“以方测证”方法应用的反思

通过总结“以方测证”方法的应用概况,指出在应用过程中主要存在实验对照设立不合理、药效学指标的选择过于简单、“药病对应”的研究受到忽视等问题。从而提出应用“以方测证”方法进行研究,必须设立对照;病证结合是“以方测证”的关键点;方剂功效的界定是“以方测证”的前提等相应的研究思路和对策。

原发性甲状腺功能减退症的以方测证研究

目的:观察不同方药对甲减鼠甲状腺功能、形态的影响,探求原发甲减的病机。方法:Wistar大鼠70只,20只为正常组,正常饲养;50只为实验组,参照Kolaja法造模,成模后随机分成4组:模型组、补中益气汤组、逍遥散组和金匮肾气丸组,给予相应处理因素,90天后观察甲状腺功能和形态。结果:①血清TT3:补中益气汤组低于正常组,高于模型组,高于其他两组,与逍遥散组比,P<0.05,与金匮肾气丸组比,P>0.05。逍遥散组和金匮肾气丸组均明显低于正常组。②血清TT4:其余4组与正常组比,P均<0.05,但各组间比较无显著性差异。③血清TSH:补中益气汤组高于正常组,低于模型组,与其他两组比,P均<0.05。④甲状腺相对重量:补中益气汤组高于正常组、低于模型组,P均<0.05,低于其他两组,但P>0.05。逍遥散组和金匮肾气丸组均高于正常组,P均<0.05。⑤甲状腺形态:三治疗组均可使甲状腺滤泡增生及血流方面有不同程度的改善,以补中益气汤组明显,但仍未恢复正常。结论:在低碘致甲减机体中,补中益气汤可以较好地改善甲状腺功能及形态,从而推测脾气虚弱在甲减发病中起重要作用。

以方测证法不可行论

发现“以方测证法”之不可行的临床事实;“以方测证法”不满足充分条件命题的逻辑特征;“以病机命名的证候”与“以方剂命名的证候”是属性与个体的关系,是一主词与谓词的关系。“以方测证法”之使用者没有搞清楚“以病机命名的证候”与“以方剂命名的证候”是不一致的,即不具有同一性。无论其内涵与外延均是不同的。

关于“以方测证”方法的思考

依据辨证论治的经验和“方证相关”的原理,对“以方测证”的应用及其逻辑合理性进行讨论并提出质疑,指出由于方效与病证内涵的不确定性、方剂的多效性以及缺乏排他性设计等原因,利用“以方测证”方法建立中医证候动物模型的手段还存在方法学上的严重缺陷。全面和深入认识方证关系及其内涵是中医方证研究领域的一个重要课题。

腹泻病气阴两虚证病证结合模型构建及以方测证研究

目的:探讨研究以高浓度苦寒泻下、劳倦力竭复合因素构建气阴两虚证病证结合腹泻动物模型。方法:40只KM小鼠随机抽取10只为空白组,其余用作腹泻模型制备。采用25%高浓度番泻叶灌胃使其重泻伤其阴液,加以负重游泳使其力竭致气虚的复合因素造模,参照文献判定造模成功后随机分为中药组、西药组和模型组,分别给予加味人参乌梅汤、蒙脱石散及生理盐水,5 d后采集样本作相应检测。结果:模型组小鼠血清D-木糖、丙二醛(MDA)、乳酸(LD)浓度与空白组比较有显著统计学差异(P<0.01),治疗组与模型组比较有统计学意义(P<0.01)。模型组结肠病理评分与空白组比较有显著差异(P<0.01),模型组结肠病变程度高;治疗组与模型组比较有统计学差异(西药组P<0.05,中药组P<0.01),病变程度有明显的改善;中药组在治疗恢复期有其明显优势。结果:与正常组相比,模型组体重降低明显(P<0.01),中药组和西药组小鼠体重较模型组体重显著增加(P<0.01);与正常组相比,模型组动物的稀便数和稀便率有统计学意义(P<0.01),中药组和西药组的稀便数与模型组相比有显著差异(中药组P<0.01或西药组P<0.05),稀便率均显著降低(P<0.01);模型组小鼠血清D-木糖、丙二醛(MDA)、乳酸(LD)浓度与正常组比较有显著统计学差异(P<0.01),西药组和中药组与模型组比较均有统计学意义(P<0.01),中药组与西药组比较,中药组更接近于正常组;结肠病理评分,模型组与正常组比较有显著差异(P<0.01),提示模型组结肠病变程度高;中药组和西药组与模型组比较均有统计学差异(西药组P<0.05,中药组P<0.01),说明药物干预后,病变程度有明显改善,中药组与西药组比较有其明显优势。结论:高浓度苦寒泻下、劳倦力竭复合因素构建的气阴两虚证病证结合腹泻模型是较为可行、稳定的造模方法,值得进一步研究。

急性心力衰竭模型的建立及“以方测证”研究

目的:研究家兔急性心力衰竭(心衰)模型建立方法,并探究该模型与心气虚、心阳虚、心阳虚脱三证的相关性。方法:将30只家兔随机分为空白组、模型组、黄芪组、参附1组、参附2组,每组各6只。除空白组外,各组采用静脉注射盐酸普罗帕酮复制急性心衰模型。黄芪组、参附1组、参附2组分别注射黄芪注射液0.07 g·kg^(-1)、参附注射液0.07 g·kg^(-1)和参附注射液0.10 g·kg^(-1),测定各组家兔心率(heart rate,HR)、收缩压(systolic pressure,SBP)等相关生理指标,以探究此建模方法与中医心气虚证、心阳虚证、心阳虚脱证的相关性。结果:与模型组比较,黄芪组、参附1组和参附2组能显著升高急性心衰家兔HR和SBP,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:急性心衰模型与心气虚、心阳虚、心阳虚脱证有一定相关性。

多因素复合建立脾气虚证大鼠模型及以方测证研究

目的:以大黄法、游泳力竭法、饥饿法多因素复合建立一种新的脾气虚证大鼠模型。方法:动物随机分为对照组、模型组及中药组,以多因素复合法对模型组及中药组大鼠进行造模,21天后处理部分大鼠,检测指标。其余大鼠继续实验,以黄芪建中汤灌服中药组,生理盐水灌服对照组及模型组,21天后处理大鼠,检测指标。结果:造模大鼠血清木糖浓度、血清肌酸磷酸激酶活性、血清胃泌素水平下降,胃窦G细胞数减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);经健脾中药复建后,中药组大鼠的脾气虚症状、体征缓解,上述指标恢复,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:多因素复合复制的脾气虚证大鼠模型稳定性良好,克服了单因素造模持续时间短、自愈性强的缺点,经得起药物反证,是一种可行而稳定的脾气虚证造模方法。

“以方测证”法在动物模型研究中的运用

近年来"以方测证"法广泛运用于实验动物证型研究,推动中医药研究发展的同时也引起了不少质疑。现针对近年来的相关文献,从理论基础、存在的问题、改进的方案与设想等方面进行综述,旨在为以后的实验研究提供新的思路。

“以方测证”在中医证候模型研究中的应用述评

"以方测证"是现阶段证候模型研究的重要手段,在促进"证"研究深入的同时亦暴露出部分问题。总结近年来"以方测证"在证候模型研究中的应用概况,对研究中涉及的方证关系、实验设计、评判标准、病证结合等关键问题进行论述,提出方药功效的界定是关键前提、合理设立对照实验是关键环节、重视评判标准的多元化、遵循病证结合的研究框架等相应的研究思路与对策,以期为进一步研究提供借鉴。

基于“以方测证”理论探讨异丙肾上腺素诱导慢性心力衰竭大鼠模型的制备及中医证型

目的 构建异丙肾上腺素(isoprenaline, ISO)诱导的慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)大鼠模型,运用以方测证法反推其中医证型。方法 采用随机数字表法将SD大鼠分为正常组及ISO低、中、高剂量组。制备CHF大鼠模型,将成模大鼠按随机数字表法分为6组:模型组、参附组、丹红组、参麦组、黄芪组、普萘组。分别于造模结束后、给药15 d后,检测各组大鼠心脏质量指数及左心室质量指数;超声心电图检测各组大鼠心功能;ELISA法检测大鼠氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro brain natriuretic peptide, NT-pro BNP);HE及Masson染色方法观察大鼠心脏组织病理形态以及纤维化状态改变。结果 不同剂量ISO诱导CHF大鼠模型的制备:与正常组比较,ISO低剂量组各方面均无明显改变;ISO中、高剂量组大鼠左室射血分数(left ventricular fraction shortening, LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening, LVFS)、体质量降低(P<0.01),左心室舒张末期内径(left ventricular internal dimension diamete, LVIDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular internal systolic dimension, LVISD)、NT-pro BNP、心脏质量指数、左心室质量指数明显升高(P<0.01),但ISO高剂量组死亡率低、炎性细胞浸润及纤维化程度更高。基于“以方测证”理论探讨ISO诱导CHF大鼠中医证型:与模型组比较,参附组LVEF、LVFS、体质量升高,LVIDD、LVISD、NT-pro BNP、心脏质量指数及左心室质量指数降低(P<0.05,或P<0.01);纤维结缔组织增生和炎性细胞浸润明显减少,胶原纤维沉积减轻,仅见少量胶原纤维。其余组各项指标均有改善,但无统计学意义(P>0.05)。结论 ISO中、高剂量均能制备CHF大鼠模型,但ISO高剂量更优。ISO诱导CHF大鼠模型可能属于心阳虚证。

基于“以方测证”法解析钱乙治疗小儿汗证特色

汗证是以汗出为主要症状的疾病。在儿科临床也可是其他病症的兼证。钱乙治疗小儿汗证独具特色,但鉴于其所著《小儿药证直诀》记录文辞简要,诸类汗证证候记录不够丰富立体,给临床推广应用带来一定困难。本文基于《小儿药证直诀》总结归纳了钱乙临证常见的小儿汗证的类型。通过文献查阅及运用“以方测证”的方法,对各类型汗证的证候表现做出了一定的补充,总结了钱乙治疗小儿汗证的特色有四:用药轻灵;盗汗分虚实而治;首次提出“实热盗汗”“太阳虚汗”;治汗不止汗,必审证求因。

中医“以方测证”认识方法初探

"以方测证"认识方法,是从方药性味、功效出发,针对症状,观察临床应用该方药后药效反应,推知病变本质,以更准确地进行中医辨证论治。"以方测证"认识方法可帮助解读中医经典,全面完善中医学理论体系,继而指导提高临床疗效,同时也是一种重要的中医研究方法,在中风病等诸多疾病的治疗和研究中发挥重要作用。但在其运用过程中,仍因中医方药多效性,人体复杂性、整体性,个体医家经验局限性等因素而存在着偏差分歧。应用大数据模式,完善对照组,借助其他学科优势等手段,可进一步完善此认识方法。

三种不同剂型四君子制剂对脾气虚证大鼠血清SOD活性和MDA含量影响及以方测证研究

目的:以饮食失节法、耗气破气法、劳倦过度法多因素复合建立脾气虚证大鼠模型,并从大鼠的体重、肛温、血清中SOD活性和MDA含量的变化方面探讨颗粒剂四君子的影响。方法:将50只大鼠随机分为正常组、模型组、四君子汤组、传统四君子膏组、颗粒四君子膏组,每组10只。采用边造模边给药的方法,隔日电子天平称取大鼠重量,数字温度计检测大鼠肛温,28 d后处死大鼠,用ELISA法测定其血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。结果:与正常组相比,模型组大鼠的体重、肛温、血清SOD活性均下降,MDA含量增多(P<0.05)。经灌胃四君子制剂药物后,大鼠上述指标均有所恢复,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。汤剂组、传统膏剂组及颗粒剂膏组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:四君子汤、传统四君子膏、颗粒四君子膏均有较好的益气健脾的作用,在对大鼠体重、肛温、血清SOD活性和MDA的含量的影响上效应相同。颗粒膏具有制作方便。

基于“以方测证”论《伤寒论》《金匮要略》辨证论治思维

一切事物都是矛盾的统一体,都包含有相互矛盾的两个方面,疾病亦是如此。阴阳、表里、寒热、虚实、气血是疾病矛盾的相对特性,了解疾病在表在里、是寒是热、兼虚兼实、气分血分等相互对立的两个方面,是辨证论治的核心内容。基于“以方测证”理论,通过《伤寒论》和《金匮要略》方证与条文的编列顺序,分析阴阳、表里、寒热、虚实、气血等方面并论述辨证论治的具体过程,即分析四诊资料,抽丝剥茧,去伪存真,找出确定的证,开出对应的方。

浅议“以方测证”法在中医动物模型研究中的运用

随着中医药事业的不断发展,"以方测证"作为一种辨证方法被广泛运用于动物模型研究中。从以下方面对这种方法的使用进行了思考:①以方测证研究应设置合适的对照组。②以方测证观测的实验室指标是否具有中医属性。③以方测证观察过程中观察的四诊内容是否属于证候。④以方测证的适用范围有多广。⑤以方测证的选用的方剂对动物的疗效是否与对人的疗效相同。因此,在没有更好的方法被发现之前,以方测证在动物模型的研究中仍将发挥不可替代的作用。

基于以方测证理论探讨亡阳证动物模型的建立与评价

基于以方测证理论,运用文献分析方法筛查与亡阳证体征表现相对应的西医疾病模型,研究亡阳证中医动物模型,将亡阳证的中医病因模型与筛选的动物模型造模方法相匹配,以参附汤作为亡阳证对证方药再次筛选,得到符合中医证候特征的亡阳证动物模型。两法结合得到符合中医证候特征的亡阳证动物模型。

以方测证话乳痈初起

"以方测证"是方剂学领域的重要研究手段之一。通过对一乳痈患者的治疗,产生对现有乳痈致病因素、病机的怀疑。应用"以方测证"的方法和对其他中医家在乳痈临床治疗方面的用药分析,发现因气血俱虚而致之"寒"与乳痈发病不可或缺的关系。

基于“以方测证”理论从AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路探讨雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型的中医证候属性

目的:采用雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型,基于“以方测证”理论从腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子(AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF)信号通路探索该模型的证候属性。方法:将48只具有规律动情周期大鼠随机分为正常组(n=8)和造模组(n=40),造模组大鼠连续灌胃雷公藤多苷混悬液(75 mL·kg^(-1))30 d,造模后将其分为模型组、四物汤组(3.69 g·kg^(-1))、右归饮组(3.11 g·kg^(-1))、左归饮组(7.29 g·kg^(-1))和归肾丸组(10.35 g·kg^(-1)),每组8只。相应药物干预14 d。巴氏染色检测各组大鼠动情周期变化;体视镜观察卵巢组织形态;苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学及卵泡计数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,次级、成熟卵泡减少,闭锁卵泡增多,FSH、LH、AMPK mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01),E2含量,mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,归肾丸组次级、成熟卵泡增多,闭锁卵泡减少,FSH、LH含量、AMPK mRNA表达及蛋白表达显著降低(P<0.01),E2含量、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA表达及蛋白表达显著升高(P<0.01)。与归肾丸组比较,四物汤组、右归饮组、左归饮组成熟卵泡数量显著减少,闭锁卵泡数量显著增多(P<0.01);四物汤组、右归饮组、左归饮组LH显著升高(P<0.01),FSH明显升高(P<0.05),E2明显降低(P<0.05);右归饮组AMPK蛋白表达明显升高(P<0.05),mTOR和HIF-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),VEGF蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01);四物汤组mTOR和HIF-1 mRNA,VEGF蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05);左归饮组mTOR mRNA和VEGF蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论:归肾丸可以抑制AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路来改善卵泡发育不良大鼠模型的卵巢功能、促进卵泡成熟,且总体疗效优于左归饮、右归饮和四物汤,表明该模型的证候更符合肾精亏虚证。

基于“以方测证”探讨异丙肾上腺素诱导慢性心衰小鼠模型的中医证型及证候本质

目的:采用异丙肾上腺素(ISO)诱导慢性心衰小鼠模型,选用气虚证的代表方黄芪注射液、血瘀证的代表方丹红注射液、气阴两虚证的代表方参麦注射液及阳虚证的代表方参附注射液进行干预,从“以方测证”角度探索该模型的证候属性。方法:通过腹腔注射ISO 7.5 mg/kg进行造模,造模成功后将其分为模型对照组、黄芪注射液9.0 mL/kg组、丹红注射液9.0 mL/kg组、参麦注射液9.0 mL/kg组、参附注射液9.0 mL/kg组和卡托普利16.5 mg/kg组,另设正常对照组。药物干预15 d后,对其进行心功能评价,测定血清NT-proBNP、TNF-α、IL-6含量,检测心、脾及肾组织病理,结合宏观表征探讨其中医证型。结果:与正常对照组比较,模型对照组LVEF、LVFS、LVPWd、LVPWs、IVSd、IVSs值显著降低(P<0.01),LVIDd、LVIDs、LVEDV、LVESV水平,血清NT-proBNP、TNF-α、IL-6含量显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,参附组、卡托普利组LVIDd、LVIDs、LVEDV、LVESV水平,血清NT-proBNP、TNF-α、IL-6含量明显降低(P<0.05或P<0.01),LVEF、LVFS LVPWd值明显升高(P<0.05或P<0.01);参附组、卡托普利组在改善心、脾、肾病理形态学疗效优于其他注射液。结论:参附注射液对ISO诱导心衰小鼠模型的疗效显著且优于黄芪、丹红、参麦注射液,推测该模型的证候属性可能为心阳虚证。

基于“以方测证”探讨阿霉素诱导慢性心衰小鼠模型中医证候属性与鸢尾素表达特点

目的:研究阿霉素诱导的慢性心力衰竭(Chronic Heart Failure,CHF)小鼠模型的病理特点,并从“以方测证”角度评价该模型中医证候属性及生物标志物鸢尾素(IRISIN)的表达特点。方法:小鼠腹腔注射阿霉素5 mg/kg造模,造模成功后将其按随机数字表法分为模型对照组、参附注射液9 mL/kg组、参麦注射液9 mL/kg组和丹红注射液6 mL/kg组。各组腹腔注射相应药物或生理盐水,采用多普勒心脏彩超记录小鼠LVEF、LVFS和SV;ELISA法测定小鼠血清和心肌组织NT-pro BNP、CK-MB和IRISIN含量,Western blot法检测心肌组织CK-MB、IRISIN、BAX、BCL-2和Caspase 3的蛋白表达;HE染色法观察小鼠心肌组织损伤状态,再结合宏观表征探讨该模型中医证型并分析IRISIN在该模型中的表达特点及意义。结果:中药注射液干预后,与正常对照组比较,模型对照组LVEF、LVFS、SV降低,血清NT-pro BNP及CK-MB含量升高,IRISIN含量降低,心肌组织CK-MB、BAX和Caspase3蛋白表达上调,IRISIN、BCL-2蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,参附注射液9 mL/kg组小鼠LVEF、LVFS和SV升高,血清NT-pro BNP、CK-MB含量降低,IRISIN含量显著升高,心肌组织IRISIN蛋白表达上调,CK-MB和NT-pro BNP蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);参麦注射液9 mL/kg组LVEF、LVFS降低,血清IRISIN含量升高,心肌组织NT-pro BNP表达下调,IRISIN表达上调(P<0.05或P<0.01);丹红注射液6 mL/kg组LVEF、LVFS降低,心肌组织NT-pro BNP和IRISIN含量升高(P<0.01)。心肌组织HE染色结果表明,正常对照组和参附注射液9 mL/kg组心肌组织基本处于正常状态,心肌细胞形态规则、排列整齐;与参附注射液9 mL/kg组比较,模型对照组、参麦注射液9 mL/kg组和丹红注射液6 mL/kg组处于轻度或中度心肌损伤状态,心肌呈波浪状,细胞水肿,轻度空泡变性并伴有不同程度的炎症细胞浸润和间质水肿。结论:参附注射液是治疗阿霉素诱导CHF动物模型的有效中药制剂,其作用机制可能与IRISIN抗心肌凋亡相关;基于“以方测证”理论推测阿霉素诱导的CHF小鼠模型属于心阳虚证;心肌组织IRISIN低表达是该心阳虚证模型的生物学特征之一。