胞，检测其Ⅱ型胶原和SOX9的含量变化，观察其细胞生长规律。方法：取2～3个月龄新西兰大白兔8只，空气栓塞致死后取出胸、腰椎段髓核进行细胞传代培养。将原代细胞作为对照组（A组．n=8），传代后的2、3、4、5代细胞分别为B、c、D、E组，显微镜下观察不同代次细胞的形态变化：MTF法绘制细胞生长曲线：RT—PCR和免疫组化法检测不同代次细胞Ⅱ型胶原和SOX9的表达。结果：原代细胞（A组）生长缓慢，20～30d达80％融合可传代；B组生长速度最快，7～10d可传代，C、D、E组生长速度依次减慢。RT—PCR和免疫组化法检测可知A组和B组的Ⅱ型胶原及SOX9的表达明显高于C、D、E三组（P〈0．05），A、B组之间差异无显著性（P〉0．05），C、D、E组之间差异无显著性（P〉0．05）。结论：不同代次兔髓核细胞的生长规律、Ⅱ型胶原及SOX9含量不同，第2代兔髓核细胞生物学特性与原代细胞相似．可作为种子细胞进行实验研究。

不同代次大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路表达分析

目的观察不同代次大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖能力及其纤维分化倾向,为临床治疗及组织工程种子细胞的选择提供依据。方法采用贴壁培养法分离培养大鼠MSCs,流式细胞术鉴定细胞表面标记; MTT法检测不同代次MSCs的增殖情况;蛋白质印迹法(Western Blot)检测MSCs Wnt通路相关蛋白的表达情况;实时聚合酶链式反应(Realtime-PCR)法检测不同代次MSCs中成纤维细胞分子标记表达。结果流式细胞术鉴定结果证实我们培养的大鼠MSCs符合间充质干细胞的特征,且纯度高; MTT法检测显示P3代之后细胞的增殖能力明显高于P1、P2代,Western Blot检测显示细胞内Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达随培养代次增强,Realtime-PCR法检测结果证实P9代细胞开始出现成纤维分化倾向。结论 MSCs作为种子细胞不宜超过P9代,P3～P7代具有纯度高、倍增快等优点,是能够满足组织工程细胞植入的种子细胞。

IBDV不同代次细胞毒免疫保护作用研究

将一株传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)野毒经鸡胚传代 ,然后转为细胞培养 ,取第 2 0代、2 1代、2 5代毒 ,以 1倍量 ( 30 0 0 TCID50 /0 .2 ml)和 5倍量不同的免疫剂量 ,分别在 1周龄、2周龄对商品代海蓝褐蛋鸡进行免疫 ,并于免疫前用 IBD- EL ISA试剂盒检测 IBDV母源抗体水平 ,于 5周龄用IBDV超强毒 ( vv IBDV) GX 8/99攻毒 ,攻毒后观察记录各组鸡的致病率和死亡率。结果在 2周龄免疫2 1代毒、2 5代毒 ,均可提供 1 0 0 %的保护。

不同代次大鼠脂肪间充质干细胞增殖及成神经球的能力比较

背景:脂肪间充质干细胞是一组具有多向分化潜能的干细胞,体外在一定条件下可分化为神经干细胞。目的:观察不同代次大鼠脂肪间充质干细胞体外培养增殖能力及诱导成神经球的潜力。方法:取SD大鼠脂肪体外分离培养出脂肪间充质干细胞并传代扩增,分别在P3、P6、P10、P20时观察其形态学变化、测定增殖速度。流式细胞仪检测定不同代次细胞表型及细胞周期。将脂肪间充质干细胞诱导为神经球,计数成神经球率。结果与结论:脂肪间充质干细胞主要呈长梭形,不同代次的脂肪间充质干细胞均具有很强的体外增殖能力;除P3细胞其他代次细胞均高表达CD29、CD44、CD73,低表达CD45、CD34。细胞周期中G0/G1期细胞所占比例P3为93.4%、P6为92.7%、P10为92.4%、P20为86.0%。P6、P10诱导成神经球率均显著高于P20(P<0.05),P3细胞较难诱导成神经球。提示以脂肪间充质干细胞作为种子细胞时,应注意选择适宜的扩增代数,以便在获得足够纯度细胞的同时保留细胞最佳的分化潜力。

不同代次兔髓核细胞冻存后的生物学特性比较

目的:比较不同代次兔髓核细胞冻存后的生物学特性,找出适合作为种子细胞冻存的兔髓核细胞代次。方法:取3～4月龄新西兰大白兔10只,麻醉后在严格无菌条件下分离胸腰椎间盘(T1/2～L7/S1)髓核细胞,体外传代培养,分别取一、二、三、四、五代细胞冻存2～3个月后复苏,取一代未冻存细胞作为对照组(A组,n=10);一、二、三、四、五代冻存后复苏的细胞作为实验组(分别为B、C、D、E、F组,各组n=10),在相同条件下培养2周,培养第2天时采用台盼蓝染色测定细胞成活率;培养第2d、5d、10d、14d时采用MTT法检测细胞生长活性,采用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖(PG)含量;培养第14d时采用阿利新兰染色法测定糖胺聚糖(GAG)合成总量,用RT-PCR法检测各组细胞Ⅱ型胶原基因的表达情况。检测细胞浓度均为1×105个/ml。采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果:培养第2d时B、C组细胞成活率接近A组(P>0.05);D、E、F三组细胞成活率明显低于A、B、C组(P<0.05)。不同时间点各组细胞均有不同程度的增殖,A、B、C、D四组生长趋势较接近,A、B、C三组相同时间点生长活性比较差异无统计学意义(P>0.05),D组与同一时间点A组比较有显著性差异(P<0.05),E组第10d和第14d以及F组各时间点间比较差异无显著性(P>0.05);A、B、C三组各时间点的PG含量及GAG含量高于相应时间点D、E、F组(P<0.05);A、B、C三组的Ⅱ型胶原基因表达量高于D、E组(P<0.05),明显高于F组(P<0.01)。结论:不同代次兔髓核细胞冻存后生物学特性不同,第一、二代细胞冻存后能较好保持髓核细胞特性,可作为种子细胞进行低温保存。