人原发性肝癌相关抗原的蛋白质组学初步研究

目的检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关抗原,并予以验证。方法分别提取15例HCC组织及其癌旁组织总蛋白。Western blot分别检测各总蛋白与其HCC患者自体血清的杂交情况。双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术将15例混合总蛋白中的各蛋白进行分离与染色。图像分析法比对染色胶上HCC组织及其癌旁组织蛋白的表达差异,基质辅助激光解吸/电离飞行时间二级质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time-of-flight with two mass analyzers for tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS)技术及生物信息学网络数据库分别对表达差异蛋白予以分析鉴定与检索匹配,免疫组织化学与Western blot分别检测该差异蛋白在人HCC组织及其癌旁组织中的变化情况。结果 2-DE染色胶图像分析比对结果显示,HCC及其癌旁组织蛋白表达差异斑点共90个,MALDI-TOF MS/MS与数据库对其中19个蛋白斑点分析鉴定与检索匹配发现15个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调。免疫组织化学与Western blot检测结果显示,与对照比较,上调蛋白中的Dna J同源B亚家族成员11(dna J homolog subfamily B member 11,DNAJB11)在HCC组织中的表达明显增强,下调蛋白中的蛋白酶体亚基α3(proteasome subunit alpha type 3,PSMA3)在HCC组织中的表达则相反。结论人原发性肝癌相关抗原DNAJB11在HCC组织中的表达上调,PSMA3在HCC组织中的表达下调。

低氧对Hep-2细胞肿瘤干细胞特性和化疗抵抗的影响及其作用机制

目的探讨低氧对Hep-2细胞肿瘤干细胞特性和化疗抵抗的影响，并分析其相关机制。方法构建针对低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor 1 apha，HIF-1d）的短发夹RNA重组质粒，转染Hep-2细胞，经筛选建立HIF-1仪基因敲除的Hep-2细胞并检测HIF-1α表达的变化；观察低氧条件培养的Hep-2细胞增殖、克隆形成、细胞周期、凋亡及CD133表型等细胞生理学特性变化；流式细胞仪分选CD133^＋细胞，观察CD133^＋细胞克隆形成及顺铂杀伤情况，并检测相关基因Oct-4、p53及survivin表达变化。用方差分析及两样本均数比较的#检验进行统计分析。结果成功建立HIF—lct基因敲除Hep一2细胞，HIF一1仪在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调；低氧培养Hep-2细胞具有较高的增殖活性及克隆形成能力，凋亡率降低，细胞周期GO／G1期阻滞、CD133表达升高，而HIF-1α仪基因敲除后上述变化减弱；成功分选出Hep-2细胞中的CD133^＋细胞，CD133^＋细胞克隆形成能力高、顺铂杀伤抗性强，而HIF-1α基因敲除后上述能力降低，并出现Oct-4表达下调，p53表达上调，survivin表达下调。结论低氧能够诱导和强化Hep-2细胞的肿瘤干细胞特性，增强CD133^＋细胞的增殖分化和化疗抵抗能力，其作用机制可能与HIF-1α及其诱导的相关基因表达变化相关。

Runx3基因CpG岛甲基化与胃癌发生的关系

目的通过研究Runx3基因CpG岛甲基化对胃癌病变的影响，探讨甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法与焦磷酸测序（PS）法对Runx3基因甲基化检测的特异性。方法选取150例胃癌患者胃切除标本及50例无癌变胃黏膜标本，以MSP法和Ps法同时检测其Runx3启动子的甲基化程度。结果与正常胃黏膜相比，胃癌组织Runx3的甲基化程度差异有显著性意义（MSP法：67．3％比40．0％，P=0．002；PS法：76．0％比30．0％，P〈0．01）。MSP法显示Runx3甲基化只与肿瘤大小相关（P〈0．05）。而Ps法分析显示进展期胃癌的Runx3甲基化率高于早期胃癌（P〈0．05）；且其甲基化状态与肿瘤的大小（P=0．004）、Lauren分型（P=0．043）、浸润的深度（P〈0．01）、淋巴结转移（P=0．021）及肿瘤TNM临床分期（P=0．045）等临床病理特征之间存在相关性。结论Runx3启动子甲基化与胃癌临床病理特征包括肿瘤大小、Lauren分型、浸润的深度、淋巴结转移以及肿瘤TNM临床分期密切相关；与MSP法相比，Ps法敏感性更高，且检测结果与临床病理学结果之间有显著相关性，对于胃癌的早期诊断和治疗有着重要意义。