幽门螺杆菌外膜蛋白Omp18免疫优势表位的预测与鉴定

目的:分析预测幽门螺杆菌(Hp)外膜蛋白Omp18的免疫优势表位,并进一步验证确定其免疫优势片段的免疫原性。方法:通过生物信息学软件DNAStar分析预测幽门螺杆菌外膜蛋白Omp18的潜在优势表位,并由北京赛百盛基因技术有限公司合成相应的优势片段;片段通过口服免疫的方式免疫接种雌性BALB/c小鼠,每周1次共免疫4次。末次免疫10 d后处死小鼠,取血清检测IgG、IgA水平,取肠道灌洗液检测sIgA水平;取小鼠脾细胞ELISA法检测细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6水平,并通过MTT比色法检测脾细胞增殖情况;末次免疫10 d后Hp标准株攻击小鼠2次,4周后处死小鼠,取胃组织进行快速尿素酶实验,并计算每组的感染率。结果:ELISA法检测各片段免疫小鼠血清IgG、IgA以及肠道sIgA水平均高于对照组,且差异有显著统计学意义(P<0. 05);各免疫组脾细胞上清INF-γ、IL-2水平均显著高于对照组(P<0. 05),而IL-4、IL-6水平较对照组则差异无显著统计学意义(P>0. 05);MTT比色法结果显示各片段刺激后小鼠淋巴细胞均有显著增殖(P<0. 05);快速尿素酶实验结果提示各片段免疫后均能显著减少小鼠胃组织中Hp的感染(P<0. 05)。结论:通过生物信息学软件分析预测的外膜蛋白Omp18优势片段均具有较好的免疫原性,且对Hp感染有一定的保护作用。

重组免疫优势肽段为抗原的ELISA法在检测2型单纯疱疹病毒感染中的应用

目的表达2型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白G免疫优势片段gG321-580，探讨重组gG321-580作为检测HSV-2特异性IgG诊断抗原的可行性，为进一步开发诊断试剂盒奠定基础。方法整合有sG32l-5踟基因的重组杆状病毒接种s19昆虫细胞，NTA-Ni^2＋纯化表达His-gG32M80融合蛋白。应用HSV-2感染Vero细胞，制备HSV-2病毒抗原。将gG321-580蛋白和HSV-2病毒抗原分别作为包被抗原，建立间接ELISA法（gG321-580-ELISA和病毒抗原-ELISA）。分别用gG32M80-ELISA和病毒抗原-ELISA检测105份临床样本，两者的检测结果以HerpeSelect 2 ELISA IgG试剂盒作为金标准，在特异性、灵敏性和符合率等方面进行比较。结果SDS-PAGE和Western印迹结果显示，表达的gG321-580蛋白相对分子质量约为60000，具有良好的免疫学活性。与HerpeSelect 2 ELISA IgG试剂盒相比，gG321-580-ELISA的灵敏度、特异度、符合率分别为83．3％、81．8％、82．9％，病毒抗原-ELISA的灵敏度、特异性和符合率分别为20．8％、93．9％、43-8％。gG321-580-ELISA敏感度和符合率高于病毒抗原-ELISA。结论表达的HSV-2重组gG32M80蛋白作为包被抗原的ELISA法是一种敏感、特异的方法，具有较大的应用价值。