推拿改善T2DM大鼠糖脂代谢性炎性损伤的分子机制研究

目的:观察推拿对2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)大鼠腹直肌组织腺苷酸活化蛋白激酶_(α2)(AMPK_(α2))、核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)基因转录及蛋白表达的影响,探讨其改善T2DM大鼠代谢性炎性损伤的分子机制。方法:选取40只Wistar大鼠,随机取出6只为空白组,其余高脂高糖饮食联合低剂量(35 mg/kg)链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM模型,成模大鼠32只随机分入模型组、西药组、推拿组及西药推拿组。空白组及模型组每日灌胃蒸馏水,西药组每天以250 mg/kg标准进行二甲双胍灌胃1次,推拿组每日给予推拿手法治疗1次,西药推拿组在相同给药标准基础上每日加用推拿治疗1次。共干预8周,分别记录第2、4、8周的空腹血糖(Fast Blood Glucose,FBG)值,并运用realtime-PCR测定腹直肌AMPK_(α2)、NF-κB及IL-6基因转录,Western-blot测定腹直肌AMPKα2及NF-κB蛋白含量,ELISA测定IL-6蛋白含量。结果:与模型组比较,西药组及西药推拿组FBG在第2、4、8周时显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01),推拿组FBG在第4、8周时显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05);与西药组比较,西药推拿组在第4周降糖效果更为显著,差异有统计学意义(P <0. 05);与推拿组比较,西药推拿组在第4、8周时降糖效果更为显著,差异有统计学意义(P <0. 05);与0周时比较,各观察组FBG在第2、4、8周时,均显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01)。与空白组比较,模型组AMPK_(α2)mRNA转录及蛋白表达均下降,差异有统计学意义(P <0. 05);与模型组比较,西药组、推拿组、西药推拿组AMPK_(α2)mRNA转录及蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P <0. 05)。与空白组比较,模型组NF-κBmRNA转录显著升高,差异有统计学意义(P <0. 01),蛋白表达升高,差异有统计学意义(P <0. 05);与模型组比较,西药组NF-κBmRNA转录下降,差异有统计学意义(P <0. 05);与模型组比较,推拿组NF-κBmRNA转录及蛋白表达均下降,差异有统计学意义(P <0. 05);与模型组比较,西药推拿组NF-κBmRNA转录和蛋白表达显著下降,差异有统计学意义(P <0. 01,P <0. 05);与空白组比较,模型组IL-6 mRNA转录升高,差异有统计学意义(P <0. 05),蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P <0. 01);与模型组比较,西药组、推拿组及西药推拿组IL-6基因转录均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01),蛋白表达均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 01)。结论:推拿可改善T2DM大鼠的空腹血糖,并通过上调骨骼肌AMPK_(α2)基因转录与蛋白表达,下调NF-κB、IL-6基因转录与蛋白表达,发挥其改善糖脂代谢性炎性损伤的手法效应。

虎杖苷对间质性肺病模型小鼠免疫炎性代谢性损伤的影响

目的 探讨虎杖苷(Polydatin, PD)对博来霉素(Bleomycin, BLM)诱导肺间质病变小鼠的干预作用及机制。方法 采用SPF级雄性C57/BL6小鼠,体质量(20±2)g,经BLM气管内滴注诱导间质性肺病模型,将造模成功的30只小鼠按随机数表法分为模型组6只、阳性药组6只、PD高、中、低剂量组各6只,另选6只未造模小鼠作为正常对照组。正常对照组和模型组予蒸馏水10 ml/(kg·d),阳性药组给予泼尼松7.5 mg/(kg·d),PD高、中、低剂量组分别给予PD 200 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)剂量灌胃给药,其中PD高剂量组2次/d灌胃给药。干预4周后处死小鼠,采集肺组织标本。以HE染色观察肺组织病理改变;RT-PCR技术检测肺组织AMPKα1、PPARγ、PGC-1α mRNA转录水平;Western Blot技术检测肺组织AMPKα1、pAMPKα1、PPARγ、PGC-1α、HMGB1、TGF-β1、NF-κB p65蛋白表达水平。结果 模型组小鼠较正常对照组有明显病理改变(P<0.01),主要表现在肺组织炎症细胞浸润、间质纤维化;阳性药组肺组织炎症病变较模型组有改善(P<0.05);PD各治疗组小鼠出现肺组织炎症细胞浸润、间质纤维化较模型组有改善(P<0.05)。RT-PCR结果显示模型组小鼠肺组织中AMPKα1、PPARγ、PGC-1α mRNA转录水平较正常对照组有下降趋势,阳性药及PD各治疗组小鼠肺组织中AMPKα1、PPARγ、PGC-1α mRNA转录水平较模型组均有升高趋势;阳性药组及PD各组间变化无明显差异。Western Blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠肺组织中HMGB1、NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.01),AMPKα1、pAMPKα1、PPARγ、PGC-1α蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组及PD高剂量组AMPKα1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),PD高、低剂量组pAMPKα1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),PD中剂量组PPARγ蛋白表达水平明显升高(P<0.05);阳性药组HMGB1、PD低剂量组NF-κB p65蛋白表达水平明显下降(P<0.05),其余各治疗组HMGB1、TGF-β1、NF-κB p65较模型组均有下降趋势;阳性药组及PD各组间变化无明显差异。结论 PD能够改善CTD-ILD模型小鼠肺组织炎症病理损伤,改善肺间质纤维化病理改变,抑制免疫炎性损伤,其作用机制可能是通过激活AMPKα1/PPARγ/PGC-1α信号通路,抑制下游免疫炎性因子HMGB1、NF-κB的高表达,改善肺组织免疫炎性损伤;抑制纤维化细胞因子TGF-β1的释放,改善肺组织免疫炎性损伤及间质纤维化。