大鼠颈上神经节代谢型谷氨酸受体7,8的表达及慢性间歇性低氧对其的影响

目的研究大鼠颈上神经节(SCG)组织中III组代谢型谷氨酸受体7和8(mGluR7/8)的表达、定位,以及慢性间歇性低氧(CIH)对mGluR7和mGluR8蛋白表达量的影响。方法选取8周龄雄性SD大鼠30只,免疫组织化学染色检测大鼠SCG组织中mGluR7和mGluR8的表达。免疫荧光共定位染色检测mGluR7和mGluR8的分布。核浆分离蛋白进行Western blot检测mGluR7和mGluR8在细胞浆和细胞核的分布情况。构建6周CIH大鼠模型,CIH组放于低氧小室中:首先向小室内充入100%氮气,使氧浓度分数逐渐降低至6%并维持30 s,然后充入100%氧气,使氧浓度分数回升至21%,作用周期为4 min/次,8 h/d,对照组放于常氧环境中。通过尾动脉血压检测大鼠收缩压、舒张压和平均动脉压的变化。Western blot检测CIH对SCG中mGluR7和mGluR8蛋白表达量的影响。结果大鼠SCG表达mGluR7和mGluR8。mGluR7分布于神经元和小荧光(SIF)细胞,上述细胞胞浆和胞核中均染色阳性,而在卫星胶质细胞(SGCs)、神经纤维和血管中不表达;mGluR8定位于神经元和SIF细胞的胞浆中,而在SGCs、神经纤维和血管中不表达。大鼠SCG核浆蛋白检测结果进一步证实mGluR7不仅存在于胞浆也存在于胞核蛋白中,而mGluR8仅存在于胞浆蛋白中。动物实验结果显示,与对照组相比,CIH升高大鼠的收缩压(P<0.0001)、舒张压(P<0.001)和平均动脉压(P<0.0001)。CIH增加mGluR7和mGluR8的蛋白表达量(P<0.05)。结论mGluR7和mGluR8均表达于大鼠SCG,但是细胞定位方式不同,CIH升高大鼠血压并增加mGluR7和mGluR8蛋白在SCG的表达水平。

代谢型谷氨酸受体7基因的拷贝数变异与精神分裂症的相关性

目的探讨代谢型谷氨酸受体7(GRM7)基因的拷贝数变异(CNVs)与精神分裂症的相关性。方法收集180例中国山西汉族精神分裂症患者和33名正常对照的DNA样本及资料。应用实时定量PCR方法检测位于GRM7基因外显子2上游200 bp处和外显子8附近的CNVs。同时对实时定量PCR扩增区的基因序列进行测序。结果相对拷贝数分析显示,在GRM7基因外显子2上游200 bp处,1例精神分裂症患者具有双等位基因缺失,13例患者和1名正常对照具有单个等位基因缺失。测序显示GRM7基因外显子2上游200 bp处实时定量PCR反向引物(GRM7-SV-1R)的3末'端上游第5个碱基发生了C>G变异,实时定量PCR扩增中发现的等位基因缺失均由碱基变异导致。结论实时定量PCR结合测序可以避免PCR引物序列变异导致的假阳性缺失,是检测CNVs的有效方法。本研究GRM7基因的CNVs与精神分裂症无相关性,提示GRM7基因的CNVs可能不是中国汉族精神分裂症发病的主要原因,然而其潜在的罕见CNVs可能和部分精神分裂症有关,有待于进一步研究。

中脑导水管周围灰质腹外侧区促代谢型谷氨酸受体亚型7和8对大鼠心脏-躯体运动反射的双向调节作用

目的观察中脑导水管周围灰质腹外侧区(VL-PAG)内促代谢型谷氨酸受体亚型7(mGluR 7)和8(mGluR 8)对大鼠心脏-躯体运动反射(CMR)的调节作用。方法通过心包插管术制作CMR大鼠模型,在VL-PAG内分别注射mGluR 7和mGluR 8的激动剂AMN082和DCPG,观察其对大鼠CMR的调节作用;同时电损毁延髓头端腹内侧区(rostroventral medulla,RVM)亚核中的中缝大核或双侧网状巨细胞核,观察VL-PAG对大鼠CMR的下行调控作用。结果 AMN082选择性激活VL-PAG内mGluR7后,对辣椒素诱发的CMR具有明显的易化作用(P<0.05);与之相反,DCPG激活VL-PAG内mGluR 8对CAP诱发的CMR具有明显的抑制作用(P<0.05);这种易化或抑制效应均可被其拮抗剂MSOP完全拮抗;损毁大鼠VL-PAG的主要中继亚核中的中缝大核后,VL-PAG内AMN082微注射所产生的易化效应没有受到明显的影响(P>0.05),VL-PAG内DCPG微注射所产生的抑制效应被部分地减弱(P<0.05);而双侧网状巨细胞核损毁后,AMN082微注射所产生的易化效应明显被减弱,同时DCPG所产生的抑制效应也有所减弱。结论VL-PAG内mGluR 7和mGluR 8对大鼠CMR具有易化和抑制双向调节效应,而这种双向调节效应很可能是通过RVM的不同亚核、不同神经元的激活而实现的。

代谢型谷氨酸受体7对人胚胎神经干细胞增殖的影响

目的研究代谢型谷氨酸受体7(mGluR7)对人胚胎神经干细胞增殖的影响。方法利用MTT比色法分析mGluR7过表达载体、mGluR7siRNA在不同时间对体外的人胚胎NSCs细胞活力的影响,神经球测量方法分析mGluR7对人神经球生长的影响,流式细胞术分析mGluR7对人NSCs细胞周期及细胞凋亡的影响。结果MTT结果表明在处理24 h,48 h和72 h后,mGluR7显著增强人NSCs的细胞活力,增殖细胞数量显著增多,神经球直径显著增大,mGluR7siRNA抑制人神经球的增殖。过表达mGluR7后,与对照组相比G1/G0期和细胞比率显著下降,S期细胞比率显著上升,mGluR7过表达促进了细胞G1到S期转化,沉默mGluR7将人NSCs细胞阻滞在G1/G0期。应用流式细胞术分析过表达mGluR7对人NSCs细胞凋亡的影响,转染48 h后,早凋晚凋均显著下降,沉默mGluR7能够显著诱导人NSCs的早凋和晚凋。结论mGluR7可促进体外培养的人胚胎皮质NSCs增殖。

不同年龄段感音神经性聋患者谷氨酸受体7基因多态性分析

目的研究不同年龄段感音神经性聋患者代谢型谷氨酸受体7(GRM7)基因rs11928865、rs11920109位点单核苷酸多态性(SNP)及其与年龄的相关性。方法研究对象为906例感音神经性聋患者和755例健康体检者,按年龄段分为试验组(感音神经性聋A组和B组)和对照组(健康体检者C组和D组),A组467例(30~50岁),平均听阈50.91±19.34dB HL,B组439例(51~70岁),平均听阈53.53±18.44dB HL,C组278例(30~50岁),平均听阈9.22±6.39dB HL,D组477例(51~70岁),平均听阈11.33±6.25dB HL。各组分别采集外周血抽提DNA,应用Sequenom MassARRAY方法进行SNP位点分析。对试验组与对照组间的GRM7基因rs11928865、rs11920109位点基因型及等位基因频率进行统计学分析。结果51~70岁年龄段感音神经性聋组与对照组间rs11928865位点基因型分布差异有统计学意义(P=0.018),30~50岁年龄段感音神经性聋组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);rs11920109位点基因型在30~50岁及51~70岁年龄段感音神经性聋组与对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 GRM7基因rs11928865位点多态性与51~70岁年龄段感音神经性聋易感性相关,但与30~50岁年龄段感音神经性聋易感性无相关性。

GRM7突变相关老年性耳聋研究进展

代谢型谷氨酸受体7基因(GRM7)编码的蛋白产物mGluR7主要存在于耳蜗的内、外毛细胞和螺旋神经节细胞内。mGluR7除了能与Gi/o-蛋白偶联、抑制腺苷酸环化酶和cAMP的形成、与G蛋白偶联内向整流钾通道调节突触功能之外,还能调节毛细胞和传入神经树突之间谷氨酸的浓度和传递。目前关于GRM7的研究主要集中于精神疾病方面,而对老年性耳聋的研究较少,其导致老年性耳聋的具体致病机制仍不清楚。本文旨在综述GRM7基因突变相关的老年性耳聋研究进展,以期进一步推动探索GRM7基因突变致聋机制研究与治疗措施更新。

扶正祛邪方加减治疗失眠症的药效及其对脑组织内GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7表达的影响

目的 探究扶正祛邪方加减对氯苯丙氨酸(para-chlorophenylalanine, PCPA)失眠模型小鼠的镇静催眠作用及其对脑组织内γ-氨基丁酸A受体α1(gamma-aminobutyric acid A receptor subtype α1, GABA ARα1)、5-羟色胺1A受体(5-hydroxytryptamine 1A receptor, 5-HT1AR)、代谢型谷氨酸受体7(metabotropic glutamate receptor 7, mGluR7)表达的影响。方法 将50只小鼠随机分为空白对照组、模型组、艾司唑仑组、高剂量组和低剂量组,连续灌胃给药7 d后,各组小鼠进行戊巴比妥钠协同睡眠实验和旷场试验的行为学测试,分别采用RT-qPCR和Western blot法检测脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7 mRNA和蛋白的表达以及mGluR7/GABA ARα1的比值。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠睡眠潜伏期延长(P<0.05),睡眠时间缩短(P<0.05),旷场试验中总的区域路程延长(P<0.05),中心区停留时间缩短(P<0.05),脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR m RNA和蛋白的表达均降低(P<0.05),mGluR7 mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。与模型组比较,艾司唑仑组和高剂量组、低剂量组小鼠睡眠潜伏期缩短(P<0.05),睡眠时间延长(P<0.05),总的区域路程减少(P<0.05),中心区停留时间增加(P<0.05),脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白的表达上升(P<0.05),mGluR7 m RNA和蛋白表达降低(P<0.05),m GluR7/GABA ARα1下降(P<0.05)。与艾司唑仑组比较,高剂量组、低剂量组小鼠睡眠潜伏期和总区域路程增加(P<0.05),睡眠持续时间和中心区停留时间减少(P<0.05),GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白表达下降(P<0.05)、mGluR7 mRNA和蛋白表达上升(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。与高剂量组比较,低剂量组小鼠睡眠潜伏期、总区域路程增加(P<0.05),睡眠持续时间、中心区停留时间减少(P<0.05),GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白表达下降(P<0.05)、mGluR7 m RNA和蛋白表达上升(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。结论 扶正祛邪方加减可以改善PCPA失眠模型小鼠的睡眠,有较好的镇静催眠作用,其机制可能是通过调节脑组织内GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7水平发挥作用。

局灶性脑缺血大鼠脑室下区的mGluR7的表达

目的通过动态观察代谢型谷氨酸受体7亚型(mGluR7)在局灶性脑缺血大鼠不同再灌注时段SVZ的表达,探讨神经发生的机制。方法采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)2h,再灌注不同时间段(6h,24h,72h,7d,14d,28d)的大鼠短暂局灶性脑缺血模型,用免疫组化方法检测mGluR7的表达。结果缺血侧SVZ(脑室下区)的mGluR7于再灌注24h开始增加,72h达到高峰(P<0.05),以后逐渐回落至正常水平。此外,mGluR7阳性细胞还可明显见于梗死区周围,尾壳核,隔外侧核,梨状内核,部分大脑皮质等区域。结论短暂脑缺血能刺激SVZ的mGluR7表达上调,后者可能参与此处由缺血引发的神经前体细胞活化。

局灶性脑缺血大鼠脑室下区mGluR7与PCNA的表达

目的：动态观察代谢型谷氨酸受体7型（mGluR7）及增殖细胞核抗原（PCNA）在局灶性脑缺血大鼠不同再灌注时段前脑侧脑室的脑室下区（SVZ）中的表达,探讨神经发生的机制。方法：42只体重为280-300 g的雄性SD大鼠随机分为假手术组、再灌注不同时间段（6 h、24 h、72 h、7 d、14 d、28 d）组,每组各6只。采用改良的线栓法制备大脑右侧中动脉阻塞（MCAO）2 h的大鼠短暂局灶性脑缺血模型,用免疫组化方法检测各组SVZ的mGluR7和PCNA的表达变化。结果：与对照组相比,缺血侧SVZ的mGluR7阳性细胞于再灌注24 h开始增加（P〈0.05）,再灌注72 h达到高峰,以后逐渐回落至正常水平。再灌注72 h时非缺血侧mGluR7阳性细胞亦有明显升高（P〈0.05）。此外,mGluR7阳性细胞还可明显见于梗死区周围,尾壳核、隔外侧核、梨状内核、部分大脑皮质等区域;再灌注24 h,无论缺血侧还是非缺血侧PCNA的阳性标记细胞数目均明显增加,高峰出现在再灌注7 d（P〈0.01）,并维持较高水平至再灌注14 d,再灌注28 d时数量虽已下降,但仍明显高于对照组（P〈0.05）。再灌注72 h、7 d时,缺血侧PCNA阳性表达细胞数显著高于非缺血侧（P〈0.05）。结论：短暂脑缺血能刺激SVZ的细胞增殖和mGluR7的表达上调,后者可能参与此处由短暂局灶性脑缺血引发的神经发生过程。

GRM7基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系

目的研究汉族职业噪声接触人群中代谢型谷氨酸受体7基因(metabolic glutamate receptor 7 gene,GRM7)多态性与噪声性听力损失(noiseinduced hearing loss,NIHL)易感性关系。方法采用1比1匹配的巢式病例-对照研究方法,从某钢铁厂噪声接触工人的研究队列中选取听力损失组277例,根据同性别、同工种、年龄相差≤5岁、接触噪声工龄相差≤2年的匹配标准,得到对照组277例。通过中高通量单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)分型检测技术(SNPscanTM法)检测GRM7基因rs3749380、rs11928865、rs9877154、rs3828472、rs9819783、rs11920109、rs1485175及rs9826579位点的多态性。构建加性、显性、隐性、共显性4种基因模型,分析其与NIHL易感性之间的生物学关联。使用Phase 2.0.2构建研究对象可能的双体型,并分析其与NIHL之间的关系。按照累积噪声暴露量(cumulative noise exposure,CNE)分层分析影响因素间交互作用。采用单因素及多因素条件Logistic回归分析GRM7基因与NIHL间的联系。结果听力损失组和对照组一般人口学特征比较发现,吸烟的个体发生NIHL的危险度是不吸烟个体的2.051倍(95%CI 1.456~2.891,P<0.001)。GRM7基因多态性与NIHL易感性关系的分析中未发现差异具有统计学意义的结果。结论吸烟可增加职业噪声接触工人发生NIHL的风险;未发现GRM7基因多态性与NIHL易感性之间的关系。