以色列急性麻痹病毒LN株全基因克隆与遗传进化分析

研究旨在了解辽宁省以色列急性麻痹病毒(IAPV)的遗传进化特点。试验选取成年患病蜜蜂提取IAPV并进行PCR测序,选取China-BJ (GenBank登录号:KX421583.1)基因序列设计12对引物进行全基因克隆,将获得的基因序列与GenBank已公布的19株IAPV序列进行遗传进化分析。结果显示:试验成功分离出IAPV,并将其命名为IAPV-LN株(GenBank登录号:MZ269472.1)。IAPV-LN株与China-BJ和China-BJ2 (GenBank登录号:MG599488.1)同属一个分支。研究表明,丹东市某蜂场患病蜜蜂中分离得到的IAPV-LN株与China-BJ2、China-BJ的亲缘关系最近,可能来自同一个原始毒株。

以色列急性麻痹病毒(IAPV)研究进展

以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus,IAPV)是一种常见的蜜蜂病毒,于2007年被分离鉴定以来即被发现在世界范围内的不同蜜蜂种间广泛传播,并能侵染熊蜂和胡蜂等其他授粉昆虫。IAPV不仅对蜜蜂造成急性麻痹等症状,其与狄斯瓦螨(Varroa destructor)的协同作用也被认为与越冬期蜂群的大量损失密切相关。针对IAPV的研究多集中在流行病学和致病性上,关于其致病机制及防治方法方面的认识仍较缺乏。全面地对IAPV相关研究进行综述,以期全面认识这一对蜜蜂等授粉昆虫健康产生严重威胁的病毒。

以色列急性麻痹病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立以色列急性麻痹病毒(IAPV)荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中IAPV RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以体外转录制备的重组质粒标准品为模板,经过反应条件优化,建立了IAPV荧光定量RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对70份福建地区临床疑似IAPV感染的蜜蜂样品进行检测,并对阳性样品进行测序验证。结果显示,荧光定量RT-PCR方法的最佳引物和探针浓度分别为0.25μmol/L和0.20μmol/L,最佳退火温度为61℃。该方法仅对IAPV出现阳性扩增信号,对蜜蜂克什米尔病毒、蜜蜂慢性麻痹病毒、蜜蜂残翅病毒、蜜蜂急性麻痹病毒、蜜蜂黑蜂王台病毒、蜜蜂囊状幼虫病毒等6种病毒均未出现扩增,特异性较强;该方法对重组质粒标准品的最低检测限为9.7拷贝/μL,比普通RT-PCR敏感性高约100倍;该方法批内及批间变异系数均小于1.5%,重复性好。利用该方法和普通RT-PCR方法分别对70份临床样品进行检测,结果显示,两种方法的阳性检出率分别为31.4%(22/70)和27.1(19/70),二者的符合率为95.9%。本研究首次建立的IAPV Taq Man荧光定量RTPCR检测方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为IAPV的流行病学调查及其分子生物学的快速检测奠定了基础。

以色列急性麻痹病毒(IAPV)RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立以色列急性麻痹病毒（Israeli acute paralysis virus，IAPV）特异性核酸检测方法，本研究以IAPV polvmerase polyprotein基因为靶基因设计合成1对特异性引物，建立了IAPV的RTPCR检测方法。结果显示，对蜜蜂的5种不同病毒进行RT-PCR检测，只有IAPV病毒检测结果为阳性，具有良好的特异性；对IAPV的最低检测限为10^3拷贝／μL，具有较高的灵敏度；利用该检测方法对来自福建省不同养蜂场的8份蜜蜂样品进行检测，3份样品为阳性，通过序列比对分析，同源性超过99％，进一步证实为IAPV。结果表明，所建立的IAPV RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，具有良好的实用性。

蜜蜂以色列急性麻痹病毒(IAPV)研究进展

2006年冬季至2007年春季,美国发生了大范围的蜜蜂突然消失现象,类似的情况也发生在欧洲的部分地区,引发了严重的授粉危机。科学家对此展开了深入细致的研究并推测以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysisvirus,IAPV)很可能是蜂群崩溃失调病(colony collapse disorder,CCD)的致病因素。随着研究的深入,对CCD的致病因素及其发生机制有了更深入的认识,并趋向于认为多方面的致病因素可能导致了CCD的发生。本文综述了目前国内外对IAPV的研究进展。

秋末蜜蜂病毒病混合感染诊断实例

山东莒县部分乡镇蜂群短期内死亡严重,通过对典型发病蜂场临床症状调查和实验室病毒检测,确诊发病蜂场病因主要为蜜蜂以色列急性麻痹病毒、克什米尔病毒、残翅病毒混合感染,究其原因为秋季治螨不彻底、蜂群饲喂不足、饲养管理不善所造成,建议蜂农更新养殖理念,饲养强群,彻底治螨,搞好蜂场环境卫生,在蜜源匮乏季节要及时饲喂,避免盗蜂发生,从而提高蜂群的抗病能力。

以色列急性麻痹病毒LN株VP2蛋白序列分析及B淋巴细胞抗原表位预测

为分析以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus, IAPV)LN株VP2蛋白的序列并预测B淋巴细胞抗原表位,试验以IAPV-LN株RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP2基因,通过BLAST序列比对获得IAPV-LN株VP2基因的核苷酸序列,并推导氨基酸序列,建立VP2蛋白的3D模型;用DNAStar软件中的Protean模块综合分析VP2蛋白的亲水性、柔性区域、表面可能性和抗原表位等。结果表明:IAPV-LN株VP2基因序列长度为810 bp,编辑了270个氨基酸,其与GenBank中公布的IAPV-BJ株(GenBank登录号为KX421583.1)核苷酸序列同源性为99%,氨基酸序列同源性为99%;与IAPV-BJ2(GenBank登录号为MG599488.1)株核苷酸序列同源性为98%,氨基酸序列同源性为99%。该蛋白是亲水性蛋白质,柔性区域和表面可能性区域较多;IAPV-LN株VP2蛋白空间构象比较规则,其可能形成抗原表位的区域是14~22,167~175,239~246位氨基酸处。

蜂群崩溃失调病(CCD)研究进展

2006年冬到2007年春,蜂群崩溃失调病(colony collapse disorder,简称CCD)在世界范围内流行,已造成巨大损失。CCD是指意蜂蜂群中大量的成年工蜂短时间内突然在巢外失踪,没有发现尸体,只剩下蜂王、卵、一些未成年的工蜂和大量蜜粉残留于巢脾内的症状。到目前为止,经调查发现以色列急性麻痹病毒(Israeliacute paralysis virus,IAPV)是导致CCD的最大嫌疑,但CCD的确切致病机理尚未揭开。本文综述了CCD的主要症状、可能的致病原因等方面的研究进展,提出若干需要高度关注的问题,以及防范CCD的措施。

北京地区六种蜜蜂病毒病的流行病学研究

【目的】对蜜蜂的6种病毒:以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus,IAPV)、残翅病毒(Deformed wing virus,DWV)、囊状幼虫病病毒(Sacbrood virus,SBV)、急性蜜蜂麻痹病毒(Acute bee paralysis virus,ABPV)、黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)、慢性麻痹病毒(Chronic bee paralysis virus,CBPV)在北京地区的流行情况进行调查,以期为该地区蜜蜂病毒病的防控提供一定的理论依据。【方法】应用多重RT-PCR法确定上述6种病毒在该地区的感染情况,并通过序列分析确定特异性。【结果】在所有检测样本中均未检测到急性麻痹病病毒和慢性麻痹病病毒,感染率最高的是以色列急性麻痹病毒,其次是残翅病毒。检测的样本普遍存在混合感染。【结论】以色列急性麻痹病毒、残翅病毒、囊状幼虫病病毒、黑蜂王台病毒4种病毒可能在北京地区广泛分布。