催化光度法测定伊文思蓝褪色反应速率常数——推荐一个物理化学新实验

介绍了一个关于复杂反应动力学测量的物理化学实验。基于亚硝酸钠作用下溴酸钾氧化伊文思蓝褪色反应,通过测量不同初始反应条件下系统吸光度随时间的变化情况,推导伊文思蓝和溴酸钾的分级数,探讨亚硝酸钠对反应的加速作用,并根据不同温度下的测量数据计算表观反应活化能。本实验可依据学时安排开设为基础性实验或综合设计性实验。两个学期的教学实践表明,作为综合设计性实验,本实验可加强学生对表观速率常数、表观活化能以及催化作用的认识,并促进学生综合实验能力的培养;此外,本实验也可适当精简后作为基础性实验项目“丙酮碘化反应”的替代方案,能克服该实验中存在的反应速率较快不易记录实验数据、碘不易清洗污染比色皿等问题。

斑马鱼肌肉坏死模型的伊文思蓝活体成像:一种新的研究坏死亲和性对比剂的平台

目的探讨制作斑马鱼肌肉坏死模型的可行性,并应用此模型进行伊文思蓝(EBD)活体成像以研究其坏死亲和特性。方法采用显微注射泵注射10 nL无水酒精于3~7 d斑马鱼幼鱼卵黄囊背部肌肉处以制作斑马鱼肌肉坏死模型。肌肉坏死模型组和对照组于心脏大静脉处注射0.1%EBD 5 nL后0、4、24、48 h行荧光及激光共聚焦显微镜拍摄,动态观察两组斑马鱼体内EBD的分布情况,定量分析肌肉坏死区域和正常肌纤维区域EBD的荧光强度、范围及比值。结果斑马鱼肌肉坏死模型的制作成功率高。荧光及激光共聚焦显微镜显示,肌肉受损区域有大量EBD的红色荧光积聚,同明场下肌肉受损区域相一致;动态观察发现,随时间推移,红色荧光强度逐渐增强,于24 h达到峰值后逐渐减退;肌肉坏死区域同正常肌纤维区域之间荧光强度的差异具有统计学意义(P<0.05),4 h和24 h时荧光强度差异最明显,分别为58.30±5.14、17.36±1.16和54.20±4.25、15.96±0.79。不同时间点的坏死亲和性比率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论无水酒精诱导的斑马鱼肌肉坏死模型制作简捷经济,可作为一种新的研究坏死亲和性物质的实验平台。本研究初步证实EBD可选择性积聚于肌肉坏死区域,是一种潜在的坏死亲和性对比剂。

小鼠伊文思蓝尾静脉或腹腔注射及视网膜铺片技术的优化

目的:对小鼠伊文思蓝静脉推注联合视网膜铺片的技术进行优化,以提高视网膜铺片染色实验的准确性和可重复性。方法:C57BL/6雄性小鼠尾静脉注射10g/L(1%)伊文思蓝0.3mL后体内分别循环10、20min,处死后摘取眼球,4%多聚甲醛分别固定20、40、60min,将不同体内循环时间及不同组织固定时间对于视网膜血管的走形、分布及渗漏的影响进行了优化比较。尾静脉注射失败后,通过腹腔注射1%伊文思蓝0.3mL,体内循环3h,固定60min进行补救,观察视网膜血管的走形、分布及渗漏。同时将尾静脉注射后视网膜血管的走形、分布及渗漏与腹腔注射后的结果进行效果比较,确定最佳的体内循环时间以及视网膜铺片的条件。结果:尾静脉注射后,与体内循环20min,固定20或40min条件下视网膜血管情况相比,伊文思蓝体内循环10min,固定60min,视网膜血管走行、血管分支清楚,血管渗漏较少。尾静脉注射失败后,腹腔注射补救措施结果显示视网膜血管走行、各级血管形态清晰。腹腔注射伊文思蓝体内循环3h与尾静脉注射伊文思蓝体内循环10min相比,视网膜血管的走形、分布的效果无明显差别。结论:优化伊文思蓝静脉推注联合视网膜铺片的技术,可提高视网膜铺片染色实验的准确性和可重复性,为相关视网膜血管病变的研究提供借鉴方法。

利用伊文思蓝的荧光显示肾上腺素诱发的血脑屏障开放

本文采用伊文思蓝静脉注射，在荧光显微镜下观察了不同剂量的肾上腺素诱发的大鼠血脑屏障开放状况，结果发现：（1）伊文思蓝在血脑屏障开放局部呈现出鲜艳明亮的荧光斑；（2）随着肾上腺素剂量加大，光斑数量增加；（3）光斑在实验组全脑的分布，以下丘脑、丘脑、小脑和尾壳核内密度最高。上述结果表明利用伊文思蓝的荧光染料性质观察血脑屏障的开放具有简便易行、灵敏度高等优越性．

伊文思蓝、ZO-1评估血脑屏障损伤的应用研究

目的 :寻找新的简捷、快速、精确、灵敏的评估血脑屏障 (BBB)损伤的指标和方法。方法 :应用脑缺血再灌注损伤模型 ,造成大鼠BBB的损伤 ,采用形态学和化学定量两种新方法观察BBB对伊文思蓝的通透性 ,应用免疫组织化学法检测脑组织中ZO - 1蛋白的表达水平的变化 ,以反映BBB的损伤程度。结果 :①脑局限性缺血再灌注损伤后脑内ZO - 1蛋白水平迅速降低 ,至再灌注后 2 4h达最低水平 ,至再灌注 7d时恢复到正常水平 ;②两种方法检测的伊文思蓝最大通透率均出现在再灌注损伤第 2 4h ,其变化趋势与脑组织中ZO - 1蛋白水平的变化趋势相一致。结论 :BBB对伊文思蓝的通透性和脑组织中ZO - 1蛋白水平的变化均可用于反映BBB损伤的程度 。

伊文思蓝脂质体的制备及其在小鼠体内的分布

目的 :研究伊文思蓝脂质体在小鼠体内的组织分布状况 ,为研究脑靶向脂质体奠定基础。方法 :用反相蒸发法制备伊文思蓝脂质体 ,用凝胶柱分离的方法测得脂质体的包封率为 2 5 .0 7% ,比较了伊文思蓝脂质体和伊文思蓝水溶液在小鼠体内的组织分布状况。结果 :磷脂与胆固醇的比例对伊文思蓝脂质体的包封率有较大的影响 ;尾静脉注射后 2～ 4h时脂质体组在脑中伊文思蓝的浓度高于水溶液组。结论 :伊文思蓝可作为检测脂质体跨血脑屏障的模型药物 。

聚伊文思蓝修饰电极对多巴胺和抗坏血酸的电分离及同时测定

研究多巴胺（DA）和抗坏血酸（AA）在聚伊文思蓝（Evans Blue）修饰电极上的伏安行为,建立差示脉冲伏安测定法.在pH4.5磷酸盐缓冲液中,聚伊文思蓝修饰电极对DA和AA有显著的增敏和电分离作用.DA和AA氧化峰电流与浓度分别在1.0×10^-6 - 3.0×10^-5mol/L和5.0×10^-6-1.05×10^-4mol/L范围内呈良好的线性关系,检测限分别为2.5×10^-7mol/L和3.0×10^-7mol/L.当DA与AA共存时,由该修饰电极检测的二者氧化峰电位差达184 mV,故可同时测定DA和AA,并有效消除其它组分对DA测定的干扰,已用于实际样品中DA和AA含量的测定,结果令人满意.

糖尿病大鼠血-视网膜屏障功能评估中伊文思蓝灌注视网膜铺片技术的改良和应用

背景 伊文思蓝（EB）灌注的大鼠视网膜铺片是实验研究过程中观察血-视网膜屏障（BRB）功能的常用方法,但以往视网膜标本经固定液处理后透光性差,仅能用激光扫描共焦显微镜进行观察,对实验设备要求较高. 目的 探讨EB灌注糖尿病（DM）大鼠视网膜后在PBS中制作透明视网膜标本,并用普通荧光显微镜观察BRB功能技术的可行性. 方法 应用随机数字表法将40只SD大鼠随机分为对照组、DM1个月组、DM 3个月组和DM 6个月组.将质量分数2％链脲佐菌素（STZ）溶于0.05 mmol/L枸橼酸缓冲液,以60 mg/kg的剂量一次性腹腔内注射建立大鼠DM模型,对照组大鼠腹腔内注射等容量枸橼酸缓冲液.分别于造模后1、3、6个月按45 mg/kg的剂量经大鼠股静脉注射30 g/L的EB溶液,注射后15 min摘除双侧眼球,立即置于PBS中完整剥离视网膜,将视网膜放射状切开并平铺于载玻片上,避光晾至完全透明,封片,置于荧光显微镜下观察并拍照.应用IPP6.0软件分析图像,测量EB渗漏区面积与视网膜面积的百分比. 结果 对照组大鼠视网膜血管形态和走行正常,EB在波长546 nm激发光下呈红色荧光,均匀充盈于血管腔.DM 1个月组大鼠视网膜背景荧光较对照组大鼠略增强;DM 3个月组大鼠视网膜背景荧光进一步增强,视网膜血管呈现节段性扩张,可见明显的红色高荧光区;DM 6个月组大鼠视网膜血管粗细不均,部分走行迂曲,可见片状低灌注区及大量高荧光区.对照组、DM 1个月组、DM 3个月组和DM 6个月组EB渗漏区面积百分比分别为（0.05±0.02）％、（0.27±0.06）％、（1.17±0.1 8）％和（4.77±0.66）％,总体比较差异有统计学意义（F=795.800,P＜0.001）,其中DM 3个月组和DM 6个月组大鼠视网膜EB渗漏区面积百分比值明湿高于对照组,差异均有统计学意义（q＆#39;=10.338、43.475,均P＜0.001）. 结论 改良的EB灌注视网膜铺片技术操作简单,普通荧光显微镜下即可清晰显示DM大鼠的BRB结构和动态变化.

伊文思蓝荧光法测定肺血管壁通透性

肺微血管壁通透性增高引起的肺水肿是急性肺损伤的主要病理变化之一。目前,在实验研究中,定量测定肺微血管壁通透性的方法主要有肺淋巴引流(观察肺淋巴流量和淋巴液蛋白含量变化)和测定标记大分子物质通过肺血管壁的漏出量。肺淋巴引流需在大动物上进行,手术复杂,成功率低;

薄荷醇及冰片对磺胺嘧啶和伊文思蓝在脑中分布的影响

薄荷醇（ｉｇ１０％薄荷醇石蜡油液１５ｍｌ／ｋｇ）及冰片（ｉｇ１０％冰片石蜡油液１５ｍｌ／ｋｇ）可明显延长磺胺嘧啶在大鼠体内分布相半衰期ｔ１／２ａ，增加磺胺嘧啶在大鼠脑内的浓度。薄荷醇、冰片（ｉｇ０．５ｇ／ｋｇ×４ｄ）还可使伊文思蓝透过小鼠血脑屏障， 但其透过量远明显低于夹闭双侧颈动脉再灌注脑损伤组。以上结果提示，薄荷醇、冰片可能具有促进Ｓｕｌ透过血脑屏障，而对血脑屏障结构的损伤可能性小。

伊文思蓝检测急性高眼压后大鼠血-视网膜屏障的变化

目的：检测急性高眼压后大鼠血-视网膜屏障（BRB）的改变。方法：大鼠随机分为正常对照组、实验对照组和实验组（急性高眼压模型）。动物分别存活3h、12h、1d、3d、7d，处死前注射伊文思蓝（EB），共聚焦显微镜检测视网膜铺片和切片中EB的分布；用分光光度计定量视网膜EB的含量。结果：在急性高眼压后视网膜中可见，EB红色荧光斑点主要分布在节细胞层，3h、12h和1d还见于内核层。EB红色荧光斑点在视网膜中央部3h时开始增多，12h达高峰，然后逐渐减少；在视网膜周围部3h时最多，然后逐渐减少。进一步定量检测EB渗漏量呈相同的时空改变。结论：大鼠BRB在急性高眼压后的早期损伤更明显，晚期逐渐恢复；视网膜周围部先于中央部出现BRB严重破坏；BRB损伤主要分布于节细胞层。

伊文思蓝作荧光探针研究牛血清白蛋白与氨苄青霉素之间的竞争反应

用伊文思蓝(Evans blue,EB)作荧光探针研究了氨苄青霉素(Ampicillin,A)对牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)的竞争反应.伊文思蓝与牛血清白蛋白作用,使牛血清白蛋白荧光发生猝灭,根据Stern-Volmer方程及荧光寿命研究了荧光猝灭的类型及机理.结果表明,猝灭类型为静态猝灭,即伊文思蓝和牛血清白蛋白形成了一种稳定的复合物.伊文思蓝与牛血清白蛋白的结合常数KBSA-EB=1.122×106L/mol,结合点数n=0.9935,并确定了EB和BSA之间的热力学常数及作用力类型.当加入氨苄青霉素后,牛血清白蛋白的相对荧光强度恢复.这表明氨苄青霉素与伊文思蓝对牛血清白蛋白发生了竞争反应.探讨了该竞争反应的相关机理,求出了伊文思蓝与氨苄青霉素的结合常数为K=7.131×105L/mol.

低功率超声辐照微泡造影剂对大鼠前列腺内伊文思蓝浓度的影响

目的探讨低功率超声辐照微泡造影剂提高前列腺内的药物浓度的价值。材料与方法选取成年远交群(SD)雄性大鼠60只,按抽签法分为对照组、伊文思蓝(EB)组、微泡组、同时辐照组及先行辐照组,每组各12只。对照组给予生理盐水10 ml/kg;EB组给予EB 50 mg/kg;微泡组给予微泡造影剂0.1 ml/kg;同时辐照组先给予EB 50 mg/kg,超声辐照5 min后,再给予微泡造影剂0.1 ml/kg;先行辐照组给予微泡造影剂0.1 ml/kg后,超声局部间歇辐照前列腺5 min,30 min再给予EB 50 mg/kg。实验结束后取前列腺组织进行病理观察,并制备前列腺组织匀浆测量EB浓度。结果 EB组大鼠前列腺内EB浓度高于对照组及微泡组,差异有统计学意义(t=4.157、4.357,P<0.01);同时辐照组大鼠前列腺内EB浓度高于EB组,差异有统计学意义(t=2.438,P<0.05);先行辐照组大鼠前列腺内EB浓度明显低于同时辐照组,差异有统计学意义(t=2.761,P<0.05);先行辐照组与EB组EB浓度差异无统计学意义(t=0.684,P>0.05)。结论低功率超声联合微泡造影剂可以明显提高前列腺组织EB药物浓度。

聚伊文思蓝膜修饰玻碳电极在抗坏血酸共存时测定去甲肾上腺素

目的:研究聚伊文思蓝(Evans Blue)膜修饰玻碳电极对去甲肾上腺素(NE)和抗坏血酸(AA)的电化学行为,建立测定NE 含量的电化学分析新方法。方法:采用循环伏安法研究 NE 和 AA 在聚伊文思蓝膜修饰电极上的电化学行为,以差示脉冲伏安对 NE 的含量进行测定。结果:聚伊文思蓝膜修饰电极对 NE 和 AA 有显著的增敏和电分离作用,氧化峰电位差为282mV。在 pH 5.0的磷酸盐缓冲液中,氧化峰电流与 NE 浓度在5.0×10^(-7)～1.8×10^(-5)mol·L^(-1)范围内呈良好的线性关系,检测限为4.0×10^(-8)mol·L^(-1)。结论:该修饰电极在抗坏血酸共存时可测定 NE,有效消除其他组分对 NE 测定的干扰,已用于实际样品 NE 含量的测定,结果令人满意。

不同表面活性剂对伊文思蓝脂质体体内外性质的影响

目的 寻找与二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 聚乙二醇 (DSPE PEG)功能相似的表面活性剂 ,以增加脂质体的稳定性 ,改善其体内分布 ,提高靶向性。方法 制备伊文思蓝 (EB)脂质体 ,考察胆固醇与磷脂的比例对伊文思蓝脂质体包封率的影响 ;比较用DSPE PEG、吐温 80 (Tween 80 )和苄泽 3 5 (Brij 3 5 )修饰后的EB脂质体的包封率和在大鼠体内组织分布状况的变化。结果 EB脂质体的包封率最高为 2 5 3 0 %。用DSPE PEG、Tween 80和Brij 3 5修饰后使EB脂质体的包封率略有下降 ,但差别不显著 ;体内分布实验结果显示 :修饰后的脂质体在肝、脾和肾中EB的浓度均有不同程度的降低 ,脑中EB的浓度有所提高 ,而且以Tween 80修饰组最显著。结论 DSPE PEG、Tween 80和Brij 3 5对EB脂质体的包封率影响较小。Brij 3 5对EB脂质体的作用与DSPE PEG相似 ,能提高脂质体逃避网状内皮系统吞噬的能力 ;Tween 80主要能增加EB脂质体在大鼠脑组织中的分布 。

甲醛-伊文思蓝-溴酸钾体系催化动力学光度法测定痕量甲醛

基于在磷酸介质中,痕量甲醛对溴酸钾氧化伊文思蓝褪色反应有催化作用,且催化褪色程度与溶液中甲醛的量在一定范围内成正比,建立了测定痕量甲醛的动力学光度法。讨论了反应介质、试剂用量、反应温度、反应时间及共存离子的影响,确立了最佳反应条件。在选定的条件下,方法的线性范围为0.015-0.30μg/mL,检出限为8.6×10^-8g/mL。利用此法测定了废水和空气中的痕量甲醛,相对标准偏差（RSD）小于2.50%（n=6）,回收率在99%-102%之间,测定结果与酚试剂法的结果相一致。

用伊文思蓝染色观察血管移植过程中血管保存液对内皮的损害

目的通过伊文思蓝(Evans blue)染色观察维拉帕米、硝酸甘油混合液(VG液)和盐酸罂粟碱溶液作为血管移植过程中的保存液对内皮层的损害,为临床应用提供依据。方法实验用雄性SD大鼠10只,随机分为2组,分别命名为A组和B组,每组5只。麻醉后SD大鼠迅速摘出胸主动脉在Krebs henseleit buffer(KHB)溶液(4℃)分割,每段长度约1cm,A组中分段后的血管分别被放入4℃的2种由不同公司提供的VG溶液中(分别称为VG1,VG2)、盐酸罂粟碱(1mg/ml)、阴性对照(KHB溶液,pH7.4)以及阳性对照(KHB溶液,pH7.4)中培养30min。B组分段后的血管分别被放入4℃的由2种VG液中不同的成分在林格液中配制后的液体(分别称为PEVG1,MaVG2)、阴性对照(KHB溶液,pH7.4)以及阳性对照(KHB溶液,pH7.4)中培养30min。取出经过上述液体处理后的血管段再经过30min连续充氧的KHB(37℃)液培养,后用Evans blue(0.17%)染色15s。而后浸泡于100μl甲酰胺溶液中过夜,取上清用分光光度计测定Evans blue浓度,再通过蛋白定量测定血管蛋白质含量,得出每微克蛋白质中的Evans blue含量。结果在A组中3种保存液与阳性对照均有差异(P<0.05),2种VG液与罂粟碱溶液有显著性差异(P<0.01)。在B组PEVG 1与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论VG液作为血管移植过程中的保存液可以最大限度的减少内皮细胞损伤,相反用盐酸罂粟碱溶液可造成内皮细胞的明显损伤。作为动脉移植过程的保存液VG液具有更安全更有效的优势。

伊文思蓝荧光法在动脉粥样硬化研究中的应用

该文报告了应用活体荧光染料伊文蓝（EvansBlue）研究家克实验性动脉粥样硬化（AS）的荧光显微实验方法和结果，经与传统的苏丹Ⅱ染色光镜检查法比较，结果表明本法在AS研究中研究斑块大小、厚度、脂质沉着程度、内皮完整性与坏死程度等客观指标方面均优于苏丹染料法，有些指标苏丹法无法观测。

伊文思蓝法测定小肠微循环通透性

本文讨论了伊文思蓝法测定小肠微循环通透性的影响因素。当小肠经生理盐水充分灌洗后可消除血液对测定的影响,灌洗压力应为8.0KPa以上,灌洗时间至少20分钟。猪回肠伊文思蓝渗出量为1.167±0.235μg/g湿组织,经乳酸林格氏液保存60分钟的移植小肠微循环通透性显著增加(7.543±0.22μg/gP<0.01)。

伊文思蓝特异性染色技术快速鉴定新型隐球菌

目的探讨伊文思蓝特异性染色技术快速鉴定新型隐球菌在临床检验医学诊断工作中的应用。方法配制伊文思蓝特异性染色液,评估伊文思蓝特异性染色液的稳定性及特异性;用伊文思蓝特异性染色液对新型隐球菌、白色念珠菌等常见真菌及白细胞染色,综合评价其染色效果,进一步比较伊文思蓝特异性染色液、阿利新蓝染色液、墨汁对新型隐球菌的染色效果。结果新型隐球菌被伊文思蓝特异性染色液染成蓝色或深蓝色,白细胞及其他常见真菌不着色,易于将新型隐球菌与白细胞及其他常见真菌区分;伊文思蓝特异性染色液稳定性好,染色效果稳定,优于阿利新蓝染色和墨汁染色,伊文思蓝特异性染色能在计数板中计数新型隐球菌,阿利新蓝染色易凝集对计数有一定的影响,而墨汁染色则无法计数。结论伊文思蓝特异性染色技术快速鉴定新型隐球菌设备要求简单、方法快速敏感,有很好的特异性和稳定性,适合各类医院推广应用。