连作马铃薯根际干腐病优势病原菌荧光定量PCR快速检测及在根际的动态变化

为了解根际土壤中土传病害病原菌的积累与连作障碍之间的关系,进一步寻求缓解和克服马铃薯连作障碍土传病害的有效途径,本研究建立了以马铃薯根际土壤为研究对象的干腐病病原菌荧光定量PCR快速检测体系。结果显示,研究建立优化的荧光定量PCR检测方法,对引起马铃薯干腐病的优势病原菌茄病镰孢菌和接骨木镰孢菌进行快速检测和绝对定量,主要优化参数为:上下游引物各0.4μL(10mmol/L),DNA模板3μL,退火温度60℃。连作马铃薯根际土壤茄病镰孢菌和接骨木镰孢菌随连作年限的动态变化趋势均表现为随连作年限的递增呈现上升趋势,其中CP5的累积量最大,为1.45×104拷贝/g,比CK增加了27.8倍。CP4、CP3、CP2、CP1根际病原菌累积量分别比对照增加了10.5,16.31,8.32,3.51倍。由此可见,茄病镰孢菌和接骨木镰孢菌的数量均随连作年限的递增呈上升趋势。根际镰刀菌随生育进程的动态变化因病原菌种类而异,茄病镰孢菌以收获期累积量最大,平均为1.2×104拷贝/g,随生育进程的推进呈上升趋势。而接骨木镰刀菌是播前累积量最大,平均为1.55×104拷贝/g,随生育进程的推进呈下降趋势。因此,研究区马铃薯根际土壤中镰刀菌的大量积累可能是导致马铃薯连作障碍发生的主要原因之一。

甘肃大蒜贮藏期干腐病优势病原的生物学特性

大蒜干腐病是甘肃大蒜贮藏期的主要病害,其优势病原为尖孢镰孢菌、轮枝镰孢菌和茄病镰孢菌。生物学特性研究结果表明,尖孢镰孢菌GSLZG-9-2、茄病镰孢菌GSGGG-12的生长温度范围均为10~35℃,菌丝生长最适温度分别为26、28℃,产孢最适温度分别为35、30℃;轮枝镰孢菌GSLZG-3-2的生长温度范围为15~35℃,菌丝生长和产孢最适温度分别为26、30℃,p H值范围均为4~9。尖孢镰孢菌GSLZG-9-2、轮枝镰孢菌GSLZG-3-2、茄病镰孢菌GSTSG-12菌丝生长最适p H值分别为7、6、7,而产孢最适p H值分别6、7、7,p H为7时三者产孢量均最大;三者营养生长最好的碳源为可溶性淀粉,氮源为牛肉膏,产孢量最大的碳源为葡萄糖,氮源为酵母膏;三者均在完全黑暗条件下菌丝扩展最快,光暗交替有利于产孢;GSLZG-9-2和GSLZG-3-2菌丝致死温度均为75℃、10 min,GSGGG-12菌丝致死温度为70℃、10 min;三者分生孢子致死温度依次分别为55、55、50℃,10 min。

辽西奶牛乳房炎优势病原菌的分离鉴定及药敏试验

采集辽西地区5个城市的临床型奶牛乳房炎奶样89份,采用形态学观察和基因分析法进行了细菌的分离鉴定,结果显示优势病原菌依次为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌。应用生物梅里埃药敏试剂盒测定所分离的乳房炎主要病原菌对常用抗生素的药物敏感性,结果表明金黄色葡萄球菌敏感率较高的药物有米诺环素、呋喃妥因、喹奴普汀、克林霉素,而耐药率较高的药物有青霉素、苯唑西林、万古霉素、红霉素;大肠杆菌敏感率较高的药物有头孢西丁、替卡西林,而耐药率较高的药物依次为阿莫西林、头孢噻吩、环丙沙星、复方新诺明;无乳链球菌对氨苄西林、万古霉素、利福平、替考拉宁敏感率高达100%,四环素、链霉素次之,而对青霉素、环丙沙星耐药率较高;依据上述结果,青霉素和环丙沙星应为临床治疗奶牛乳房炎的淘汰药物。该结果为针对辽西地区防治奶牛乳房炎采取科学合理的防治措施提供了可靠依据。

条斑紫菜绿斑病优势病原菌的鉴定及其生长特性与药敏分析

从条斑紫菜绿斑病样品中分离获得优势致病菌,通过16S rRNA测序进行菌种鉴定,建立快速检测的LAMP技术,并进行生长特性及药敏实验分析。使用16S rRNA测序鉴定表明,该致病菌为深海微小杆菌(Microbacter bathyae)。根据OD值建立不同温度和培养基中的生长曲线,分析深海微小杆菌的生长特性。利用K-B纸片法进行药敏试验,分析其对20种抗生素的药物敏感性。结果表明,条斑紫菜绿斑病的优势病原菌为深海微小杆菌,对其生长特性与药物敏感性进行分析,可为条斑紫菜绿斑病病原的防治提供参考依据。

甘肃省马铃薯镰刀菌干腐病优势病原的分离鉴定

为明确甘肃马铃薯镰刀菌干腐病的优势病原,2006年12月～2007年3月由西至东从甘肃张掖、天祝、永登、临洮、渭源和西和等6县市的马铃薯贮藏窖中采集表现有镰刀菌干腐病症状的马铃薯薯块,以组织分离法分离病原,单孢纯化镰刀菌(Fusarium spp.)菌株后,以形态学为基础,参照Nelson镰刀菌分类系统进行鉴定。结果表明:6个采样区共分离到293株镰刀菌菌株,其中以接骨木镰刀菌(F.sambucinum)和茄病镰刀菌(F.solani)出现频率高,是优势种。分析发现第一优势种随采样区而异,张掖、天祝和渭源采集的样品中茄病镰刀菌分离频率分别为42.6%、42.1%和32.4%,接骨木镰刀菌分离频率分别为14.8%、5.3%和26.5%,茄病镰刀菌为第一优势种;永登、临洮和西和采集的样品中接骨木镰刀菌分离频率分别为52.1%、50.9%和55.2%,茄病镰刀菌的分离频率分别为23.3%、32.7%和20.7%,接骨木镰刀菌为第一优势种。本文进一步对其在PDA、CLA上的培养特征进行了观察和描述。按照柯赫氏法则用混合菌株接种法对大西洋(Atlantic)、夏波蒂(Shepody)以及一地方品种进行致病性测定,证实了优势菌种对块茎的致病性。利用EF-1α基因引物(EF-1H和EF-2T)对接骨木镰刀菌菌株GAUF-F12进行基因组DNA的PCR扩增,将PCR产物回收测序后在GenBank上比对,菌株GAUF-F12与GenBank登记的接骨木镰刀菌5个菌株的同源性均达99%;用DNASTAR分析软件将同源性较高的登记菌株的序列与GAUF-F12菌株构建同源性树,结果表明:该菌株与以上5个接骨木镰刀菌菌株均位于同源性树的同一分支,聚为一类,与形态学的鉴定结果一致。

洛阳市疾病预防控制中心检验监测中心病原微生物室

目的调查2017-2018年洛阳市手足口病优势病原构成,为洛阳市手足口病防控提供技术支撑。方法按照洛阳市手足口病监测方案,每月对所辖县(区)手足口病患儿按要求采集一定数量的粪便标本,共收集粪便标本1710例,发病时间为2017-2018年。采用荧光聚合酶链反应(PCR)对采集粪便标本进行肠道病毒核酸检测,对比分析其优势病原构成情况,对优势病原患儿的社会人口学特征进行统计。结果经实验室诊断,肠道病毒总阳性率为64.44%,其中EV71阳性构成比为9.89%,CA16阳性构成比为11.62%,CA6阳性构成比为45.92%,其余肠道病毒阳性构成比为32.58%;506例CA6阳性患儿中男性占比57.3%,女性占比42.7%;2岁及以下患儿占比76.5%,5岁及以下占比93.3%;散居患儿占比83.2%,入托患儿占比16.8%;城区患儿占比56.9%,乡村患儿占比43.1%。5岁及以下儿童为CA6易感群体。结论洛阳市最常见的手足口病致病类型为EV71、CA16及CA6,其中新优势病原为CA6,5岁及以下儿童为CA6易感群体,临床上需要对上述病原体进一步加强鉴别、诊断,并深入分析其临床特点。

2021年江苏省部分牧场奶牛临床型乳腺炎源病原菌的分离鉴定及地区、月份分布情况分析

为了解江苏省部分地区奶牛临床型乳腺炎源病原菌感染情况及其与地区及月份分布的关系,试验选择苏北(新沂市、泗洪县、淮安市)、苏中(盐城市、泰州市)、苏南(张家港市)地区的六个规模化牧场,于2021年5—12月份采集患临床型乳腺炎奶牛奶样316份,进行病原菌分离培养及16S rDNA基因的PCR扩增及测序鉴定,根据病原菌鉴定结果分析江苏省不同地区及不同月份的病原菌检出情况。结果表明:在316份临床型乳腺炎奶样中,287份奶样检测出病原菌,检出率为90.82%。不同地区间的样品检出情况表现出较大差异,苏北地区共检测出14种病原菌,检出率为92.52%;苏中地区共检测出10种病原菌,检出率最高,达到了97.01%;苏南地区仅检测出9种病原菌,检出率最低,为68.57%。不同月份间样品检出情况也存在差异,12月病原菌检出率最高,达到了100%,但病原菌种类却最少,仅为8种;5,6,7月份病原菌检出率均低于其他月份,但病原菌检出种类较多。不同地区间奶牛临床型乳腺炎病原菌感染模式存在差异,7种病原菌感染模式仅出现在苏北地区,苏南地区未检测出6种及以上的病原菌感染模式;除12月份以4种和5种病原菌感染模式为主外,其余各月份均以2种和3种病原菌感染模式最多。临床型乳腺炎的病原菌优势菌种在各地区和各月份间存在差异,苏北地区以肺炎克雷伯菌、葡萄球菌属、大肠杆菌和酵母菌为主,苏南地区以葡萄球菌属为主;10月份以牛支原体和金黄色葡萄球菌检出率最高,分别为72.41%、51.72%;12月份以葡萄球菌属检出率最高,达到了86.67%;其他各月份样品均以肺炎克雷伯菌检出率最高。说明江苏省六个牧场奶牛临床型乳腺炎源病原菌的总体检出率较高,同时病原菌检出率、病原菌检出种类和优势病原菌在不同地区及不同月份间的分布存在差异。

湖北省2个规模化蛋鸡养殖场环境细菌监测分析

为了解蛋鸡养殖场环境中病原菌流行情况,试验采集湖北省不同地区2个规模化蛋鸡养殖场不同位置的空气、水线和饲料样品进行病原菌检测,并采用16S rDNA测序分析样品中的优势病原菌。结果显示:饲料样品中细菌总数符合《GB 13078—2017饲料卫生标准》,而鸡舍风机附近空气及水线中细菌总数均较高;空气中优势病原菌是芽孢杆菌和葡萄球菌,饲料和水线优势菌为芽孢杆菌。结果表明,规模化蛋鸡养殖场饲料中的芽孢杆菌易污染水线和空气,风机附近是细菌污染重点区域,应定期消毒。

糙皮侧耳褐腐病和褐斑病致病机理研究初报

鉴定了山东省糙皮侧耳主要侵染性病害褐腐病和褐斑病的症状和病原菌 。

陕西省小麦不同部位镰刀菌分离鉴定及毒素化学型分析

为明确陕西省小麦不同部位镰刀菌种群结构及其毒素化学型,于2022年小麦灌浆期分别从陕西省渭南市、宝鸡市、咸阳市、西安市采集小麦穗部、茎秆以及茎基部具有明显病状的样品,采用单孢分离法获得镰刀菌菌株,并使用分子生物学鉴定其种群结构及毒素化学型。结果表明,从采集的样本中共分离到156株镰刀菌菌株,其中发生在穗部的赤霉病以及发生在茎秆的秆腐病的优势病原菌均为禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum),主要以15-ADON化学型为主;发生在茎基部的茎基腐病的优势病原菌为假禾谷镰刀菌(F.pseudograminearum),其15-ADON和3-ADON化学型占比差异不大;未检测到NIV毒素化学型的镰刀菌。以上结果说明,小麦不同部位对镰刀菌毒素化学型可能不存在选择性,小麦茎基部与穗部和茎秆的镰刀菌毒素化学型不同,原因可能是由优势病原菌不同造成的。

柑橘煤污病病原菌的研究

采用病菌标本直接观察和人工培养物观察两种方法对贵州柑橘煤污病病原菌进行了鉴定。结果表明,柑橘煤污病的优势病原菌为Chaetothyrium spinigerum、Triposporiopsis spinigera、Fumago vagans、Cladosporium cladosporioides、Alternaria tenuissima和A.alternate6种。