猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫猪的攻毒保护试验

为进一步证明猪瘟活疫苗(传代细胞源)在猪场实际使用的免疫效力,本试验将中试生产的5批疫苗在广东的广州、韶关地区各选一个猪场进行临床应用试验。按照20日龄首免,60日龄二免的免疫程序,并分别于二免后第28天和第90天从5批疫苗免疫猪中各抽取5头,连同条件相同的对照猪各5头,在广东永顺生物制药股份有限公司负压动物舍进行猪瘟强毒攻击,观察发病死亡情况,评估猪瘟活疫苗(传代细胞源)在猪场实际应用的免疫保护效果。试验结果显示,5批疫苗免疫猪均能有效抵抗猪瘟强毒的攻击,既无死亡,也无猪瘟临床症状。表明在临床条件下应用猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫猪能产生很好的免疫保护力。

猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫产生期和免疫持续期试验

将三批猪瘟活疫苗(传代细胞源)以单剂量分别接种仔猪进行免疫产生期试验。在免疫同时以及免后1、2、3、4、5日连同对照组分别攻击猪瘟强毒,攻毒后观察16天,结果表明,猪瘟活疫苗(传代细胞源)免后4日即可产生坚强的免疫保护力。将三批猪瘟活疫苗(传代细胞源)以单剂量分别接种仔猪进行免疫持续期试验。在免后3个月、6个月、9个月、12个月、15个月连同对照组分别攻击猪瘟强毒,攻毒后观察16天,结果表明,猪瘟活疫苗(传代细胞源)的免疫持续期可长达15个月。

ST传代细胞源猪伪狂犬病毒活疫苗(Bartha-K61株)超剂量免疫的安全性实验

ST传代细胞生产3批次伪狂犬病毒活疫苗(Bartha-K61株)中试产品,检验合格后对20~25日龄、50~55日龄健康猪以及妊娠后期的母猪,分别采用耳后颈部肌肉注射方式进行超剂量免疫接种,同时设立相应对照组。超剂量免疫后各组猪只精神、食欲、体温、生产状况等经持续观察记录,均表现为正常。结果表明,ST传代细胞生产猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)对不同日龄猪和妊娠后期母猪进行超剂量免疫接种均是安全的。

猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)的免疫程序研究

研制了三批猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源),采用对3~4周龄仔猪首免、一个月后加强免疫1次,妊娠母猪于分娩前3~4周进行一次免疫的免疫程序进行疫苗接种,并在免疫前和免疫后定期采血检测PRV抗体。结果表明:免疫前PRV母源抗体为阴性的仔猪在首免后7日PRV抗体检测为阳性,21日达到高峰,并在首免后130日PRV抗体仍维持在一个较高水平;免疫前PRV母源抗体检测为阳性的仔猪,在首免后3日和7日时PRV抗体略有下降,但随后上升并在首免后21日达到高峰,直至首免后130日仍为PRV抗体阳性;免疫前PRV抗体为阴性的妊娠母猪,在免疫后3日和7日PRV抗体有一定上升,免疫后14日达到较为理想水平,并于分娩前达到高峰,产仔数也较为理想;免疫前PRV抗体为阳性的妊娠母猪,在免疫后3日和7日PRV抗体水平稍有下降,但随后上升,并在分娩前达到高峰,产仔数也较为理想。综上结果表明,此免疫程序较为适合仔猪和妊娠母猪的免疫。

我国猪瘟流行新特点与疫苗免疫研究

对我国的猪瘟流行的新特点进行了描述,详细分析了造成猪瘟疫苗免疫失败的6大原因,并且对疫苗的发展历史和研究进展进行了详细介绍,提出了猪瘟防控的两个关键环节为种猪群野毒感染的控制及有效的免疫接种。

猪伪狂犬病活疫苗Bartha-K61株对流行毒株的免疫效力研究

本研究通过对不同的免疫剂量免疫仔猪和母猪免疫后所产仔猪进行攻毒,以评估该疫苗对伪狂犬病毒(PRV)流行强毒株的保护效果。取3~4周龄PRV抗体阴性仔猪,以106.0组织半数感染量(TCID50)、106.5TCID50、107.0TCID50剂量接种猪PRV活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源),免后10d连同条件的对照组和母源抗体阳性组用PRV流行强毒(GD株)攻毒,检测免疫后的抗体水平,记录攻毒后的体温、临床症状和病理变化。结果显示:免疫组试验猪在免后7dPRVgB抗体均转阳;各种剂量免疫组和母源抗体阳性组试验猪在PRV流行强毒攻击后,均未出现临床症状和病理变化,而对照组则出现明显的神经症状,体温升高,发病率100%(5/5),死亡率80%(4/5),剖检可见肝脏有白色坏死点和脑充血水肿。研究表明高病毒滴度的猪伪狂犬病活疫苗(BarthaK61株,传代细胞源)免疫猪后可对PRV流行强毒株提供良好的免疫保护。

间接免疫荧光检测猪瘟活疫苗效价方法的建立

为了寻找到猪瘟活疫苗(传代细胞源)效力检验的实验室替代方法,本研究将检验合格的疫苗按头份用专用稀释液10倍梯度稀释后,接种至长满猪睾丸细胞(ST细胞)单层的细胞板上,以猪瘟阳性血清为一抗、山羊抗猪IgG(FITC标记)为二抗,通过反应体系条件的优化,确定病毒接种细胞后培养72 h,一抗和二抗的稀释度为1∶400倍,建立了猪瘟活疫苗(传代细胞源)成品苗的间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)检测方法;此方法敏感性、特异性和重复性良好。用建立的IFA方法检测10批次猪瘟活疫苗(传代细胞源)试验苗,结果为:104.67~105.33TCID50/头份。该方法的建立可为猪瘟活疫苗(传代细胞源)的质量控制提供技术支持和检验参考。