伏马霉素通过上调TGF-β信号通路促进HepG2细胞增殖

目的:研究伏马霉素B1(Fumonisin B1,FB1)对人肝癌HepG2细胞株增殖的作用及相关机制。方法:人肝癌HepG2细胞株接种至培养皿,分别设0、0.5、1.0、10、50μmol/L伏马霉素浓度的DMEM培养液,处理48 h后,倒置显微镜观察细胞生长情况并计数。在此基础上,通过CCK-8实验观察FB1对细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad4(Drosophila mothers against decapentaplegic 4,Smad4)、纤溶酶原激活物抑制物1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)mRNA的表达。结果:FB1作用后,倒置显微镜下观察HepG2细胞有丝分裂象明显增加;CCK-8实验结果显示,不同浓度FB1处理48 h后,HepG2细胞增殖随FB1浓度的增加而增加,呈剂量依赖性。实时定量PCR结果显示,与对照组相比,10μmol/L组和50μmol/L组Smad4,PAI-1 mRNA表达均显著上调,而0.5μmol/L组和1.0μmol/L组与对照组相比,差异无统计学意义;各浓度组TGF-β1 mRNA均较对照组显著上调。结论:FB1可以有效促进HepG2细胞增殖,其机制可能与上调TGF-β1,Smad4,PAI-1 mRNA表达,即TGF-β信号通路有关。

普洱茶、红茶、绿茶中真菌毒素的检测

检测茶叶中黄曲霉毒素(B_1,B_2,G_1和G_2)、伏马霉素(FB_1,FB_2,FB_3)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇,明确茶叶中的真菌毒素含量范围并为茶叶监管提供依据。采用有机溶剂(0.1%甲酸乙腈溶液)以及80℃热水2种方法提取茶叶中的真菌毒素,利用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法进行分析测定。黄曲霉毒素B1,G1的线性范围为39.1~5 000 ng·L^(-1),黄曲霉毒素B2,G2的线性范围为117~15 000 ng·L^(-1);伏马霉素(FB1,FB2,FB3)的线性范围为2.44~313 ng·L^(-1);脱氧雪腐镰刀菌烯醇的线性范围为3 125~5 000 ng·L^(-1)。所得8种真菌毒素的回归方程均有良好的线性关系(r≥0.999 0),回收率为85.7%~99.6%,相对标准偏差<10%。对20种国际市售茶叶中的8种真菌毒素进行测定,结果显示采用有机溶剂提取法,包括普洱茶、红茶、绿茶在内的多种茶叶产品都不同程度含有微量的真菌毒素,其中黄曲霉毒素B2在6种茶叶产品中被检测到,黄曲霉毒素G_1在3种茶叶中被检测到,伏马霉素FB_1在2种茶叶中被检测到,伏马霉素FB2在一种茶叶中被检测到。而采用热水提取方法,只有一种茶叶产品的茶汤中检测到微量的伏马霉素B_1,B_2,其他各种茶叶的茶汤中均未检出毒素。以上2种方法检出的真菌毒素含量在0.15~7.31μg·kg^(-1),均未超过国际食品安全规定的真菌毒素限量。80℃热水提取模拟实际的饮茶方法,更能准确地检测茶叶中进入茶汤的真菌毒素,适用于茶叶(采用热水冲泡的)饮用产品,而有机溶剂萃取法适用于食用产品中霉菌毒素绝对含量的检测。