重组人巨细胞病毒(HCMV)优势表位嵌合抗原的构建表达以及捕获法检测IgM抗体

通过计算机软件分析选择巨细胞病毒优势抗原表位,用聚合酶链式反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了巨细胞病毒多优势表位嵌合抗原表达载体p4T-UL32-UL44-UL80a-UL83,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,GST亲和层析法获得高纯度嵌合抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记嵌合抗原,并构建捕获法检测血清中的抗HCMVIgM抗体。结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性,用其建立的捕获法检测确诊的30份阳性和63份儿童阴性血,阳性检出率和阴性检出率都是100%说明用嵌合抗原构建的捕获法检测血清中抗HCMVIgM抗体具有更高的灵敏度和检出正确率,其检测水平已经达到国外的同类产品水平。

梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达构建双抗原夹心法的研究

目的用基因工程方法表达嵌合的梅毒螺旋体优势表位抗原,建立检测血清梅毒抗体的双抗原夹心酶联免疫方法。方法通过计算机软件分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位,用聚合酶链反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了梅毒螺旋体多优势表位嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN47)表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)进行表达,亲和层析柱法纯化获得高纯度融合抗原,并用其建立检测梅毒抗体的DAS-EIA。结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性。用其建立的嵌合抗原DAS-EIA检测确诊的50份阳性和30份阴性血清,阳性检出率和阴性检出率都是100%。结论嵌合抗原DAS-EIA法具有比间接EIA和重组单抗原DAS-EIA更高的灵敏度和检出正确率,其检测水平已经达到国外TPHA的水平,该方法的建立为临床检测梅毒开辟了新的领域。

梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达构建双抗原夹心法的研究

目的用基因工程方法表达嵌合的梅毒螺旋体优势表位抗原,建立检测血清梅毒抗体的双抗原夹心酶联免疫方法(double antigen sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-EIA)。方法通过计算机软件分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位,用聚合酶链式反应(PCR)扩增优势表位基因,构建了梅毒螺旋体多优势表位嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN47)表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)进行表达,亲和层析柱法纯化获得高纯度融合抗原,并用其建立检测梅毒抗体的DAS-EIA。结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性。用其建立的嵌合抗原DAS-EIA检测确诊的50份阳性和30份阴性血,阳性检出率和阴性检出率都是100%。结论嵌合抗原DAS-EIA法具有比间接EIA和重组单抗原DAS-EIA更高的灵敏度和检出正确率,其检测水平已经达到国外TPHA的水平。该方法的建立为临床检测梅毒开辟了新的方法。

丙型肝炎病毒抗体干式荧光发光检测方法的建立及临床评价

目的建立1种丙型肝炎病毒(HCV)抗体(抗-HCV)干式荧光发光检测方法并评价其临床应用性能。方法1)干式荧光发光抗-HCV检测方法建立:利用高活性优势表位嵌合HCV抗原,采用基于双抗原夹心原理的干式荧光发光法检测抗-HCV;2)方法评价:以所建立的干式荧光发光抗-HCV检测方法检测抗-HCV快速检测试剂国家阳性及阴性参考品标本各20份,并与酶联免疫法(ELISA)平行检测108名丙型肝炎患者、36名其他疾病患者和205名健康体检者临床标本的抗-HCV,比较分析干式荧光发光抗-HCV检测技术的检测性能。结果所建立的抗-HCV干式荧光发光检测方法检测国家参考品阳性及阴性参考品符合率均为100%(20/20),精密度参考品的变异系数(CV)9.16%,最低检测限参考品符合国家参考品检测要求。在临床性能评价中,干式荧光发光抗-HCV检测方法诊断丙型肝炎患者的AUC值为0.984,灵敏度为96.30%(104/108),特异性为96.27(233/241)%。与ELISA法检测符合率为97.71%(341/349)(Kappa=0.952),具有等效性。结论新建立的抗-HCV干式荧光发光检测方法是1种敏感性和特异性均较高、利于现场快速检测的简便方法,能够用于临床。

干式荧光发光法快速检测梅毒螺旋体抗体的方法建立和初步应用与评价

目的建立一种干式荧光发光法快速检测梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)总抗体的检测技术,并评价其检测性能。方法利用高活性优势表位嵌合TP抗原,基于免疫层析和荧光发光平台,采用双抗原夹心原理建立检测梅毒螺旋体总抗体的快速检测方法。应用该方法检测梅毒螺旋体抗体快速试剂国家参考品,并与酶联免疫法平行检测360例临床样本,比较评价该技术的检测性能。结果建立了梅毒螺旋体总抗体干式荧光发光快速检测技术,检测国家参考品10份阳性参考品符合率为10/10,20份阴性参考品符合率为19/20,三批产品的批内重复性分别为12.00%,12.30%和9.10%,批间重复性为10.90%,最低检测限参考品L1和L2检测为阳性,L3检测为阴性。在临床样本评价中,该检测技术诊断梅毒患者的AUC值为0.986,敏感度和特异度分别为99.08%和94.02%,阳性预测值和阴性预测值分别为87.80%和99.58%,阳性似然比和阴性似然比分别为16.569和0.0098。与酶联免疫法检测试剂相比较,总体符合率为98.06%(Kappa=0.965),具有高度等效性。结论本研究建立的梅毒螺旋体抗体干式荧光发光快速检测技术是一种敏感度和特异度均高的检测方法,能够满足临床检测需要。