洛阳伊水大鲵肌肉营养成分分析

采用常规营养成分分析方法测定了洛阳伊水大鲵(Andrias davidianus)肌肉的粗蛋白质、粗脂肪、氨基酸、脂肪酸、矿物质和微量元素等营养成分。大鲵肌肉中粗蛋白含量为(15.68±0.58)%,粗脂肪含量为(2.43±0.03)%,水分含量为(76.93±2.64)%和粗灰分含量(0.72±0.05)%。肌肉中共检测到18种氨基酸,其中8种人体必需氨基酸总量为6.01%,占氨基酸总量的41.08%;4种鲜味氨基酸总量为6.77%,占氨基酸总量的46.27%。肌肉中不饱和脂肪酸含量高达74.45%,富含EPA和DHA,较一般水生经济动物高。此外大鲵肌肉中含有丰富的矿物质元素,其中钾含量最高,达到了(2800±20.40)mg/kg;微量元素中,锌和铁含量较高,硒也达到了富硒标准,含量为(0.42±0.04)mg/kg,表明洛阳伊水大鲵肌肉具有较高的营养价值,能为人类提供优质蛋白。

中国大鲵皮肤营养成分分析

采用常规方法对大鲵(Andrias davidianus)皮肤水分、粗蛋白质、粗脂肪、灰分、氨基酸以及Ca、P、Zn等营养成分进行分析和评价。结果显示:新鲜大鲵皮肤水分含量为77.84%,粗蛋白含量25.45%,粗脂肪含量1.23%,灰分含量0.82%;矿质元素中Ca含量101.20μg/g、P含量730μg/g、Zn元素含量高达15.93μg/g;皮肤中共检测出17种氨基酸,氨基酸总量为21.86%,其中7种人体必需氨基酸总量为5.91%,4种鲜味氨基酸总量为9.85%,分别占氨基酸总量的27.03%,45.05%。大鲵皮肤限制性氨基酸为亮氨酸和缬氨酸,氨基酸评分及化学评分得出氨基酸总量较高,必需氨基酸指数(EAAI)为81.65,氨基酸组成较合理。结果表明大鲵皮肤具有较高的营养价值。

大鲵虹彩病毒的形态结构及其包涵体特征

运用电镜和免疫荧光技术,对纯化的大鲵(Andrias davidianus)虹彩病毒粒子、感染病毒的EPC细胞以及确诊感染病毒的病鲵组织样品进行观察和分析。结果表明,纯化的大鲵虹彩病毒负染后电镜下显示球形结构,具囊膜,直径约150 nm;感染EPC细胞中的病毒颗粒呈典型的正二十面体结构,由核衣壳和核心构成,核衣壳呈正六边形,对角直径为(150±5)nm(N=30),核衣壳厚度约5 nm,核心直径为(98±18)nm(N=27)。在病鲵病变的肺和肾组织中发现存在大量聚集或分散的病毒颗粒,其形态特征和感染EPC细胞超薄切片观察的结果一致。免疫荧光电镜观察结果显示,感染病毒的细胞可观察到明显的红色荧光信号,且呈斑块状分布,大小不等。综合大鲵虹彩病毒初步的形态发生和免疫荧光观察结果,认为病毒感染细胞后在不同的发生时期会形成不同类型的病毒包涵体。

大鲵虹彩病毒β-丙内酯灭活方法的研究

为探讨β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的最适条件,研究了BPL对GSIV的灭活方法。采用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活24 h、48 h、72 h、96 h,通过细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定最适灭活条件。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.1%的BPL 4℃灭活处理72 h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种对GSIV敏感的鲤上皮瘤细胞系(EPC)细胞无细胞病变效应(CPE)出现,病毒主衣壳蛋白(MCP)基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。灭活效果检测结果表明,与未灭活GSIV相比较,最适灭活条件下的GSIV结构蛋白与抗原性未发生显著变化。结论显示BPL可用来灭活GSIV,本研究确立了BPL灭活GSIV的最适条件,为大鲵虹彩病毒细胞培养灭活疫苗研究奠定了重要基础。

大鲵遗传多样性分析

以线粒体DNA控制区为分子标记，对汉水流域大鲵（Anddas davidianus）的遗传多态性进行了研究。在获得的757bp的碱基序列中，有18个多态性核苷酸变异位点，占全部碱基数的2．38％；基因突变以转换为主，有一处插入或缺失；A、T、C、G四种碱基的平均含量分别为31．8％、33．0％、20．9％、14．3％，且A＋T的含量（64．8％）明显高于G＋C的含量（35．2％）。28个样本检测到8种单倍型，单倍型间的核苷酸变异在0．13％-1．74％之间，单倍型多样性（Haplotype diversity）指数和核苷酸多样性（Nucleotide diversity）指数分别为h=0．8230±0．0440和π=0．00446±0．00122，显示了大鲵驯养群体的的遗传多样性水平较低。

MS-222对大鲵麻醉效果的初步观察

观测MS-222对大鲵（ Andrias davidianus）的麻醉效果。12～15℃水温下，使用0.6 g/L MS-222对16尾4.7龄宁陕县东河的大鲵和16尾2.7龄周至县黑河的大鲵进行浸浴麻醉，每间隔5 min，观测个体的逃匿反应、翻正反射及痛感反应，记录个体麻醉时间和恢复时间并进行数据分析。使用0.6 g/L MS-222对大鲵进行浸浴处理，32尾个体均达到深度麻醉，所需时间为11～30 min，苏醒时间为30～180 min；体重与麻醉时间呈显著的正相关关系（ r＝0.320），水温与麻醉时间呈显著的强负相关关系（ r＝-0.698）。试验过程中没有个体死亡。

水温对幼鲵生长影响的初步研究

研究了不同时间段泉水和河水对幼鲵(Andrias davidanus)生长的影响。结果显示:幼鲵在不同时间和不同地点增重存在差异。第二阶段幼鲵平均日增重极显著高于第一阶段(P<0.01)。1号点(泉水)幼鲵平均增重和日平均增重极显著高于2号点(河水)幼鲵(P<0.01);第一阶段1号点日平均水温极显著高于2号点(P<0.01),最低温度较河水高6.95℃,且1号点水温变化较小。结果表明,水温是影响幼鲵生长的重要因素之一。

大鲵资源现状与保护建议

大鲵（Andriasdavidianus）为我国特有两栖动物，国家二级重点保护动物。大鲵自然地理分布以我国大陆第二阶梯为主，秦巴山脉与武陵山脉为多。我国政府对大鲵保护高度重视，已建立53个涉及到大鲵保护的自然保护区，然而大鲵自然种群衰退明显。根据现场抽样调查并结合文献，估算目前我国大鲵自然资源量仅约为7．50万尾，与庞大的人工养殖群体数量形成鲜明对比，大鲵自然种群及其栖息地的有效保护迫在眉睫。建议在加强自然保护的同时，采取“哪里来放回哪里”的原则，在科学规划和论证的基础上，适度开展大鲵人工增殖放流，加强对放流群体的标志与跟踪监测，加强大鲵遗传研究，建立大鲵DNA信息库，以使大鲵自然种群得以逐步恢复、大鲵养殖产业得以可持续。

工厂化养殖条件下大鲵适宜养殖密度的研究

在工厂化养殖条件下，研究了养殖密度对2—5龄大鲵（Andrias davidianus）摄食与生长的影响。结果表明：2龄大鲵适宜养殖密度为27尾／m^2，该组特定生长率显著高于9尾／m^2组、18尾／m^2组（P〈0．05），且饵料系数最低；当养殖密度为17尾／m^2时，3龄大鲵的增重率、特定生长率最大，饵料系数最低且与低密度5尾／m^2组差异显著（P〈0．05），确定3龄大鲵的适宜养殖密度为17尾／m^2；4龄大鲵特定生长率的最大值出现在养殖密度为10尾／m^2，显著高于16尾／m^2组（P〈0．05），且饵料系数最低，4龄大鲵的适宜养殖密度为10尾／m^2；5龄大鲵的适宜养殖密度为5尾／m^2，特定生长率与高密度组9尾／m^2差异显著（P〈0．05），饵料系数最低。大鲵适宜养殖密度与体重存在显著的负相关性，关系式为y=～0．0164x＋25．34（r^2=0．8399）。

十六种中草药及其复方对大鲵致病性豚鼠气单胞菌的体外抑制作用

应用二倍稀释法测定了诃子、五倍子、石榴皮等16种中草药及其复方对大鲵(Andrias davidianus)致病性豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,应用棋盘法设计16种中草药组合的120种双联复方和10种中草药组合的120种三联复方,评估了复方的体外抑菌作用。结果表明:16种中草药对大鲵致病性豚鼠气单胞菌均有一定程度的抑菌作用,抑菌作用强弱依次为诃子、五倍子、石榴皮、大黄、槐角、覆盆子、黄芩、金樱子、肉苁蓉、丁香、川牛膝、赤芍、知母、防风、天葵子及罗汉果;在120个中草药双联复方中,5.8%为显著协同作用,82.6%为协同作用,11.6%为相加作用;在120个中草药三联复方中,29.2%为显著协同作用,87.5%为协同作用。因此,合理的中草药配伍能提高对大鲵致病性豚鼠气单胞菌的体外抑菌作用。

大鲵人工催产与孵化技术研究

对大鲵(Andrias davidianus)的人工催产和孵化技术进行了研究。结果表明,LRH-A2和HCG催产效果较好,经人为调控可使大鲵性腺成熟度状态良好;人工孵化时通过严格控制水温18～21℃、溶氧保持在5 mg/L以上、光照度300 lx以下,给予适当的流水刺激,孵化率可达76.4%。

大鲵皮肤药膏和大鲵黏液药膏烫伤药理试验研究

建立了SD大鼠背部深Ⅱ度烫伤模型,研究大鲵皮肤药膏和大鲵黏液药膏对大鼠皮肤烫伤的治疗作用。结果表明,大鲵皮肤药膏、大鲵黏液药膏能明显缩短烫伤后大鼠创面愈合时间;创面愈合速度较美宝湿润烧伤膏组快,并能使创面面积明显缩小;显微镜下观察真皮内皮肤附件结构完整,未见水肿及炎性细胞浸润。大鲵皮肤药膏、大鲵黏液药膏具有促进实验大鼠烫伤创面愈合的作用。

源生态类野生中国大鲵肌肉氨基酸组成分析

采用凯氏定氮法检测大鲵(Andrias davidianus)肌肉的蛋白含量,利用氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量,对源生态类野生大鲵肌肉进行营养价值评价。结果表明,大鲵肌肉粗蛋白质含量较高,为干物质含量的91.81%,总必需氨基酸占总氨基酸的44.40%,总必需氨基酸与总非必需氨基酸的比值为0.80;大鲵肌肉氨基酸分类组成中风味氨基酸含量为26.42%～33.45%,药用氨基酸含量达57.69%,支链氨基酸和抗氧化活性氨基酸的含量分别达15.60%和26.35%;大鲵肌肉的必需氨基酸比值系数分SRC为79,与甲鱼较为接近,优于羊肉、牛肉、猪肉,必需氨基酸指数EAAI为1.21,明显优于甲鱼、羊肉、牛肉和猪肉。大鲵肌肉蛋白含量高,氨基酸含量丰富,具有较高的药用和保健价值。

不同生境下大鲵放流效果的监测与评价

为探求提高大鲵（Andriasdavidianus）增殖放流成功率及其监测的有效方法，通过对浙江省庆元大鲵国家级自然保护区内增殖放流点周边环境选择及大鲵生存状况的追踪调查，分析了不同生境、不同饵料组成、水质情况对增殖放流大鲵成活及生长的影响，探讨了影响大鲵生存的因素，并分析了3种标记方法的优缺点。结果表明，选择具有深穴或岩石覆盖洞穴多、饵料鱼类资源丰富、水质优良且水流较缓的实验地作为增殖放流点，有利于放流大鲵的存活和生长。3种标记方法的对比表明无线电动物标签效果最好，荧光标记次之，打烙印标记方法不宜采用。

中国大鲵“烂脚病”病原菌的分离鉴定

为了解重庆地区部分中国大鲵(Andrias davidianus)养殖场流行"烂脚病"的病因,对患"烂脚病"中国大鲵进行剖检后,在其肺部分离到一株优势菌CQWU2013,对该优势菌进行致病性实验、生理生化特性鉴定、16S r DNA测序和药敏实验。结果显示:中国大鲵"烂脚病"是由肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella mobilis)引起的,该菌为短链状排列的革兰氏阴性杆菌,其生理生化特性符合肺炎克雷伯氏菌的指标,16S r DNA序列同源性高达99.6%;药敏实验显示该菌对部分青霉素类、β-内酰胺类、氨基糖苷类和糖肽类药物耐药,对供试的20种药物中有7种药物出现明显的耐药现象。

大鲵亲鲵的培育研究

2003-2005年在西安市大鲵(Andrias davidanus)生态繁育养殖基地对大鲵亲体进行培育,分别采取单池群养培育、单池单养培育、雌雄一对一隔网单养培育三种培育方式开展试验。三种方式培育结果显示,雌雄亲鲵参繁率为雌雄一对一隔网单养培育>单池单养培育>单池群养培育,且雌鲵整体发育优于雄鲵;产卵量为雌雄一对一隔网单养培育>单池单养培育>单池群养培育;亲鲵产后成活率为雌雄一对一隔网单养培育=单池单养培育>单池群养培育。雌雄一对一隔网单养对亲鲵培育较为有利,可以减少干扰与伤残。

大鲵常见疾病及综合防治技术研究

对大鲵（Andriasdavidianus）常见疫病如赤皮病、腐皮病、水霉病、线虫病、浮头病、弯体病和碱中毒等及近些年的新现疫病如良性肿瘤病、孢子虫病、稚鲵烂鳃病、假溃烂性脓包症和稚鲵假性腹胀病进行了阐述。并针对如何加强疫病基础研究，建立检疫技术规范，建立疫病防治档案建设并进行疫病的综合防治，开展大鲵疫病相关的科普教育，加大国际合作和学术交流和加强大鲵疫情的监控和报告制度等防治措施的建议进行了综述。

投喂率对5龄大鲵生长与摄食的影响

比较投喂水平分别为1．8％、1．9％、2．0％、2．1％、2．2％时，对5龄大鲵（Andriasdavidianusus）生长和摄食的影响，以确定5龄大鲵的适宜投喂率。结果表明：不同投喂率对大鲵生长的影响显著（P〈0．05）。大鲵的体长增长率、净增重、增重率、特定生长率都是随投喂率的增加而升高，投喂率为2．2％时各项生长指标显著高于低投喂率1．8％组（P〈0．05）。饵料系数的差异虽不显著，但投喂率为2．2％时饵料系数较其他组最低。综合最大增长率和最小饵料系数两个指标，在本实验设计水平，5龄大鲵的适宜投喂率为2．2％。

大鲵胚胎早期发育特征和受精率计算方法

探讨了大鲵（Andrias davidianus）胚胎发育过程中受精率的评判标准和计算受精率的最佳时间。对大鲵胚胎发育观察表明：发育到二细胞的胚胎均能发育到神经胚期,因此可以将二细胞胚胎期作为受精的标志;孵化温度在17-20℃时,温度对大鲵的孵化率没有影响;胚胎发育经过24 h后,有90%-95%的受精卵可发育到二细胞期。因此可以以受精后24 h的二细胞分裂数作为计算大鲵胚胎受精率的基础数据。研究结果有利于对大鲵人工繁育效果提前判断和对孵化条件及时调控处理。

旅游干扰对张家界市大鲵饵料鱼及大鲵种群数量的影响

为了探究旅游干扰对国家Ⅱ级保护动物--中国大鲵(Andrias davidianus)种群数量及其饵料鱼种类、资源量的影响,对湖南省张家界市重度与轻度旅游干扰下大鲵栖息地的旅游干扰内容、饵料鱼的种类与渔获量、大鲵种群数量进行了同步调查与估算,并比较了旅游重度干扰区在旅游开发前后饵料鱼种类的差异,以及旅游重度与轻度干扰区饵料鱼种类与渔获量的差异。结果表明:在湖南省张家界市的大鲵栖息地共发现饵料鱼类4目10科22属25种;旅游重度干扰区现在饵料鱼的物种数大于旅游开发前,也大于轻度干扰区,但统计上无显著差别;Jaccard系数分析显示重度与轻度干扰区之间饵料鱼物种组成的相似性较小;与轻度干扰区相比,重度干扰区的渔获量较多,但大鲵种群数量较少。以上信息提示,在张家界市目前适度开发和管理模式下,旅游干扰对大鲵饵料鱼资源没有产生明显的负面影响,但重度干扰区可能由于游客活动带来的噪声增加或者洞穴数的减少等其他干扰因素使大鲵种群数量有所下降。