产几丁质酶菌株的筛选、鉴定及其对玉米秸秆中优势霉菌的抑制作用

本试验旨在研究利用产几丁质酶菌株抑制玉米秸秆中优势霉菌的生长,为提高秸秆利用率提供理论依据。利用胶体几丁质培养基从玉米秸秆样品中筛选出一株产几丁质酶菌株BS-1,同时将优势霉菌进行分离、纯化。通过对BS-1菌株和优势霉菌形态学观察以及16 S r DNA或18 S r DNA序列测定进行菌种鉴定。利用3,5-二硝基水杨酸比色法测定BS-1菌株发酵24、48、72、96、120、144、168 h的几丁质酶活性,以及牛津杯法检测BS-1菌株发酵液对玉米秸秆中优势霉菌的抑制作用。结果显示,玉米秸秆样品中分离出的BS-1菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),4株优势霉菌分别为卷枝毛霉(Mucor circinelloides)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、米曲霉(Aspergillus oryzae)和黑曲霉(Aspergillus niger)。BS-1菌株在37℃下培养120 h产几丁质酶活性达到最高值3.23 U/m L。BS-1菌株发酵液对玉米秸秆中4株优势霉菌均有明显抑制作用,抑菌圈直径分别为18.13、18.48、17.55、15.68 mm。由此可见,筛选到的产几丁质酶枯草芽孢杆菌BS-1能够有效抑制玉米秸秆中的卷枝毛霉、尖孢镰刀菌、米曲霉、黑曲霉4株优势霉菌生长。

基于霉菌酵母测试片和NIR技术快速鉴别霉变烟草最优势霉菌种类

为对烟草的最优势霉菌种类进行更具时效性的监控,本文首次提出一种霉菌酵母测试片结合NIR技术快速鉴别霉变烟叶上最优势霉菌种类的方法。将霉变烟叶上的霉菌用生理盐水稀释成不同梯度,并将稀释液制备成含菌测试片。应用NIR技术对培养后的含菌测试片进行光谱采集,获得具有不同种类最优势霉菌特征信息的近红外光谱数据。利用离散小波变换对光谱进行预处理,探究基于不同的小波基函数和小波分解层数的光谱预处理效果,运用随机森林算法构建不同最优势霉菌种类的鉴别模型。训练集识别正确率达98.25%,测试集预测正确率达99.30%,模型分类性能良好,能够用于识别常见的烟草最优势霉菌种类。本方法操作步骤简单,检测速度快,预测准确率高,为特定环境微生物种属鉴定提供了新的思路。

不同粮仓中稻谷优势霉菌的鉴定及差异性分析

为了研究稻谷中优势霉菌的种类、数量以及变化趋势,本试验以湖南省3个不同地区稻谷为研究对象,通过初步判断各粮仓优势霉菌,结合分子生物学方法对其ITS序列进行分析,并对稻谷霉菌进行带菌量测定。结果表明,3个粮仓中,金牛仓稻谷中优势菌株分别为根霉、米曲霉、毛霉、黑曲霉、烟曲霉、黄曲霉、白曲霉、桔青霉;金山仓稻谷中优势菌株分别为根霉、米曲霉、毛霉、黑曲霉、黄曲霉、白曲霉、桔青霉;银光仓稻谷中优势菌株分别为根霉、米曲霉、毛霉、黑曲霉、黄曲霉。3个粮仓中根霉数量分布均表现为上层>下层>中层,米曲霉为中层>上层>下层,毛霉、黑曲霉、黄曲霉的分布为上层>中层>下层,同一霉菌在同一粮仓不同粮层间数量存在显著差异(P<0.05);随着储藏时间的延长,米曲霉、黑曲霉、黄曲霉数量逐渐减少,根霉、毛霉数量增加,同一霉菌在不同储藏时间霉菌数量存在差异显著(P<0.05)。本研究结果为稻谷安全储藏与霉菌防控提供了一定的理论依据。

优势霉菌对稻谷品质的影响

为评估优势霉菌对稻谷品质的影响,以湖南籼稻为研究对象,将接种不同霉菌的稻谷于30℃和85%相对湿度环境中储藏。对不同储藏时期的样品,分别测定稻谷的霉菌数量、色度、脂肪酸值、可溶性蛋白含量、丙二醛含量、淀粉酶活力、多酚氧化酶活力和过氧化氢酶活力。结果表明:稻谷中分离出的黄曲霉和黑曲霉菌株菌落直径最大,黄曲霉与黑曲霉对稻谷产生的劣变影响也相对更大,接种这两种菌的稻谷储藏10 d后菌落总数分别增加了2.029、1.960(lg(CFU/g)),几乎将稻谷表面全部覆盖,而储藏末期,接种黄曲霉的稻谷褐变最为严重。储藏末期,脂肪酸值和丙二醛含量在接种黑曲霉的稻谷中最高(分别为148.93 mg/100 g、108.82 nmol/g),其次是接种黄曲霉的稻谷(分别为118.48 mg/100 g、96.47 nmol/g);对多酚氧化酶活力影响最大的是黄曲霉,接种黄曲霉的稻谷储藏到第10天其多酚氧化酶活力仅为2.444 U/mg;对稻谷过氧化氢酶活力影响最大的是黄曲霉和黑曲霉,储藏第10天的稻谷其活力分别仅为0.014 U/mg和0.181 U/mg。综上,在未来储粮安全研究中,应更加关注对于黄曲霉和黑曲霉的防控。

高大平房仓稻谷粮层霉菌量与优势霉菌的差异性研究

采用传统培养法对湖南与湖北两省粮库中的稻谷进行研究,对高大平房仓粮仓上中下三层的稻谷霉菌量及优势霉菌进行研究。研究结果表明:湖南省储藏一年稻谷与新入库稻谷中层霉菌数分别为6.4×10^3 CFU/g、1.3×10^3 CFU/g,相比上、下层,中层最多;湖北省储藏一年稻谷下层霉菌数为1.4×10^4 CFU/g,相比上、中层,下层最多,湖北省新入库稻谷上层霉菌数为1.4×10^4 CFU/g,相比中、下层,上层最多。通过传统的菌落培养及菌丝、孢子观察,初步判断上中下三层的优势霉菌,并结合分子生物学的方法对其ITS序列进行分析,通过PCR扩增,将扩增出来的基因序列,在GenBank进行BLAST,最终鉴定优势菌株为黄曲霉、白曲霉、聚多曲霉、内生真菌、黑曲霉。

储藏稻谷优势霉菌的分离鉴定及特征分析

以湖南长沙和湖北襄阳仓储稻谷为对象,对稻谷储藏期间主要优势霉菌进行分离纯化,记录其在高盐察氏培养基上的菌落形态。通过蔡司显微镜分别拍摄了主要优势霉菌的显微结构特征,并通过主要优势霉菌的DNA提取和测序,在基因水平上对霉菌种类进行了鉴定。经鉴定,主要优势霉菌分别为:黄曲霉、黑曲霉、白曲霉、灰绿曲霉和产黄青霉。

凉果中优势腐败霉菌的分离鉴定

凉果加工与贮藏中霉菌污染直接影响凉果的品质。为明确凉果贮藏中优势腐败霉菌的种类,该研究对在常温贮存4个月后霉变的葡萄干、话梅、杏脯中腐败霉菌进行了分离纯化,得到7种典型腐败霉菌。将分离出的腐败霉菌回接至无菌的葡萄干、话梅、杏脯表面,进行回接侵染实验,通过凉果霉变时间确定出4株菌株为优势腐败霉菌。通过菌落形态特征、菌丝和分生孢子显微结构观察,结合核糖体内转录间隔区(rDNA-ITS)序列分析,构建系统发育,鉴定优势霉菌种属。结果表明:葡萄干的优势霉菌为芽枝状枝孢霉(Cladosporium velox)和暗黄青霉(Penicillium citreonigrum),话梅的优势腐败菌为细极链格孢(Alternaria tenuissima),杏脯的优势腐败霉菌为菌核青霉(Penicillium sclerotiorum)。该研究结果可为凉果腐败霉菌的分离鉴定提供可靠的方法,也可为后续凉果杀菌方法的选择,贮藏条件的优化提供依据。

肉桂醛微胶囊在紫米防霉保鲜中的应用

为对比常见天然植物提取物对紫米优势霉菌的抗菌性能,并探究其在紫米储藏中的应用,本研究分离和纯化发霉紫米中的霉菌,通过显微镜镜检和分子生物学鉴定确定优势霉菌。以此为基础,研究柠檬醛、肉桂醛、对茴香醛、茶多酚、百里香酚、丁香酚六种天然植物提取物对紫米优势霉菌的抑菌性能,选择抑菌性能最好的天然植物提取物并测定其对优势霉菌的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)及最小杀菌浓度(Minimum Bacterial Concentration,MBC)。然后,通过正交试验优化得到肉桂醛微胶囊最佳制备工艺,将制得的微胶囊干燥后包装于无纺布袋中并应用于35℃紫米加速储藏试验。最后,以水分、霉菌含量、气味、色差等作为紫米新鲜度的指标,评价肉桂醛微胶囊对紫米的保鲜效果。结果表明:发霉紫米优势霉菌为Aspergillus versicolor(杂色曲霉)、Aspergillus chevalieri(谢瓦曲霉)、Cladosporium tenuissimum(细枝孢霉)、Aspergillus candidus(亮白曲霉)、Rhizomucor pusillus(微小根毛霉),肉桂醛对上述霉菌抑制效果最佳,并且测得其MIC分别为2、1、1、2、1 mg/mL;MBC分别为4、8、4、16、4 mg/mL。肉桂醛微胶囊最佳制备工艺为:海藻酸钠的浓度为3%,氯化钙的浓度为1%,壁芯比为12:1,造粒液面距离为25 cm,该工艺制得的肉桂醛微胶囊的包埋率为96.67%,载油率为61.27%。肉桂醛微胶囊使紫米的各项新鲜度指标均优于空白对照组,说明所制备的肉桂醛微胶囊对紫米保鲜有积极作用。

微波和臭氧处理对果脯的杀菌效果及品质变化分析

该研究探究了微波与臭氧处理对四种果脯优势霉菌芽枝状枝孢霉(Cladosporium velox)、暗黄青霉(Penicillium citreonigrum)、菌核青霉(Penicillium sclerotiorum)、细极链格孢(Alternariate nuissima)的抑菌效果及果脯理化品质的影响。结果表明,微波与臭氧处理均可显著抑制霉菌生长,抑菌率随微波功率,微波时间,臭氧通入时间增加而增大。当微波功率为630 W,微波时间为20 s时,四种霉菌抑菌率最高均达到100%。当通入臭氧10 min时,抑菌效果最佳,芽枝状枝孢霉、暗黄青霉、菌核青霉、细极链格孢的抑菌率分别达到73.17%、80.87%、83.33%、91.02%。微波和臭氧处理均对果脯理化品质具有一定影响,随着随微波功率,微波时间,臭氧通入时间增加,果脯水分含量、水分活度、总糖含量和色差值均呈下降趋势。研究结果为微波和臭氧技术在果脯杀菌中的应用提供了理论支撑和参考依据。

湖南酱类中主要微生物的研究及黄曲霉毒素B_1的监测

通过对6个酱类生产企业从原料,曲胚、酱胚、半成品、成品的分离、培养计数、归类和鉴定的微生物分析,得出酱类产品不同发酵阶段霉菌、酵母、细菌出现消长的现象,这与发酵过程中不同阶段的主要任务及代谢产物有关。对永丰辣酱和岳阳蚕豆酱中的主要霉菌进行了分析和鉴定,确定了永丰辣酱中主要的优势霉菌为米曲霉和黑曲霉,岳阳蚕豆酱中主要的优势菌为米曲霉。利用VITEK2对易引起辣酱产品胀包现象的细菌进行鉴定,并确定引起辣酱胀包现象的主要优势细菌为耶尔氏菌、甲基杆菌属、鲁沃夫不动杆菌。对6个酱类企业从原料、半成品和成品中的黄曲霉毒素B_1的监测。结果发现,按照目前行业的发酵工艺,黄曲霉毒素B_1严重超标的问题主要是制曲和发酵过程中滋生了黄曲霉菌。

Biolog技术监测淡豆豉发酵炮制过程中微生物种类动态变化

目的:监测淡豆豉发酵炮制过程中微生物种类的动态变化,为揭示淡豆豉炮制机制提供参考。方法:采用Biolog微生物自动鉴定系统对从不同发酵时间点淡豆豉样品中分离出的优势细菌、酵母菌和霉菌进行鉴定。结果:在整个发酵炮制过程中,枯草芽孢杆菌为主要优势细菌。发酵第3天优势细菌以枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌为主,优势霉菌为黄曲霉、寄生曲霉,优势酵母菌是汉氏德巴利氏酵母。发酵第6天细菌种类增多,出现了枯草芽孢杆菌、松鼠葡萄球菌、抗辐射不动杆菌、铅黄肠球菌,霉菌为寄生曲霉,酵母菌为汉氏德巴利氏酵母、瘦果红酵母和白吉利丝孢酵母A。"再闷"3 d优势细菌为枯草芽孢杆菌、赫氏埃希菌,优势霉菌为黑曲霉,优势酵母菌为瘦果红酵母。"再闷"15 d优势细菌为枯草芽孢杆菌和产酸克雷伯菌,未见霉菌出现,酵母菌以海隐球酵母和罗伦隐球酵母占优势。结论:淡豆豉发酵炮制过程中出现了微生物菌群此消彼长的动态变化,枯草芽胞杆菌作为优势菌种始终参与。