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甲基丙烯酰化明胶/富血小板血浆复合水凝胶构建仿生微环境促进小鼠胰岛瘤细胞MIN6功能
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作者 朱必文 王东芝 +6 位作者 吴迪 龚天成 潘昊鹏 陆玉华 郭益冰 王志伟 黄䶮 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第12期1824-1831,共8页
背景:构建仿生微环境促进胰岛素分泌细胞存活及功能发挥,是胰腺组织工程的热点与难点。目的:基于甲基丙烯酰化明胶/富血小板血浆水凝胶构建仿生微环境,促进小鼠胰岛瘤细胞MIN6存活和功能表达。方法:将体积分数10%,30%,50%的富血小板血... 背景:构建仿生微环境促进胰岛素分泌细胞存活及功能发挥,是胰腺组织工程的热点与难点。目的:基于甲基丙烯酰化明胶/富血小板血浆水凝胶构建仿生微环境,促进小鼠胰岛瘤细胞MIN6存活和功能表达。方法:将体积分数10%,30%,50%的富血小板血浆溶液分别与50 g/L的甲基丙烯酰化明胶混合,经Ca^(2+)与凝血酶活化及紫外光照射固化成水凝胶,分别记为G+10P、G+30P、G+50P,同时制备单纯的甲基丙烯酰化明胶水凝胶(记为G),检测4组水凝胶的孔隙率、杨氏模量、溶胀性能与流变行为。将4组水凝胶分别与小鼠胰岛瘤细胞MIN6共培养,检测细胞形态与增殖活性,并进行qRT-PCR检测、胰岛素免疫荧光染色及胰岛素释放实验。结果与结论:①复合成分水凝胶的孔隙率小于单一成分水凝胶、杨氏模量高于单一成分水凝胶,并且随着富血小板血浆浓度的增加,复合成分水凝胶的孔隙率与杨氏模量降低;G+30P、G+50P组溶胀率低于G组、G+10P组(P<0.05);复合成分水凝胶的储能模量、耗能模量均大于单一成分水凝胶(P<0.05);②光镜下可见,单一成分水凝胶表面的细胞呈团块样且散在分布,复合成分水凝胶表面的细胞呈团状,但生长速度更快、细胞团之间连接紧密;活死染色显示,各组水凝胶可促进细胞存活,其中G+30P组、G+50P组死细胞数量明显少于G+10P组、G组;CCK-8检测显示,复合成分水凝胶促进细胞增殖效果强于单一成分水凝胶,并且随着富血小板血浆浓度的增加,促增殖效果更明显;③qRT-PCR检测显示,与单一成分水凝胶比较,复合成分水凝胶可明显上调胰岛十二指肠同源盒1、胰岛素、葡萄糖激酶的mRNA表达,其中以G+30P组最明显;免疫荧光与胰岛素释放实验显示,与单一成分水凝胶比较,复合成分水凝胶可促进胰岛素蛋白的表达及胰岛素释放;④结果表明,甲基丙烯酰化明胶/富血小板血浆复合水凝胶可用于模拟胰岛素分泌细胞微环境,能够显著提高其存活和功能发挥。 展开更多
关键词 甲基丙烯酰化明胶 富血小板血浆 水凝胶 胰岛素 小鼠胰岛瘤细胞 仿生微环境 糖尿病
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壳寡糖构建的胰岛仿生微环境通过降低细胞内活性氧保护胰岛免受低氧诱导损伤 被引量:2
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作者 王东芝 郭益冰 +3 位作者 黄龚 朱必文 潘浩鹏 王志伟 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期633-642,共10页
目的制备甲基丙烯酰化明胶(gelatin methacryloyl,GelMA)/甲基丙烯酰化透明质酸(hyaluronic acid methacryloyl,HAMA)/壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)水凝胶,用于构建胰岛仿生微环境,并探讨GelMA/HAMA/COS水凝胶对低氧下胰岛活... 目的制备甲基丙烯酰化明胶(gelatin methacryloyl,GelMA)/甲基丙烯酰化透明质酸(hyaluronic acid methacryloyl,HAMA)/壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)水凝胶,用于构建胰岛仿生微环境,并探讨GelMA/HAMA/COS水凝胶对低氧下胰岛活性和功能的改善作用。方法以组织培养板培养为对照组,COS浓度分别为0、1、5、10、20 mg/mL的GelMA/HAMA/COS水凝胶为实验组,扫描电镜观察微观形态,流变仪评价成胶性能,接触角检测亲水性,水凝胶浸提液培养L929细胞评估生物相容性[采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit8,CCK-8)法]。从8周龄SD大鼠胰腺中提取胰岛,双硫腙染色和葡萄糖刺激胰岛素释放(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)实验分别鉴定胰岛纯度和功能。胰岛在低氧(1%O_(2))下分别培养24、48、72 h,使用钙黄绿素-乙酰甲氧基甲酯/碘化丙啶(Calcein-acetyl methyl/propidium iodide,Calcein-AM/PI)染色评价低氧对胰岛活性的影响。将胰岛在不同COS浓度的GelMA/HAMA/COS水凝胶中培养48 h,活性氧试剂盒评价COS在常氧(20%O_(2))和低氧(1%O_(2))条件下拮抗胰岛活性氧产生情况,Calcein-AM/PI染色评价COS在低氧(1%O_(2))条件下对胰岛活性的影响。将胰岛分别在组织培养板(A组)、GelMA/HAMA水凝胶(B组)和GelMA/HAMA/COS水凝胶(C组)中培养48 h,免疫荧光和GSIS实验分别评价COS在低氧(1%O_(2))条件下对胰岛活性的影响。结果GelMA/HAMA/COS水凝胶呈多孔结构,流变仪检测提示其具有较好的成胶性能,接触角表现出良好亲水性,CCK-8法检测示各组水凝胶均具有良好的生物相容性。分离的大鼠胰岛呈类圆形,具有较高的胰岛纯度和胰岛素分泌能力。胰岛在低氧条件下处理24、48、72 h,Calcein-AM/PI染色示死细胞比例随时间延长逐渐增多,均显著高于未低氧处理组(P<0.001)。活性氧染色示不同COS浓度的GelMA/HAMA/COS水凝胶在常氧和低氧条件下均能拮抗活性氧的产生,且该能力与COS浓度成正相关。Calcein-AM/PI染色示,不同COS浓度的GelMA/HAMA/COS水凝胶在低氧条件下均能改善胰岛活性,细胞活性与COS浓度成正相关。免疫荧光染色示GelMA/HAMA/COS水凝胶在低氧条件下能促进胰岛功能相关基因的表达;GSIS实验结果显示C组胰岛在低氧条件胰岛素分泌量显著高于A、B组(P<0.05)。结论GelMA/HAMA/COS水凝胶具有良好的生物相容性,通过抑制活性氧提高胰岛的存活和功能,是构建胰岛仿生微环境用于胰岛培养及移植的理想载体。 展开更多
关键词 胰岛 壳寡糖 活性氧 仿生微环境
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干细胞及其仿生基质微环境在关节软骨再生修复中的作用综述 被引量:2
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作者 曹洪芙 李珠廉 +2 位作者 孙勇 樊渝江 张兴栋 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期548-554,共7页
关节软骨由于无神经、无血管的特性,一旦损伤,其自我修复十分困难。干细胞技术的发展为关节软骨再生提供了新的希望。当前,不同来源的干细胞及多种应用方式在关节软骨修复中展现出不同程度的治疗效果。然而,干细胞对其所处的微环境均有... 关节软骨由于无神经、无血管的特性,一旦损伤,其自我修复十分困难。干细胞技术的发展为关节软骨再生提供了新的希望。当前,不同来源的干细胞及多种应用方式在关节软骨修复中展现出不同程度的治疗效果。然而,干细胞对其所处的微环境均有极强的敏感性,这使得越来越多的研究者开始关注通过生物功能性支架构建的仿生微环境来调控干细胞,进而加速软骨再生。本文主要讨论了软骨修复的干细胞来源、其应用手段及其协同仿生细胞微环境在关节软骨修复方面的治疗效果、机制和应用不足。希望对协同干细胞的功能性软骨修复支架的设计和优化提供更加切实的临床化研究思路。 展开更多
关键词 关节软骨修复 干细胞 生物功能性支架材料 仿生细胞环境
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基于静电纺丝神经支架的研究进展
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作者 范玉兰 黄丽 +1 位作者 李嘉莹 凌珏 《有机化学研究》 2024年第4期560-572,共13页
神经系统是人体最为重要的系统之一,但高等哺乳动物神经损伤后,再生恢复能力很弱,尤其是中枢神经,因此如何高效精确地修复损伤神经,促进神经再生成为研究的焦点。基于静电纺丝技术制备的神经支架具有适合神经生长的特定物理、化学和生... 神经系统是人体最为重要的系统之一,但高等哺乳动物神经损伤后,再生恢复能力很弱,尤其是中枢神经,因此如何高效精确地修复损伤神经,促进神经再生成为研究的焦点。基于静电纺丝技术制备的神经支架具有适合神经生长的特定物理、化学和生物学特性,可以有效调节神经元以及胶质细胞的行为,并支持神经再生。取向排列的静电纺丝纤维亚结构模拟了天然神经组织的定向特性。同时,在纤维支架表面进行形貌和化学修饰,可以显著改善细胞附着、增殖和分化,促进神经再生。本综述介绍了静电纺丝的基本原理、优点以及影响纤维形态的因素,如聚合物溶液性质、工艺参数和环境参数。探讨了静电纺丝技术在神经组织工程支架制备中的应用及其优化策略。讨论了神经导管壁厚和电纺纤维直径对神经再生的影响,概述了静电纺丝技术在周围神经和中枢神经再生中的应用。下一代的静电纺丝神经支架可与分子和药物治疗、细胞基因治疗相结合,同时开发术后干预方法,以缩短术后恢复时间。相信支架制造、修饰技术、材料科学、分子和细胞生物学的进一步发展也终将满足神经组织工程的需求。The nervous system is one of the most important systems in the human body. However, after nerve injury in higher mammals, the ability of regeneration and recovery is very weak, especially in the central nervous system. Therefore, how to repair damaged nerves efficiently and accurately and promote nerve regeneration has become the focus of research. Neural scaffolds prepared based on electrospinning technology have specific physical, chemical and biological characteristics suitable for nerve growth, which can effectively regulate the behavior of neurons and glial cells and support nerve regeneration. The aligned electrospinning fiber substructure simulates the directional characteristics of natural neural tissue. At the same time, the morphology and chemical modification on the surface of the fiber scaffold can significantly improve cell adhesion, proliferation and differentiation, and promote nerve regeneration. This review introduces the basic principles and advantages of electrospinning and the factors affecting fiber morphology, such as polymer solution properties, process parameters and environmental parameters. The application of electrospinning technology in the preparation of nerve tissue engineering scaffolds and its optimization strategy were discussed. The effects of nerve conduit wall thickness and electrospinning fiber diameter on nerve regeneration were discussed, and the application of electrospinning technology in peripheral nerve and central nerve regeneration was summarized. The next generation of electrospinning nerve scaffolds can be combined with molecular and drug therapy, cell gene therapy, and postoperative intervention methods to shorten postoperative recovery time. It is believed that the further development of scaffold manufacturing, modification technology, material science, molecular and cell biology will eventually meet the needs of neural tissue engineering. 展开更多
关键词 组织工程 静电纺丝 神经再生 仿生微环境
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