传代培养角膜细胞的染色体遗传变异率分析

目的 分析传代培养角膜细胞染色体数目的变异率。方法 选择人角膜上皮细胞（HCE）、牛角膜内皮细胞（BCE）和兔角膜上皮细胞（RCE）细胞，采用直接法制备传代细胞染色体标本，常规Giemsa染色，1000倍光学显微镜下计数分裂相染色体数目，进行核型分析，统计染色体数目变异情况。结果 HCE染色体众数为56—65，为超二倍体；BCE染色体众数为27～34，为亚二倍体；RCE染色体众数为74～88，为超二倍体。与起源细胞相比，以上3种传代细胞染色体数目均发生了改变。结论 该项核型分析为HCE、BCE和RCE的功能研究提供了重要的参考信息。

大鼠大脑皮层星形胶质细胞的传代培养

目的 :获得纯度较高的星形胶质细胞材料用于进一步实验。方法 :采用大鼠神经胶质细胞的原代培养和传代培养方法。取生后 2 4h以内Wistar大鼠脑皮层 ,用机械法和胰蛋白酶消化法分散细胞 ,制成细胞悬液 ,接种于无底物黏附培养瓶中 ,置 37°C ,5 %CO2 培养箱中培养。培养液为DMEM F1 2 混合培养液。待细胞铺满瓶底后传代 ,并对传代细胞进行形态观察、吖啶橙荧光染色和星形胶质细胞的免疫细胞化学鉴定。结果 :通过传代得到了形态典型含量较高的星形胶质细胞。结论 :在无底物黏附培养的条件下 ,星形胶质细胞在体外能够得到良好的生长 。

比较几种药物吸收成分对大鼠二倍体成纤维细胞生长和传代的影响

采用ＳＤ种大鼠对几种药物的吸收成分作大鼠（胎）皮肤二倍体成纤维细胞体外培养。通过比较观察到中药延寿方、维生素Ｅ、还精煎能较明显地促进细胞增殖和增加传代数，从而推测以上药物具有延缓细胞衰老的作用。

人牙周膜成纤维细胞的培养及牵张应变诱导凋亡研究

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞的分离、培养及在牵张应变作用下发生早期凋亡的情况。方法:刮取健康人前磨牙牙周膜,进行牙周膜成纤维细胞的分离、培养及生长曲线描绘。经3～4代传代培养后,对细胞加载1%～20%的牵张应变,加载时间分别为30min,1h、6h、12h然后通过流式细胞仪检测Annexin V-FITC(异硫氰酸荧光素)及激光扫描共聚焦显微镜进行细胞的早期凋亡鉴定。结果:人牙周膜成纤维细胞传代到12代以后,细胞逐渐呈衰老生状,胞体变大,细胞生长缓慢。人牙周膜成纤维细胞的凋亡率在30min组低于对照组,但两者间无统计学差异。在6h内,人牙周膜成纤维细胞的凋亡情况随加载时间和加载应力的增加而增加(P<0.05)。在12h时所有组的细胞凋亡均减少。结论:人牙周膜成纤维细胞的使用最好在12代以内,尤其是3～4代细胞的活力、增殖能力较好。牵张应变可以诱导细胞发生早期凋亡。

“克疣灵”对人包皮表皮细胞和尖锐湿疣疣体组织细胞增殖影响的实验研究

目的 :探讨中药“克疣灵”治疗尖锐湿疣 (CA)的作用机制。 方法 :采用细胞原代与传代培养技术、MTT比色法测定人包皮表皮细胞、CA细胞的增殖程度 ,不同浓度“克疣灵”对人包皮表皮细胞、CA细胞增殖的影响。 结果 :吸光度值 (A值 )与人包皮表皮细胞、CA细胞数量呈正相关 (人包皮细胞组r=0 .985 0 ,CA细胞组r =0 .9892 ,P均 <0 .0 0 1) ,“克疣灵”对人包皮表皮细胞增殖生长无影响 ,而对CA细胞增殖具有显著的抑制作用 ,“克疣灵”浓度与CA细胞增殖率呈显著负相关 (r =- 0 .4 12 4 ,P <0 .0 1)。 结论 :“克疣灵”能显著抑制CA细胞的增殖生长 ,而不影响机体正常表皮细胞生长。提示“克疣灵”可能具有抗人乳头瘤病毒作用。

采用HaCaT细胞培养沙眼衣原体

目的探讨新的培养沙眼衣原体的细胞。方法借鉴McCoy细胞培养沙眼衣原体的方法，将E型标准株和临床标本接种于HaCaT细胞，分别用碘染、单克隆荧光抗体检测、PCR扩增沙眼衣原体内源性质粒的方法检测沙眼衣原体是否可以在体外感染HaCaT细胞。用HaCaT细胞传代培养沙眼衣原体E型标准株5代，分别计数5次传代的包涵体数，并用SPSSl7软件进行单因素方差分析，以确定沙眼衣原体在HaCaT细胞中是否增殖。结果碘染后可见HaCaT细胞胞质内有典型的包涵体。单克隆荧光抗体检测，在荧光显微镜下可见HaCaT细胞内有黄色荧光颗粒。PCR扩增HaCaT细胞内沙眼衣原体内源性质粒为阳性。沙眼衣原体E型标准株在HaCaT细胞内经传代5次，包涵体数逐渐增加。结论HaCaT细胞在体外培养沙眼衣原体成功，且沙眼衣原体E型标准株在HaCaT细胞中可以增殖。

猪流行性腹泻病毒GD-A株的分离鉴定及S基因序列分析

【目的】在广东省某疑似发生猪流行性腹泻的猪场中,采集病猪的粪便样品,经RT-PCR检测阳性的样品接种于Vero细胞,以分离猪流行性腹泻病毒.【方法】通过在细胞上的连续传代,直至能稳定增殖.并通过RT-PCR对细胞培养物进行特异性片段的检测,观察细胞病变(CPE)的发生情况,以及间接免疫荧光(IFA)检测猪流行性腹泻病毒的M蛋白,对病毒进行分离与鉴定.【结果和结论】病毒在盲传5代时能观察到典型病变,传至20代时能在Vero细胞上增殖稳定.RT-PCR、CPE与IFA的结果证明,所分离到的病毒为PEDV,并命名为GD-A株.

人脐带间充质干细胞向神经细胞分化的研究

目的研究人脐带分离的间充质干细胞向神经细胞分化的可能性.方法将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养,得到贴壁细胞;经传代培养、细胞周期分析、流式细胞检测后,再以不同方案诱导向其神经细胞分化,并以免疫荧光和RT-PCR方法进行鉴定.结果培养5-7d后,有细胞从组织块中游出.细胞传代培养达23代后无明显的形态和增殖能力改变.细胞周期分析表明80%以上的细胞都处于G0～G1期.流式细胞检测表明这些细胞表达CD13、CD29、CD44、CD90、CD105和CD166等MSCs标志物.经神经分化诱导后,部分细胞呈现出与神经元或神经胶质细胞类似的形态;免疫荧光检测表明,第二神经分化诱导方案优于第一方案,其NSE和MBP阳性细胞分别达80.8%±3.9%、4.2%±1.3%,但未能见到GFAP阳性细胞.RT-PCR进一步证实了这些神经标志物的表达.结论人脐带间充质干细胞具有向神经细胞分化的潜能,可作为神经系统疾病细胞移植治疗的备选来源.

IL-6促进骨髓源性神经干细胞增殖的实验研究

目的研究白细胞介素6(IL-6)及其受体对体外培养的大鼠骨髓源性神经干细胞增殖的影响及信号转导机制。方法采用密度梯度离心法分离骨髓基质细胞,应用特制的神经干细胞培养基诱导培养6d后收集贴壁细胞传代培养,用AlamarBlue摄入法检测不同浓度的IL-6及IL-6受体对大鼠骨髓源性神经干细胞增殖的影响,Westernblot方法检测不同剂量IL-6对干细胞中STAT3表达的影响。结果IL-6能够促进干细胞的增殖,随着药物剂量的增加,增殖作用明显增加,呈明显剂量依赖性,其中20、100、200ng/mL组均与对照组有显著差异(P<0.01),但2ng/mL与对照组、100ng/mL与200ng/mL组之间无显著差异(P>0.05),20ng/mL与100ng/mL组之间有差异(P<0.05)。IL-6受体可抑制干细胞的增殖,单独应用IL-6受体,100ng/mL、200ng/mL组与对照组均有显著差异(P<0.05)。而IL-6与IL-6受体联合应用可促进干细胞的增殖,但增殖作用比单独应用IL-6组差,两组相比有显著性差异(P<0.05)。随IL-6浓度的增加,干细胞中的STAT3表达增加,20、100、200ng/mL组与对照组相差显著(P<0.01)。结论100ng/mL组的IL-6对骨髓源性神经干细胞有较好的增殖促进作用;IL-6受体可抑制骨髓源性神经干细胞增殖;联合应用IL-6和IL-6受体增殖效果不如单独应用IL-6,提示骨髓源性神经干细胞表面自身具有IL-6受体;IL-6通过增加STAT3表达促进骨髓源性神经干细胞增殖。