UPLC-MS/MS法测定人血浆中伏立诺他的浓度及其药代动力学研究

目的：建立超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定人血浆中伏立诺他的浓度,评价伏立诺他胶囊在皮肤T细胞淋巴瘤患者体内的药代动力学特征。方法：血浆经乙腈蛋白沉淀后,采用Waters Acquity-UPLC BEHC18色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.7μm）作为分析柱,以0.5%乙酸水（A）-0.5%乙酸乙腈（B）为流动相,梯度洗脱（0-0.2 min,20%B;0.2-1.7min,20%B→90%B,1.7-2.2 min,90%B;2.3-3.0 min,90%B→20%B）,流速0.3 mL·min-1,进样器内温度4℃,柱温40℃;电喷雾离子化（ESI＋）串联质谱检测,喷雾电压5 kV,温度450℃,去簇电压、入口电压及碰撞室出口电压值分别为90、10和13 V;伏立诺他和苯海拉明（内标）的多反应监测（MRM）扫描离子对分别为m/z 265.3→232.0和m/z 256.1→167.0。受试者给予伏立诺他口服治疗（400 mg·d-1）,分别采集第1 d及第22 d静脉血以进行单次给药和多次给药的药代动力学分析。结果：伏立诺他浓度在1-1000 ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9996）,最小检出浓度为0.1 ng·mL-1;日内和日间精密度（RSD）均小于14%,准确度为87.6%-109.2%;提取回收率和基质效应分别为93.6%-105.7%和92.3%-93.5%。共完成4例受试者的单次给药（400 mg·d-1）药代动力学分析,达峰浓度（Cmax）为（402.5±50.2）ng·mL-1,半衰期（T1/2）为（2.0±2.3）h;多次给药（400 mg·d-1,连续22 d）的Cmax为（800±247.2）ng·mL-1,T1/2为（2.04±1.4）h,蓄积指数为1.00,未见明显蓄积。结论：该方法的样本前处理简单,样本检测时间为3 min,适用于伏立诺他临床药代动力学研究中高通量检测的要求。