地高辛精标记大鼠代谢型谷氨酸受体第5亚型RNA探针的制备研究

为制备用地高辛精标记的大鼠代谢型谷氨酸受体第 5亚型 c RNA探针 ,本实验用分子生物学技术重组质粒 p GEMm Glu R5 ,经限制性内切酶酶切分析 ,证实其确有 m Glu R5基因片段插入且方向正确。将此质粒再经限制性内切酶消化得到线性DNA片段 ,用 T7RNA聚合酶体外转录合成带有地高辛精标记的高比活性的单链 RNA探针 ;经斑点杂交实验证实该探针具有较高的敏感性和可靠性 ,可用于代谢型谷氨酸受体第

代谢型谷氨酸受体第5亚型的研究进展

代谢型谷氨酸受体第 5亚型 (m G1u R5 )高表达区域是纹状体、海马及大脑皮质。它是与 G蛋白耦联的受体 ,通过 1、4、5 -三磷酸肌醇 (IP3)和 Ga2 +作为第二信使系统发挥生物学效应。它与中枢神经系统发育的可塑性有关 ;可加强大脑皮质 -氨基丁酸 (GABA)能神经元的抑制性突触传递。在纹状体内 ,它可加强NMDA受体的神经毒性作用 ,并与底丘脑核及多巴胺 (DA)系统发生联系 ,可能参与调节基底节的运动 ,并可能与帕金森病 (PD)动物模型中锥体外系症状的产生有关。在海马内 ,m G1u R5可形成长时程增强效应 (L TP) 。

大鼠颈上神经节中Ⅰ组代谢型谷氨酸受体表达及慢性间歇性低氧对其的影响

目的观察Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(mGluR1/5)在大鼠颈上神经节(SCG)组织的表达、定位,及慢性间歇性低氧(CIH)对mGluR1/5蛋白水平的影响。方法12只雄性SD大鼠随机分为对照组(Ctrl)和CIH组(CIH),每组6只,模型制作6周。Western blotting检测CIH对mGluR1/5蛋白水平的影响,免疫组织化学法和免疫荧光共定位染色检测大鼠SCG中mGluR1/5的表达及分布。结果mGluR1/5表达于大鼠SCG,mGluR1分布于神经元和小强荧光(SIF)细胞,而在卫星胶质细胞(SGCs)、神经纤维和血管不表达;mGluR5主要分布于神经纤维,少量分布于神经元,而在SIF细胞、SGCs及血管不表达;CIH上调mGluR1/5的蛋白水平(P<0.01)。结论mGluR1和mGluR5均表达于大鼠SCG,但其表达部位有所不同,两者蛋白水平的升高可能参与了CIH诱导的血压升高。

代谢型谷氨酸受体在胶质瘤发展中的作用及其作为潜在治疗靶点的研究进展

代谢型谷氨酸受体(mGluRs)是中枢谷氨酸能系统中重要的受体之一,其广泛参与调控突触传递、突触可塑性、神经兴奋性和抑制性平衡等生理过程。mGluRs在介导胶质瘤的发生和发展中起重要作用,其介导的细胞内信号通路参与胶质瘤的进展、侵袭和复发过程,因此mGluRs作为胶质瘤的潜在药物靶点越来越受到关注。其中,mGluR1和mGluR3的体外药物阻断已被证明对于胶质瘤细胞具有抗细胞增殖和迁移的作用,mGluR3拮抗剂对于替莫唑胺有增加敏感性的作用,mGluR4和mGluR8可能成为治疗恶性胶质瘤的潜在靶点,但需要广泛的研究验证。未来应对不同类型的mGluRs在胶质瘤细胞中的作用进行深入探索,以为临床药物的研发提供理论依据。

代谢型谷氨酸受体5与临床相关疾病的关系研究进展

代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)是中枢谷氨酸能系统的重要受体之一,在中枢神经系统方面发挥着重要作用,广泛参与调控突触传递、突触可塑性、神经兴奋性/抑制性平衡等生理过程。研究发现,mGluR5与多种不同的神经系统疾病和非神经系统疾病密切相关,因此其作为潜在的药物治疗靶点日益受到关注。本文旨在对mGluR5的结构、分布、生理功能以及mGluR5在神经系统疾病、非神经系统疾病中的作用进行概述,以期为mGluR5在临床相关疾病中的研究提供有意义的参考。

代谢型谷氨酸受体5的纯化及纳米抗体的筛选

文章首先采用细胞表达抑制状态的代谢型谷氨酸受体5(Metabotropic glutamate receptor 5,m GluR5)蛋白免疫野生双峰驼,构建纳米抗体文库,运用M13噬菌体展示技术,筛选出与m Glu R5具有特异性结合的纳米抗体;其次用细胞对m GluR5蛋白进行表达纯化,然后对野生单峰驼进行7次免疫,对抽取骆驼的外淋巴细胞总RNA进行提取,经过反转录的方式转为c DNA,将用巢式PCR对VHH片段进行扩增并与p MECS噬菌粒载体进行连接,并电转化至TG1大肠杆菌中构建纳米抗体噬菌体展示文库;其三通过M13噬菌体展示技术对文库进行淘选,淘选出多个互补决定区3序列不同的纳米抗体;最后纯化出纯度较高的m GluR5蛋白,构建出库容量为5.47×10^(8)CFU/mL的噬菌体文库菌,经过两轮液相淘选,获得了12个互补决定区3序列不同的纳米抗体。研究成功筛选出12个与m GluR5特异性结合较高的纳米抗体,为m Glu R5的靶向药物研发和G蛋白偶联受体的信号通路研究奠定了基础。

大鼠脑内代谢型谷氨酸受体5亚型(mGluR5)定位分布的免疫细胞化学研究

本研究用免疫细胞化学技术观察了大鼠脑内参与兴奋性突触传递的代谢型谷氨酸受体5亚型(mGluR5)的精确定位分布.mGluR5阳性浓染的神经元胞体和纤维密集地分布于大脑皮质浅层、嗅球、伏核、尾壳核、前脑基底部、隔区、苍白球、腹侧苍白球、海马CA1和CA2区、下丘中央核、被盖背侧核和三叉神经脊束核尾侧亚核浅层;淡染而稀疏的mGluR5阳性神经元胞体和纤维见于屏状核、终纹床核、杏仁中央核、丘脑部分核团、上丘浅灰质层、外侧丘系背侧核和延髓中央灰质.

代谢性谷氨酸受体亚型5对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓水平炎症反应的影响

目的:探讨鞘内注射mGluR5拮抗剂MTEP对骨癌痛小鼠热痛觉过敏及脊髓水平IL-1β、IL-6、TNF-α表达的影响。方法:C3H/HeNCrlVr雄性小鼠60只,随机分为:①MTEP+Tumor组:癌痛组从第14 d开始鞘内注射MTEP150nmol,qd,共7次;②生理盐水+Tumor组:以等体积的生理盐水代替MTEP;③MTEP+Sham组:用等剂量MTEP给予假手术组;④生理盐水+Sham组:用等体积的生理盐水给予假手术组;⑤正常组:正常饲养21d。应用热辐射刺激仪测定缩足潜伏期(PWL)。应用Real-time PCR技术检测mRNA表达。结果:各组小鼠术前基础PWL差异无统计学意义(P>0.05)。术后14 d,与正常组相比,骨癌痛组PWL明显降低(P<0.05),假手术组PWL差异无统计学意义(P>0.05)。术后21 d,和正常组相比,MTEP+Sham组、生理盐水+Sham组PWL和脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达差异均无统计学意义(P>0.05);生理盐水+Tumor组PWL(6.18±1.29)s明显低于正常组(15.91±1.65)s(P<0.05),脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达则高于正常组;MTEP+Tumor组(9.39±1.94)s PWL高于生理盐水+Tumor组,脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达则低于生理盐水+Tumor组(P<0.05)。结论:鞘内注射mGluR5拮抗剂抑制脊髓水平表达释放炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α可能是其抗癌痛作用机制之一。

代谢型谷氨酸受体5亚型在成瘾药物中的作用

药物成瘾是以强迫用药为特征的慢性复发性脑疾病，其成瘾过程涉及到多个脑区以及脑区之间各种神经递质和受体的相互作用。谷氨酸（Glu）能神经元在药物成瘾中发挥着重要作用，其中代谢型谷氨酸受体5亚型（mGluR5）在各种药物滥用、觅药行为以及逆转因药物成瘾而导致的认知障碍中都有调节作用。

代谢型谷氨酸受体5正电子发射断层扫描成像在神经精神性疾病中应用的研究进展

代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)在神经精神性疾病中发挥重要作用,正电子发射断层成像(PET)可无创性在活体分子水平评估神经系统疾病的mGluR5变化。为进一步探明mGluR5在神经精神类疾病中的变化及病理机制,本文就mGluR5的分子机制及其PET在阿尔茨海默病、帕金森病、癫痫、精神性疾病、睡眠与觉醒等的应用中作一综述,以期为mGluR5显像的实验研究及临床应用提供指导意义。

大鼠颈上神经节代谢型谷氨酸受体7,8的表达及慢性间歇性低氧对其的影响

目的研究大鼠颈上神经节(SCG)组织中III组代谢型谷氨酸受体7和8(mGluR7/8)的表达、定位,以及慢性间歇性低氧(CIH)对mGluR7和mGluR8蛋白表达量的影响。方法选取8周龄雄性SD大鼠30只,免疫组织化学染色检测大鼠SCG组织中mGluR7和mGluR8的表达。免疫荧光共定位染色检测mGluR7和mGluR8的分布。核浆分离蛋白进行Western blot检测mGluR7和mGluR8在细胞浆和细胞核的分布情况。构建6周CIH大鼠模型,CIH组放于低氧小室中:首先向小室内充入100%氮气,使氧浓度分数逐渐降低至6%并维持30 s,然后充入100%氧气,使氧浓度分数回升至21%,作用周期为4 min/次,8 h/d,对照组放于常氧环境中。通过尾动脉血压检测大鼠收缩压、舒张压和平均动脉压的变化。Western blot检测CIH对SCG中mGluR7和mGluR8蛋白表达量的影响。结果大鼠SCG表达mGluR7和mGluR8。mGluR7分布于神经元和小荧光(SIF)细胞,上述细胞胞浆和胞核中均染色阳性,而在卫星胶质细胞(SGCs)、神经纤维和血管中不表达;mGluR8定位于神经元和SIF细胞的胞浆中,而在SGCs、神经纤维和血管中不表达。大鼠SCG核浆蛋白检测结果进一步证实mGluR7不仅存在于胞浆也存在于胞核蛋白中,而mGluR8仅存在于胞浆蛋白中。动物实验结果显示,与对照组相比,CIH升高大鼠的收缩压(P<0.0001)、舒张压(P<0.001)和平均动脉压(P<0.0001)。CIH增加mGluR7和mGluR8的蛋白表达量(P<0.05)。结论mGluR7和mGluR8均表达于大鼠SCG,但是细胞定位方式不同,CIH升高大鼠血压并增加mGluR7和mGluR8蛋白在SCG的表达水平。

Ⅲ型代谢型谷氨酸受体在痛觉调控中的作用

代谢型谷氨酸受体(mGluR)是G蛋白偶联受体,通过与谷氨酸这一主要中枢神经递质结合后而激活。目前已有8种不同的mGluR亚型被鉴定出来,并根据其分子结构、药理学特性和信号转导机制分为Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型。mGluR介导了多种生理功能,如神经元兴奋性和突触可塑性,但它们同时也参与了如疼痛等多种病理条件下的调控。mGluR广泛表达于外周及中枢痛觉调控通路中,近些年来,随着Ⅲ型mGluR新的选择性配体及正性变构调节剂的开发,使得Ⅲ型mGluR在痛觉中的生理及病理性调控作用及机制逐渐明确,提示Ⅲ型mGluR可能是治疗病理性疼痛的潜在靶点。本文就Ⅲ型mGluR在痛觉调控中的作用进行综述。

二次脑损伤后大鼠脑皮层代谢型谷氨酸受体亚型4mRNA的变化

目的 研究弥漫性脑损伤 (DBI)及其合并二次脑损伤 (SBI)后大鼠脑皮层代谢型谷氨酸受体亚型 4(m Glu R4)的变化及意义 .方法 SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、单纯 SBI组、单纯 DBI组及合并 SBI组 .在 Marmarou弥漫性脑损伤模型的基础上 ,制成 SBI模型 ,于伤后 1,6 ,12 ,2 4和 72 h进行 HE染色和代谢型谷氨酸受体 4亚型(m Glu R4) m RNA原位杂交 .结果 与正常对照组相比 ,假手术组和单纯 SBI组阳性神经元数以及信号灰度均无明显改变 (P>0 .0 5 ) ;与假手术组相比 ,单纯 DBI组和合并 SBI组 ,m Glu R4m RNA表达于脑损伤后 1h即有明显增加 (P<0 .0 1) ,单纯 DBI组在 6 h达到高峰 ,合并 SBI组于 12 h达到高峰 ,此刻与单纯 DBI组相比 ,合并 SBI组亦明显增加 (P<0 .0 1) .结论 m Glu R4参与了 DBI和 SBI的病理生理过程 。

大鼠脑内代谢型谷氨酸受体1、1α亚型的定位分布

用代谢型谷氨酸受体１和１α亚型（ｍＧｌｕＲ１和ｍＧｌｕＲｌα）的特异性抗体的免疫细胞化学染色技术，研究了其在大鼠脑内的定位分布。结果显示，ｍＧｌｕＲ１阳性神经元密集地分布于Ｃａｌｌｅｊａ岛、伏核、斜角带核、外侧隔核背侧部、齿状回、下丘脑外侧区、内侧视前区、乳头体核、丘脑中线核团、脚周核、脚间核、中脑导水管周围灰质腹外侧区、被盖背外侧核、面神经上核和小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ细胞层。ｍＧｌｕＲｌα阳性神经元主要分布在嗅球的小球层、副嗅核、斜角带核、外侧隔核背侧部、隔海马核、伏核、苍白球、腹侧苍白球、海马、外侧缰核、底丘脑核、下丘脑内侧核、外侧嗅束核、黑质网状部和小脑分子层。ｍＧｌｕＲ１和ｍＧｌｕＲｌα在大鼠脑内的分布如此广泛，说明ｍＧｌｕＲ１和ｍＧｌｕＲｌα在大鼠脑内谷氨酸能纤维联系通路的兴奋性突触传递方面扮演了重要角色。

局灶脑缺血大鼠代谢型谷氨酸受体5mRNA表达及意义

目的观察局灶脑缺血大鼠脑组织中代谢型谷氨酸受体5mRNA(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5 mRNA)在脑缺血不同时段的表达及其动态变化的规律,探讨其在急性脑缺血中变化的意义。方法55只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脑缺血1、3、6、12及24h组(手术组)及其相对应的假手术对照组,采用线栓法制备大鼠MCAO模型,至上述规定时间点后取大脑组织,利用地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交技术判断神经元阳性表达的强弱,用计算机图像分析系统检测各组mGluR5 mRNA表达的灰度值及阳性细胞数。结果各手术组mGluR5 mRNA表达均高于假手术对照组及正常对照组,与正常对照组相比,缺血1h其表达即有升高,至6h达高峰。而假手术对照组与正常对照组相比无统计学意义。结论急性脑缺血可引起mGluR5 mRNA表达上调,提示mGluR5参与了局灶性脑缺血损伤,可能促进了缺血性脑血管病的发展。

大鼠脊髓后角内5型代谢型谷氨酸受体与C纤维的关系——免疫组织化学及电镜研究

目的 揭示大鼠脊髓后角内 5型代谢型谷氨酸受体 (mGluR5 )与一级传入C纤维的关系。 方法 在大鼠单侧足底注射福尔马林作为疼痛刺激 ,应用免疫组织化学技术光镜下观察疼痛对脊髓后角内mGluR5的影响 ;在大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素 ,以毁损C纤维 ,用免疫电镜技术观察大鼠脊髓后角浅层内mGluR5阳性结构与C纤维间的超微结构关系。 结果 脊髓后角疼痛刺激侧Ⅰ～Ⅱ层内mGluR5免疫反应性较对照侧明显增强 ;在蛛网膜下腔注射辣椒素的大鼠 ,电镜下可见其后角浅层内大量变性的C纤维轴突终末与 1至多个含mGluR5的树突形成突触联系。 结论 提示脊髓后角浅层内mGluR5主要作为突触后受体参与介导和调节C纤维内对伤害性信息的传入。

代谢型谷氨酸受体1和5激动剂改善阿霉素诱导的小鼠肾损伤

目的研究选择性代谢型谷氨酸受体1和5(mGluR1/5)激动剂3,5-二羟基苯甘氨酸(DHPG)对阿霉素(ADR)肾病小鼠模型的作用。方法 18只6周龄BALB/c小鼠随机分为对照组、ADR组(经尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病小鼠模型)和ADR+DHPG组(建模前预先注射DHPG),每组6只。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠24 h尿白蛋白水平,透射电子显微镜观察足细胞足突形态和宽度;免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察足细胞标志蛋白nephrin和损伤标志蛋白desmin的表达,免疫组织化学法检测肾小球WT-1表达;TUNEL染色检测足细胞凋亡情况。结果在对照组、ADR组和ADR+DHPG组24 h尿白蛋白分别为(1.67±0.22)、(22.55±2.34)和(8.23±2.74)mg,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。与ADR组比较,ADR+DHPG组小鼠足细胞的足突宽度缩短,desmin表达减少,而nephrin表达增加。肾小球中WT-1阳性细胞数与凋亡细胞数呈显著负相关(R2=0.8 482,P<0.05);ADR+DHPG组足细胞凋亡数显著少于ADR组(P<0.01)。结论选择性mGluR1/5激动剂DHPG可抑制ADR诱导的足细胞足突融合、nephrin表达减少和细胞凋亡,减少阿霉素肾病小鼠的白蛋白尿。

代谢型谷氨酸受体5与白细胞介素1受体Ⅰ型在大鼠大脑皮质及海马神经元的共存

目的 研究代谢型谷氨酸受体 5 (mGluR5 )和白细胞介素 1受体Ⅰ型 (IL 1RⅠ )在大鼠大脑皮质和海马的分布及共存状况。方法 采用相邻切片的免疫细胞化学双标法 ,在两张相邻脑冠状切片上分别显示mGluR5与IL 1RⅠ的免疫组化染色结果 ,通过显微摄像确定mGluR5 /IL 1RⅠ双标神经元。结果 切片上mGluR5阳性产物为蓝黑色 ,定位于细胞膜上 ;IL 1RⅠ阳性产物为棕黄色 ,主要定位于细胞膜 ,也存在于神经元内。在大鼠大脑皮质及海马锥体细胞层均存在较丰富的mGluR5及IL 1RⅠ阳性神经元。在大脑皮质 ,有部分神经元内mGluR5与IL 1RⅠ共存 ;在海马锥体细胞层 ,mGluR5及IL 1RⅠ阳性反应细胞密集 ,分布区重叠 ,很可能也存在二者共存的神经元。结论 大鼠大脑皮质内存在mGluR5及IL 1RⅠ共存神经元。

神经病理性疼痛中代谢型谷氨酸受体5型的表达变化

目的研究神经病理性疼痛形成过程中脊髓背角和背根神经节(DRG)代谢型谷氨酸受体5型(mGluR5)表达的改变。方法雄性SD大鼠84只随机分为7组(n=12)Con组为空白对照组;S3、S7、S14组分别为假手术后3、7、14d测痛阈取标本;C3、C7、C14组分别为慢性坐骨神经紧缩性神经病理性疼痛(CCI)模型术后3、7、14d测痛阈取标本。术后3、7、14d分别用VonFrey细丝测量机械性痛阈后处死大鼠,取腰膨大脊髓背角和DRG的标本,用RT-PCR和免疫蛋白印迹方法从转录和翻译水平研究mGluR5的表达变化。结果CCI手术组的术后痛阈均显著低于Con组和同时间段的假手术组(P<0.05)。CCI术后3d脊髓背角水平mGluR5的mRNA和蛋白质表达显著高于假手术3d组和Con组(P<0.05),而术后7和14d时CCI组与假手术组和空白对照组比较差异无显著性(P>0.05)。在DRG水平,mGluR5的表达差异均无显著性(P>0.05)。结论脊髓水平的mGluR5在CCI神经病理性疼痛模型早期表达明显升高,提示参与神经病理性疼痛的形成。