不同处理方法优选精子效果的比较

目的比较上游法、三种密度梯度离心法和洗涤离心法优选精子的效果。方法门诊收集浓度与活力正常的精液标本44份,每份精液各取0.5ml×5,分别采用上游法、密度梯度离心法和洗涤离心法进行处理,比较各组的精子浓度、活力、畸形率、精子畸形指数(SDI)和DNA碎片指数(DFI),再按试剂来源将密度梯度离心法分为Sperm Grad梯度离心组(A组)、Pure Sperm梯度离心组(B组)和Pure Ception梯度离心组(C组),进行上述参数比较。结果与上游法和梯度离心法相比,洗涤离心法精子浓度、DFI值、畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均显著增高(P<0.05),活力显著降低(P<0.05);与梯度离心法相比,上游法精子浓度、DFI值均显著降低(P<0.05),活力显著升高(P<0.05),两组间总畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均无显著性差异(P>0.05)。A、B、C组间精子浓度、活力、畸形率、SDI及DFI等参数均无显著性差异(P>0.05),但C组中段畸形率显著高于A组和B组(P<0.05),B组尾部畸形率显著高于A组和C组(P<0.05)。结论对于精子浓度和活力正常的精液标本,上游法精子活力最高、畸形率和DFI值最低,且精子浓度能够满足临床需要,是较为理想的精子优选技术;三种不同梯度离心法优选精子效果无显著性差异,适用于严重少精子症精液标本的处理。

Pureception^(TM)密度梯度离心法优选精子在夫精人工授精中的应用评价

目的探讨PureceptionTM密度梯度离心法优选精子在夫精人工授精(AIH)中的应用价值。方法采用PureceptionTM密度梯度离心法优选精子,应用于672对不孕夫妇的1 360个AIH周期治疗。结果经PureceptionTM密度梯度离心法优选精子后,精子浓度由(54.86±26.03)×106/mL提高到(63.89±34.40)×106/mL、前向运动(PR)精子百分比由(32.47±9.31)%提高到(69.78±5.10)%,其差异均具统计学意义(P<0.05)。PR精子回收率为(34.08±3.95)%。672对不孕夫妇共进行1 360个AIH周期,周期临床妊娠率16.62%(226/1 360)。优选精子前根据精子浓度分为3组:≥15×106/mL组(Ⅰ组)、(≥10,<15)×106/mL组(Ⅱ组)、<10×106/mL组(Ⅲ组),临床妊娠率分别为17.13%、16.05%、4.26%,Ⅲ组明显低于其他2组(P<0.05);根据PR精子百分比分为3组:≥32%组(A组)、(≥10,<32)%组(B组)、<10%组(C组),临床妊娠率分别为17.53%、16.55%、4.65%,C组明显低于其他2组(P<0.05)。优选精子后根据PR精子总数分为两组:≥10×106组、<10×106组,临床妊娠率分别为17.33%、10.22%,两组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 PureceptionTM密度梯度离心法是一种较好的精子优选方法,应用于AIH可获得较为满意的临床妊娠率。优选精子前精子浓度≥10×106/mL、PR精子≥10%,及优选精子后PR精子总数≥10×106,可获得较理想的临床妊娠率。

Pureception^(TM)密度梯度离心法优选精子在IVF、ICSI中的应用

目的探讨PureceptionTM密度梯度离心法优选精子在IVF、ICSI中的应用价值。方法采用PureceptionTM密度梯度离心法处理精液,并将获得的精子悬液应用于IVF或ICSI治疗周期。结果精液经处理后,精子密度由(33.86±20.42)×109/L提高到(60.28±41.76)×109/L,活动率由(46.73±10.36)%提高到(85.67±15.31)%,而畸形率则由(30.28±23.44)%降低到(10.49±5.26)%,差异均有显著性(P<0.01)。白细胞及细胞碎片等非精子成分明显减少。87对夫妇共进行119个IVF或ICSI治疗周期,其中42个周期获得临床妊娠,周期临床妊娠率为35.3%。结论PureceptionTM密度梯度离心法是一种较好的精子优选方法,应用于IVF或ICSI可获得较满意的临床妊娠率。

上游法及PureSperm密度梯度离心法优选精子的效果比较

40份精液分别采用上游法与PureSperm离心法进行优选,用计算机辅助精液分析(CASA)及彗星试验评价优选后的精子质量。两种方法优选后,精子活率、活力、轨迹速度等运动参数及精子核彗星细胞率相比,P均>0.05。两种方法处理后精子回收率(分别为42.70%±4.36%、15.58%±6.68%)相比,P<0.01。表明两种方法均可优选精子,PureSperm密度梯度离心法精子回收率高于上游法。

用优选精子方法解决性连锁遗传疾病

我国实行计划生育的同时，极力推行优生工作，计每年有l600万婴儿出生，约有1．3％有明显的先天缺陷，而大多数是遗传基因所致，尽管产前诊断工作早巳遍及我国各城市，无奈仍有很多的遗传病来有良好的手段为胎儿做产前渗断，即使有，还是实行负优生方法，要进行人工流产及引产手术，为我们的优生工作带来被动．

基于硅基过滤片的精子优选芯片设计与优化

利用半导体工艺技术构建了一种基于硅基过滤片的精子优选微流控芯片,具有高活力的精子会克服重力,在微孔的引导下游向精子收集池。分别在7,15,30,60 min对收集池中的精子取样,采用计算机辅助精子分析(CASA)系统进行精液常规检测、精子形态学和DNA碎片分析;对硅基过滤片的孔间距和筛选时间进行了优化。结果表明:6μm孔间距和15 min筛选时间为最佳的精子优选方案。所构建的基于硅基过滤片的精子优选芯片,可以有效优选出具有高活力且DNA完整性和形态正常率较高的精子。芯片精液吞吐量大,活动精子回收率较高,有一定的临床价值,同时提供了一种简单易操作的标准化精子优选流程。

利用微流控芯片技术进行人类精子优选的效果分析

目的:通过使用微流控芯片技术对男性不育症患者的精子进行选择,观察该方法优选精子的效果。方法:选择80例男性不育症患者,选择其中精子活力a级+b级<35%的患者30例,分别采用自行设计和制造的微流控芯片进行优选以及采用改良后的上游法进行优选,对于剩余50例患者采用微流控芯片法进行优选,观察优选后精子活力、畸形率等参数。结果:50例患者经过微流控芯片优选后,精子活力显著提高,精子畸形率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。对于30例中度弱精子症患者两种方法优选后精子活力显著提高、畸形率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且微流控芯片法优于改良后上游法。结论:微流控芯片法优选精子效率高、操作简便、对精子几乎无损害,适合在临床辅助生殖中普及和推广。

王氏管精子优选法的应用及效果

目的 探讨王氏管精子优选法在精子优选的应用 ,并与传统的精子上游法进行比较。方法 随机选择 5 7份精液 ,采用两种方法进行配对处理 ,比较两种方法分离前后、两者间精子活动率、形态以及精子顶体形态和精子染色质等参数的变化。结果 两种方法处理后的精子活动率、精子形态差异有显著性 (P <0 0 1) ,王氏管法处理后精子顶体完整率、正常染色质率亦显示出显著的差异 (P <0 0 1)。结论 王氏管精子优选法和精子上游法在精子处理中获得较好的精子质量 ,而王氏管精子优选法则获得更优质的精子 。

精子优选和精液冷冻对顶体完整率的影响

目的:探讨精子优选和精液冷冻对精子顶体完整率的影响。方法:16例精液样本采用Percoll和上游两种方法优选,13例精液标本采用快速和缓慢冷冻处理,采用巴氏染色法分析精子顶体完整率。结果:Percoll和上游两种方法优选后精子顶体完整率均明显高于优选前(P<0.05),两种优选方法间顶体完整率比较差异无显著性(P>0.05)。冷冻后与冷冻前顶体完整率比较差异无显著性(P>0.05),甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)和甘油两种冷冻保护剂对顶体完整率的影响差异无显著性(P>0.05),速冻和缓慢冷冻对精子顶体完整率的影响差异亦无显著性(P>0.05)。结论:Percoll和上游法优选后精子顶体完整率较优选前明显改善。冷冻过程对顶体完整率无明显影响,速、缓冷冻方法和冷冻保护剂类型对顶体完整率亦无明显影响。

应用DGC结合MACS技术优选精子的效果评价

目的:评价密度梯度离心(DGC)结合磁性活性细胞分选法(MACS)优选精子质量的效果。方法:应用DGC结合MACS技术优选精液标本40份,比较优选前、DGC优选及DGC结合MACS技术优选后精子活率、前向精子活动力、正常形态百分率、DNA损伤的变化。结果:DGC结合MACS技术优选后,精子活率、前向活动力及DNA完整性较优选前原液及单用DGC法优选均明显提高(P<0.01)。结论:DGC结合MACS技术可以优选出精子活率、活动力、形态较好而DNA结构受损比例较小的精子群体,可作为一种优良的精子优选方法。

微流控芯片上的精子自然优选

目的在微流控芯片上模拟精子与宫颈粘液相互作用过程,发展一种接近生理状态的精子优选方法。方法按功能构建微流控芯片,使精子在灌注有宫颈粘液的通道中运行。同时在芯片上集成在线精子检测池,对精子的各项参数进行在线测定。用微流控芯片法和常规上游法对照分析35例标本并比较分选效果。结果芯片法和上游法分选都可以显著改善精子的质量(P<0.01)。实验对两种方法分选后精子的各项参数进行了比较。与上游法相比,芯片法分选精子在精子活力(93.41±6.02%vs70.66±10.81%)、正常形态百分率为(22.28±7.42%vs15.05±6.57%)、平均轨迹速度(41.81±15.87μm/svs34.58±6.15μm/s)、前向性比例(85.02±12.18%vs70.85± 9.03%)等方面均具有显著性差异(P<0.01),而两种方法分选获得的精子在直线运动速度(35.08±16.32μm/svs23.18±5.75μm/s)比较中没有显著差异(P>0.05)。结论本研究在微流控芯片上实现了精子的自然优选。这种基于芯片的精子分选方法可以显著改善精子质量。与传统上游法相比,芯片法精子分选在多项参数上均具有优势。

胞浆内形态学筛选精子注射(IMSI)技术与精子优选

多种研究表明严重头部形态异常精子与受精率、着床率和妊娠率低紧密相关。选择形态优良精子用于辅助生殖治疗是提高其临床结局的有效方式。经低放大倍率光学显微镜(×200)所选出的正常精子会包含一些细微结构缺陷,其用于卵胞浆单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI),有时会导致受精失败或胚胎发育停滞。胞浆内形态学筛选精子注射(Intracytoplasmic morphologically selected sperm injection,IMSI)技术是ICSI与运动精子细胞器形态学检查(Motile sperm organelles morphology examination,MSOME)技术的完美结合,IMSI配备了微分干涉相差显微观测与数位成像技术,使其可在高放大倍率下(×6 600)对运动的活体精子进行形态质量评价,选择头部无/少空泡精子用于显微注射,从而提高受精率、着床率和妊娠率以及降低流产率。本文主要综述了IMSI技术的发展及其在精子优选方面的应用并对IMSI临床结局进行分析,为其应用拓展及进一步功能开发提供理论指导。

两种精子优选法对精子运动参数、活率影响

目的 评价Percoll密度梯度法和上游法两种精子分离方法对精子运动参数和活率影响。方法 应用计算机精液分析仪进行精子运动参数分析 ,伊红 Y染色分析精子活率。结果 Percoll和上游两种方法优选后精子运动能力和活率均明显高于优选前 (P <0 0 0 1)。结论 Percoll和上游法优选后精子运动能力和活率增加。

基于微流控芯片模拟生理状况下精子自然优选研究

目的:在微流控芯片上模拟生理状态下的精子与宫颈粘液相互作用过程,寻找一种自然的接近生理状态的精子优选方法。方法:按功能构建微流控芯片,基于精子与宫颈粘液相互作用在芯片通道中模拟生理状态下的精子自然优选过程,进而实现对精子的优选,同时在芯片上集成实时精子检测池,通过计算机辅助精子分析系统(CASA)实时对精子的各项参数进行测定。本研究用微流控芯片法和常规上游法同时分析30例标本,并与分选前比较。结果:分选前a+b级精子百分率为(29.78±11.24)%、正常形态精子百分率为(8.00±5.19)%、直线速度(VSL)为(18.89±4.90)μm/s、平均路径速度(VAP)为(26.84±5.13)μm/s、前向性(STR)为(70.15±7.61)%。常规上游法分选后各项参数相应为(71.65±11.18)%、(14.95±6.79)%、(24.14±5.95)μm/s、(32.61±6.36)μm/s、(73.87±9.34)%。微流控芯片分选后各项参数相应为(92.37±6.33)%、(23.33±7.67)%、(34.03±16.78)μm/s、(38.73±16.40)μm/s、(84.91±12.56)%。芯片法与分选前比较,各参数差异有统计学意义(P均<0.01);与上游法比较,各参数差异亦有统计学意义(P均<0.05)。结论:本研究在微流控芯片上模拟生理状态下精子与宫颈粘液的相互作用过程,实现了对精子的自然优选和实时检测。优选出的精子质量较分选前及上游法都有明显提高,为芯片上实现模拟生理状态下的受精过程奠定了基础。

水溶性维生素E在精子优选过程中对精子质量的影响研究

目的研究水溶性维生素E在精子优选过程中对精子质量的影响。方法选取2017年1月至2018年1月在我院接受不育治疗的40例男性患者的新鲜精液,将每例精液均分为4份,每份各包括40例精液,每2份为一组,共分为对照组和实验组两个组别。对照组中的2份精液分别按照上游法、密度梯度法进行精子分离,实验组中的2份精液采用与对照组相同的分离方法,并在此基础上各向其中加入水溶性维生素E(浓度为30-240μmol·L^(-1)),通过对比两组精子在分离后0 h和24 h的前向运动精子率、活动精子率,以及获能0 h和2 h后酪氨酸磷酸化水平,从而对分离效果进行有效评价。结果实验组精子在分离后0 h、24 h的前向运动精子率、活动精子率均优于对照组,实验组获能0 h和2 h后酪氨酸磷酸化水平均显著优于对照组(P<0.05)。结论在精子优选分离的过程中,向其中加入水溶性维生素E,可以有效改善分离后的精子质量,因此,值得推广。

微流控技术在精子优选及体外受精中的应用

由于传统辅助生殖技术(ART)成功率低,人们在不断追求探索新的技术。大量研究表明微流控技术具有革新传统体外受精(IVF)操作流程的潜能。与传统方法相比,微流控技术应用于精子优选及体外受精具有效率高、时间短、无离心损伤、实时观察筛选效果、微环境相似及自动化等显著优点,为ART提供了新平台。笔者综述了近年来微流控技术在精子活力评价与筛选、精子化学趋向性筛选、体外受精、精子浓度检测、精子分离富集等方面的应用。同时,本文简要讨论了微流控平台原理﹑结构设计及操作流程,聚焦各种方法的优缺点以及临床应用的可能性。可见微流控技术应用于ART仍有一些问题亟待解决,有理由相信其未来发展方向是通过制作高度集成化的平台即体外受精-芯片实验室(IVF-lab-on-a-chip)来实现。

辅助生殖中的精子优选研究进展

精子优选是辅助生殖技术中的重要环节。精子活力和形态等常规参数是评估精子的重要内容,近年来精子超微结构、DNA完整性、凋亡和膜成熟度等特征逐渐受到关注,针对这些特征筛选精子成为精子优选技术发展的方向。本文介绍了近年来发展起来的电泳法、电动电位法、透明质酸结合法、膜联蛋白V选择法、形态选择性单精子注射技术(IMSI)和微流控芯片法的技术原理,除微流控芯片法外其它技术均已应用于IVF或ICSI治疗中,同时对各种技术的优缺点和应用效果等方面做一综述。

四种精液处理方法优选冷冻精子的比较

目的 探讨洗涤法(SW)、密度梯度离心法(DGC)、上游法(SU)、磁性活性细胞分选法(MACS)对冷冻精液的优选效果,为供精人工授精(AID)和供精体外受精(IVF-D)提供可靠的数据。方法 门诊收集健康男性精液,制备冷冻精液。冷冻精液复苏后,根据优选处理方法不同分为4组:SW组、DGC组、SU组和MACS组,每组样本各20例。比较分析各组优选前后精子浓度、前向运动精子活率、膜完整性、正常形态率及DNA碎片率等的差异。结果 SW组,处理前后前向运动精子活率、精子膜完整性、正常形态率及DNA完整率,均无显著性差异(P>0.05);DGC和SU组中,优选后前向运动精子活率[分别为(78.19±12.13)vs.(34.17±8.61)、(82.20±7.17)vs.(42.86±16.38)]、精子膜完整率[分别为(84.62±5.84)vs.(68.17±6.74)、(81.44±4.47)vs.(65.19±6.15)]、正常形态率[(20.42±4.63)vs.(12.16±5.75)、(25.02±4.61)vs.(10.24±5.37)]及DNA完整率[(86.73±7.07)vs.(67.98±6.45)、(88.49±3.09)vs.(67.44±5.89)]均显著高于同组优选前(P<0.05);MACS组中,优选后冷冻精子的膜完整性[(84.00±5.33)vs.(69.21±7.79)]、正常形态率[(13.72±4.58)vs.(7.90±3.80)]及DNA完整率[(91.95±2.82)vs.(69.79±3.90)]亦显著高于优选前(P<0.05),但前向运动精子活率没有显著改善(P>0.05)。结论 四种方法在处理冷冻精子方面各有优缺点,临床可以根据精液标本的质量或者对于精液制备液的要求来选择不同的精子优化方法。MACS可以较好地优化DNA完整率,其在辅助生殖领域的应用具有一定前景。

精子综合优选法配合宫腔内联合宫颈管内人工授精疗效分析

目的探讨运用综合方法优选精子,并采用宫腔内联合宫颈管内人工授精,对不育患者的临床治疗效果。方法选取2005年1月至2009年12月期间在本院进行夫精人工授精(AIH)治疗的患者276例,共治疗565周期,随机分为对照组(n=138)和治疗组(n=138)。对照组采用直接或洗涤1次后上游法优选的精子用于官腔内人工授精280周期;治疗组综合采用直接或洗涤1次后上游法优选的精子,用于官腔内人工授精,将上游后剩留下的精液,用直接离心法优选得到的精子用于宫颈管内人工授精285周期,观察两组的治疗成功率。结果对照组妊娠42例,妊娠率30.43%,治疗周期妊娠率15.00%;治疗组妊娠73例,妊娠率52.89%,治疗周期妊娠率25.61%,两组的妊娠率及周期妊娠率比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论本院采用的改良AIH是一种高效、安全的人工授精方法。