日本医蛭中一种新抗凝血蛋白质的仿生亲和纯化及鉴定

目的从日本医蛭中快速提取和纯化生物活性蛋白质。方法利用仿生亲和介质库进行配体筛选和1步纯化。结果从日本医蛭中纯化出了1种具有抗凝血活性的新型低丰度蛋白质,命名为NLP-1(New Leech Protein-1)。通过进一步分析,其相对分子质量为13800,蛋白回收率可达到69.2%,其在血浆中含量为0.02 mg/mL时即可产生明显的抗凝血现象。利用MALDI-TOF-TOF分析,在蛋白质数据库中未找到相似蛋白质或多肽。结论从日本医蛭中纯化出的NLP-1蛋白质是1种新型的抗凝血物质,具有很高的开发研究价值。

转基因牛乳中重组人乳铁蛋白的仿生亲和纯化

目的从转基因牛乳中亲和纯化重组人乳铁蛋白。方法从仿生亲和介质库中筛选亲和配体,进行重组人乳铁蛋白的纯化研究。结果筛选出可以特异性结合重组人乳铁蛋白的固定化β-丙氨酸亲和配体,从转基因牛乳中一步纯化的重组人乳铁蛋白纯度为95.2%,蛋白回收率可达81.9%。经放大实验表明该亲和纯化工艺适合工业上大规模纯化乳铁蛋白。结论固定化β-丙氨酸可从转基因牛乳中纯化出高纯度重组人乳铁蛋白,工艺适合工业化生产。

新型仿生亲和介质纯化工艺生产效率分析

抗体的捕获层析的成本在整个抗体纯化工艺中占有相当的比例．分析比较了新型小分子仿生亲和介质和常规蛋白A的动态载量、循环使用次数和线性流速等参数，并计算了相应的生产效率，发现新型小分子仿生亲和介质最高生产效率能达到蛋白A亲和层析介质最高生产效率的3～6．9倍．

牛乳中β-乳球蛋白的仿生亲和纯化

目的研究牛乳中β-乳球蛋白的仿生亲和分离技术。方法从仿生亲和介质库中筛选亲和配体,并进行吸附条件优化。结果得到可以特异吸附乳球蛋白的固定化三乙烯四胺亲和配体,确定最佳结合缓冲液为10mmol/L磷酸盐缓冲液(含0.15 mmol/L NaCl,pH7.0),在此条件下,可实现一步从牛乳中纯化乳球蛋白,其纯度达到95%以上,回收率为83.35%。测定得到固定化三乙烯四胺的最大吸附容量为52.54 mg/g干介质。结论固定化三乙烯四胺亲和介质可从牛乳中纯化出高纯度β-乳球蛋白,且纯化流程简便,介质吸附量较大(52.54 mg/g干介质),适合工业化生产。

亲和仿生层析及在抗体纯化中的应用

亲和仿生层析是一种新型的生物分离技术,可用于生物活性物质分离,尤其在抗体纯化中表现出良好的应用前景,具有价格低廉、结构稳定、特异性较高等优点。亲和仿生层析的核心是具有特定结构的仿生配基,主要包括化学合成配基和短肽配基两种,通常通过合理的手段进行筛选和设计。理性设计是一种行之有效的方法,针对一个特定的目标蛋白,随机地去选择配基是不可能的,必须采用理性设计构建一个合理的配基库,并通过高通量的筛选技术,才能得到合适的仿生配基。本文根据近年来国内外亲和仿生层析的研究进展,着重介绍了亲和仿生配基的筛选和设计以及在抗体纯化中的应用。

抗体药物纯化方法研究进展

近年来,生物制药发展迅猛,单克隆抗体药物以其高特异性、有效性和安全性逐渐占据国际药品市场,成为癌症及其他疾病治疗市场的新宠。目前,在抗体类药物的生产过程中,分离纯化等下游工艺成本高,导致了抗体药物价格居高不下,因此需要寻求一种低成本、高效率的纯化工艺。常规的抗体纯化方法是通过蛋白A亲和介质捕获,然后采用离子交换、疏水层析等方法进行精制。目前,新开发了疏水电荷诱导层析和不同亲和配基的仿生亲和层析技术,本文针对目前国内外抗体纯化技术及研究进展进行综合分析,尤其重点展示了抗体的亲和层析纯化方法。在不久的将来,仿生亲和技术会大大提高抗体纯化效率,降低其纯化成本。