内皮素1调控P19细胞向心脏传导细胞分化的机制

背景:内皮素1作为一种来源于心内膜和动脉血管内皮的旁分泌信号,能够诱导心脏传导细胞的分化成熟。目的:探讨内皮素1在体外诱导P19细胞向心脏传导细胞分化的作用。方法:P19细胞分别与1%二甲基亚砜和100 nmol/L浓度内皮素1孵育,通过Western blot、免疫荧光和qR T-PCR鉴定早期心肌细胞特征性转录因子GATA4、MEF2C和心肌细胞分化标志物MHC-α、cTnT,以及重要的传导细胞转录因子Nkx2.5、Tbx5和分化标志物Cx40、ANP的变化。qRT-PCR鉴定内皮素1特异性受体阻断剂和阻断PI3K-AKT-mTOR信号通路对内皮素1诱导P19细胞分化的影响。结果与结论:(1)内皮素1能够上调P19细胞早期心肌转录因子、心肌结构基因和传导系统特征表型表达;(2)与二甲基亚砜相比,内皮素1能够确实诱导P19细胞向心脏传导细胞分化;(3)内皮素1主要通过ETA通路上调Nkx2.5和Cx40表达水平从而诱导P19细胞向传导细胞分化,ETB通路可能还参与了一条负反馈调节通路;(4)内皮素1能够通过PI3K-AKT-mT OR信号通路调控Nkx2.5表达进而影响传导细胞分化。

let-7a靶向细胞因子信号传导抑制物1调控头颈部鳞状细胞癌免疫逃逸的作用机制研究

目的:研究微小RNA亚型let-7a靶向细胞因子信号传导抑制物1(SOCS1)调控头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)免疫逃逸的作用及机制。方法:常规培养人SCCHN细胞株舌鳞癌细胞(SCC25),采用双荧光素酶报告基因系统检测SOCS1是否为let-7a的作用靶点。将let-7a模拟物及阴性对照序列、抑制物及阴性对照分别转染人SCCHN细胞株SCC25,并将其分为空白对照组、let-7amimic组、mimic-NC组、let-7ainhibitor组和inhibitor-NC组。采用蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组SOCS1和细胞程序性死亡-1(PD-1)及程序性死亡配体1(PD-L1)的蛋白相对表达量,实时荧光定量聚合酶链反应(rt-qPCR)检测各组let-7a、SOCS1与PD-1、PD-L1的mRNA相对表达量;转染48 h后,采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡。T细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)分别与SCCHN细胞进行共培养,采用流式细胞术检测共培养组T细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)数目。结果:双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,转染野生型载体的细胞荧光素酶活性均下调(F=26.566,P<0.05),提示let-7a可靶向结合SOCS13′UTR序列。Westernblot结果显示,空白对照组SOCS1蛋白相对表达量高于let-7amimic组;人SCCHN细胞转染48 h后,let-7amimic组SOCS1、PD-1及PD-L1蛋白相对表达量最低,与各干预组差异有统计学意义(t=6.427,t=7.102,t=5.287;P<0.05),let-7ainhibitor组SOCS1、PD-1及PD-L1蛋白相对表达量最高,与各干预组差异有统计学意义(t=6.357,t=9.647,t=7.256;P<0.05)。rt-qPCR结果显示,人SCCHN细胞转染48 h后,let-7amimic组let-7amRNA相对表达量最高,与各干预组差异具有统计学意义(t=10.254,t=7.452,t=6.328;P<0.05),let-7ainhibitor组let-7amRNA相对表达量最低,与各干预组差异有统计学意义(t=6.257;t=6.901,t=5.287;P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与空白对照组比较,let-7amimic组SCCHN细胞处于G0/G_(1)期的比例明显降低(t=5.286,P<0.05),处于S期的细胞比例相对增高,而let-7ainhibitor组CCHN细胞处于G0/G_(1)期的比例明显升高,差异有统计学意义(t=9.614,P<0.05),处于S期的细胞比例相对降低;let-7amimic组SCCHN细胞凋亡率明显高于其他干预组(t=11.257,t=8.617,t=9.627;P<0.05);SCCHN细胞转染48 h后,let-7amimic组CD4^(+)、CD4^(+)与CD8^(+)比值(CD4^(+)/CD8^(+))水平最高,与其他4组比较差异有统计学意义(tCD4^(+)=9.257,t=8.654,t=6.647,t=7.152;tCD4^(+)/CD8^(+)=4.251,t=4.652,t=5.921,t=4.275;P<0.05);let-7ainhibitor组CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)水平最低,与其他4组比较差异有统计学意义(tCD4^(+)=4.357,t=5.267,t=5.267,t=5.415;t_(CD4^(+)/CD8^(+))=4.675,t=4.592,t=4.627,t=4.159;P<0.05)。结论:let-7a过表达可能通过抑制PD-1及PD-1L信号通路而参与SCCHN细胞免疫逃逸,其机制可能与靶向调控SOCS1有关。

CD48在溃疡性结肠炎小鼠肠道免疫细胞中的表达及意义

目的探讨信号传导淋巴细胞活化分子家族2(signaltransduction lymphocyte activation molecule family 2,SLAMF2/CD48)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道免疫细胞中的表达及意义。方法选择6~8周龄的C57BL/6J雄性小鼠5只,分离其结肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)及固有层淋巴细胞(lamina propria lymphocytes,LPLs),提取细胞总RNA,RT-PCR、RT-qPCR和流式细胞术检测不同细胞中CD48的表达情况。将10只6~8周龄的C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和UC组,每组5只。UC组小鼠以含2.5%DSS的饮用水喂养5 d诱导急性UC模型,对照组小鼠以正常饮用水喂养;采用流式细胞术检测小鼠结肠上皮细胞中EPCAM^(+)上皮细胞及CD45^(+)免疫细胞中CD48的表达及两组小鼠结肠LPLs中CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞及CD19^(+)B淋巴细胞和CD11b^(+)Ly6G^(+)中性粒细胞、CD11b^(+)F4/80^(+)巨噬细胞及CD11c^(+)MHCⅡ^(+)树突状细胞中CD48的表达情况。结果CD48在C57BL/6J雄性小鼠结肠LPLs中的表达高于IECs(P<0.001)。在结肠IECs内,CD45^(+)免疫细胞中CD48的表达高于EPCAM^(+)上皮细胞。与对照组相比,UC组CD11b^(+)F4/80^(+)巨噬细胞中CD48的表达降低(P=0.0065)。结论CD48在结肠免疫细胞中的表达高于上皮细胞,说明CD48可能通过免疫细胞而不是上皮细胞参与UC的发生发展过程。进一步研究发现,DSS诱导UC模型后,CD48在巨噬细胞中的表达下降,提示其可能通过巨噬细胞在急性UC的发生发展中发挥了一定作用。

蛋白质S-棕榈酰化在T细胞信号传导中的研究进展

蛋白质S-棕榈酰化是一种高度动态的翻译后脂质化修饰,由DHHC蛋白家族催化,在调节蛋白质定位、稳定性和细胞内转运等方面发挥重要作用。近年来,随着T细胞免疫疗法的兴起,对于T细胞信号通路的研究也愈发深入。大量证据表明,T细胞活化过程中,有很多关键信号分子是S-棕榈酰化的,它们的稳定表达和质膜定位对于免疫信号的传递是必需的。因此,本文总结了DHHC蛋白家族和蛋白质S-棕榈酰化的机制,并基于S-棕榈酰化在T细胞信号传导中的不同作用,分析了靶向S-棕榈酰化治疗免疫疾病的潜力和挑战。

低温保存皮肤的细胞骨架在细胞力传导中的作用

细胞骨架是细胞质内由微丝、微管、中间丝和一些辅助蛋白组成的蛋白细丝网状结构,它决定和维持细胞的形态。皮肤在低温保存时组织细胞体积发生较大变化,因此产生较为明显而且复杂的力学影响,由于细胞骨架的存在,使其没有足够的顺应性而受损。细胞骨架是组织细胞低温损伤的重要因素,研究低温保存时细胞骨架在细胞力传导中的作用对于提高皮肤低温保存效果意义重大。

米诺环素联合维他派克斯对慢性根尖周炎伴牙髓病患者的临床疗效及细胞因子的影响

目的研究米诺环素联合维他派克斯(vitapex)对慢性根尖周炎伴牙髓病患者的临床疗效及细胞因子的影响。方法112例慢性根尖周炎伴牙髓病患者随机均分为对照组(n=56,常规根管治疗)和观察组(n=56,对照组基础上采用米诺环素联合Vitapex治疗),治疗4周并随访8周,收集2组患者一般临床资料,比较2组患者治疗第4周的临床疗效;采用视觉模拟评分法(VAS)、口腔健康影响程度量表中文版(OHIP-14)评分评估2组患者治疗前及治疗第1、4、8周的口腔疼痛程度及口腔健康影响程度;采用牙周探针检测2组患者治疗前及治疗第4周的牙周指数[包括菌斑指数(PLI)、出血指数(BI)、牙周袋探诊深度(PD)及牙龈指数(GI)];取2组患者治疗前及治疗第4周患牙不可治愈的根尖周组织,采用免疫荧光双染法检测根尖周肉芽组织中Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)及细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)的表达;取2组患者治疗前及治疗第4周的龈沟液,采用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-17及IL-23的水平。结果2组患者一般情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05);对照组患者治疗总有效率高于对照组(P<0.05);2组患者治疗第1、4、8周VAS评分较治疗前下降(P<0.05),观察组低于对照组且下降幅度更明显(P<0.001);2组患者治疗第1、4、8周OHIP-14评分较治疗前下降(P<0.05),观察组治疗后第4、8周低于对照组且下降幅度更明显(P<0.001);2组患者治疗第4周PLI、BI、PD、GI较治疗前明显下降(P<0.001),且观察组低于对照组(P<0.05);2组患者治疗第4周根尖周肉芽组织中JAK2、STAT3、SOCS3阳性细胞表达较治疗前明显下降(P<0.001),且观察组低于对照组(P<0.05);2组患者治疗第4周龈沟液中TNF-α、IL-1β、IL-17及IL-23水平较治疗前明显下降(P<0.001),且观察组低于对照组(P<0.05)。结论米诺环素联合Vitapex治疗慢性根尖周炎伴牙髓病患者有较好的临床疗效,可降低患者口腔疼痛感及口腔健康影响程度,改善牙周指数和JAK2、STAT3、SOCS3的表达及牙周炎症反应。

整合素和细胞骨架在细胞力传导中的作用

整合素和细胞骨架在力信号转化为细胞内生化信号 ,进而引发相应的生理或病理反应中起着重要作用。同时 ,细胞外基质 (ECM ) -整合素 -细胞骨架 (CSK)轴系统与膜离子通道。

椎间盘细胞信号传导及益气化瘀方调控机理的研究

目的:观察益气化瘀方对大鼠退变颈椎间盘细胞信号和传递蛋白类基因表达的影响。方法:建立动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型,从正常组、退变模型组和益气化瘀方组大鼠颈椎间盘中抽提mRNA,经反转录后分别用Cy3、Cy5荧光标记,获得椎间盘cDNA的探针,再与包括细胞信号和传递蛋白类基因的512cDNA基因表达谱芯片杂交,激光扫描仪扫描,进行图像分析、标准化处理、ratio值分析、聚类分析。结果:模型组与对照组比较,5条细胞信号和传递蛋白类基因表达有明显变化,其中下调的有包括PTK在内的4条。益气化瘀方对细胞信号和传递蛋白类基因表达有影响的6条,其中上调的有4条,包括PTK。结论:益气化瘀方参与了椎间盘细胞内细胞信号转导类基因的调控,能够上调PTK,可能参与椎间盘细胞的粘附与凋亡过程。

作用于细胞信号传导通路的抗肿瘤中药研究进展

从有效化学成分的角度分类对作用于肿瘤细胞信号传导通路的中药进行归纳,认为利用现代化手段提取分离得到的中药抗肿瘤活性成分具有广阔的研发前景。

PI3K/AKT/mTOR细胞信号传导通路在细胞调控中的作用

恶性肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病，2012年我国恶性肿瘤的发病率285．91／10万，病死率180．54／10万，大约13％，呈上升趋势。肿瘤的发病机制尚不十分明确，目前肿瘤的分子发病机制多被概括为：由于各种原因导致基因点突变、基因扩增及染色体易位等使原癌基因活化、抑癌基因失活，同时DNA 修复基因亦失活，进而导致相关蛋白合成、信号传导过程及调控等出现障碍，使细胞增殖及凋亡的平衡状态被打破，促进了肿瘤发生发展。近些年来对于PI3K（磷脂酰肌醇3-激酶）／AKT （ v-akt murine thy-moma viral oncogene homolog）／mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）信号传导通路的研究，发现其在各系统肿瘤的发生发展中，包括细胞生存和凋亡、细胞周期调控、肿瘤转移及肿瘤血管生成等，起着重要作用。

异搏定对增殖瘢痕成纤维细胞凋亡及细胞信号传导作用

目的目的探讨异搏定对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及相关的细胞信号传导通路的影响,并与类固醇的作用进行比较。方法对6例瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及6例皮肤标本进行细胞培养,对不同成纤维细胞在不同异搏定浓度的培养基中的生长情况进行观察。采用免疫组织化学、凝胶电泳及FACE ELISA方法,通过检测Bax和Bcl-2蛋白表达、特异性DNA梯状条带以及激活(磷酸化)的ERK1/2和JNK的OD值,对不同成纤维细胞在异搏定(0.1 mg/ml)作用后的细胞凋亡及相关细胞信号传导通路进行了研究,同时,以地塞米松(0.1 mg/ml)作用后的结果为对比。结果①当异搏定浓度为0.1 mg/ml,可诱导瘢痕疙瘩、增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡;②异搏定可引起瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞Bax/Bcl-2比值明显升高,DNA经电泳后可见梯形条带;但不引起皮肤成纤维细胞Bax/Bcl-2表达的改变且未见明显梯形条带;③瘢痕疙瘩成纤维细胞在异搏定作用后JNK细胞传导通路被激活,增生性瘢痕成纤维细胞在异搏定作用后ERK1/2细胞传导通路被抑制而JNK细胞传导通路被激活,皮肤成纤维细胞在异搏定作用后ERK1/2细胞传导通路被激活而JNK细胞传导通路无明显改变。④地塞米松可通过激活ERK1/2和JNK细胞传导通路诱导三类不同来源成纤维细胞发生细胞凋亡。结论异搏定和地塞米松均可诱导增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,但细胞传导通路不尽相同。异搏定和地塞米松对皮肤成纤维细胞作用不同。

细胞因子信号传导抑制蛋白-1减轻细胞因子诱导胰岛β细胞促凋亡基因的表达

目的构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白-1(SOCS-1)蛋白的细胞,探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法克隆大鼠SOCS-1基因,构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中,构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-1β联合IFN-γ、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24 h,RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-γ、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。

PDGF受体酪氨酸激酶介导的细胞信号传导在HSC增殖中的作用

肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活并转化成肌成纤维样细胞(myrofibroblastic-like cell,MFLC)和成纤维细胞(fibroblastic cell,FC)是肝纤维化发生发展的核心环节,其中HSC增殖对肝纤维化形成具有重要意义,一些具有促分裂作用的细胞因子如内皮生长因子、成纤维细胞生长因子、内皮素、胰岛素生长因子、血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)可能起重要作用,而PDGF对HSC的促增殖作用就是通过PDGF受体酪氨酸激酶介导的细胞信号传导作用而实现的.

细胞因子信号传导抑制蛋白-1(SOCS-1)研究进展

细胞因子信号传导抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling,SOCS)家族是一类由细胞产生并反馈性阻断细胞因子信号转导过程的负性调节因子,最先发现的是SOCS-1。SOCS-1可抑制IL-6、LIF、OSM、INF-γ以及GH等多种细胞因子的信号转导,对体内多种免疫反应的激活起调控作用。SOCS-1异常表达与多种疾病的发病相关,在急慢性白血病、类风湿性关节炎、肝硬化和肝癌的发病中起重要作用。本文就SOCS-1与细胞因子的关系及其临床研究进展进行综述。

针灸效应与细胞信息传导关系的初步探讨

通过对针灸效应产生的神经 内分泌机制的分析 ,提出针灸效应的实现与细胞信息传导有密切关系。针灸效应部分是针刺信号由穴位经外周神经向各级中枢神经传递中发生的 ,其中引发了机体神经 内分泌系统功能的活动 ,致使某些生物活性物质被释放出来 ,激活了靶细胞信息传导功能 ,在神经 体液因素作用下 ,将针刺信号的相应信息传递到细胞内 ,产生一系列的生物效应 ,最终实现了针刺对机体各系统功能的调整作用。

应用基因表达谱技术研究人脑动脉瘤细胞信号传导相关基因

应用基因芯片分析人脑动脉瘤基因表达谱 ,分析细胞信号传导相关基因的差异表达。提取 4例人脑动脉瘤标本及作为正常对照的人颅底动脉环标本总RNA、mRNA ,进行线性扩增 ,通过逆转录的方法标记、制成cDNA探针 ,探针与84 6 4点基因表达谱芯片杂交 ,扫描芯片荧光信号图像 ,分析比较差异表达的基因。结果 :在 84 6 4条基因中 ,有 15条细胞信号传导相关基因表达有显著差异 ,其中表达上调 13条 ,表达下调 2条。提示 :差异表达的细胞信号传导相关基因及其参与的病理过程与脑动脉瘤的病理发生有关。

TGF-β家族信号的细胞内传导蛋白:SMAD蛋白家族

SMADs是新近发现的参与TGF β超家族的信号在细胞内传导的一族蛋白 ,包括 8个成员 ,分别称SMAD1～ 8。SMAD1、2、3、5和 8属于一类 ,它们被TGF β的受体或BMP的受体激活而磷酸化 ,称为受体调节SMAD ,传导TGF β或BMP的信号。SMAD6和 7属于另一类 ,它们抑制受体调节SMAD的信号传导。SMAD4是第三类 ,它是受体调节SMAD传导信号的伴侣。受体调节SMAD传导信号必须先与SMAD4结合形成异源复合物 ,才能进到核中 。

苦瓜总皂苷对2型糖尿病肾病大鼠肾脏组织中细胞因子信号传导抑制蛋白1表达影响

目的:观察苦瓜总皂苷对2型糖尿病肾病大鼠肾组织中细胞因子信号传导抑制蛋白1(Suppressor of Cytokine Signaling,SOCS1)表达的影响,探讨其对肾脏的保护作用。方法:雄性SD大鼠(48只)随机分为正常对照组、2型糖尿病肾病模型组以及苦瓜总皂苷治疗组5 mg/(kg·d)治疗,左肾切除+1次大剂量链脲佐菌素腹腔注射建立动物模型,模型建立成功后,正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,苦瓜总皂苷治疗组给予苦瓜总皂苷灌胃,分别于实验第4、8周处死大鼠各半,测血糖、24 h尿蛋白定量以及炎性因子;免疫组化、RT-PCR以及Western Blot检测肾脏组织中SOCS1的变化。结果:治疗组尿蛋白和血清肌酐与模型组相比明显减少,血糖明显升高(P<0.05);治疗组与模型组相比,IL-1α、IL-6和TNF-α明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);HE染色显示正常组肾脏组织结构整齐,纹理清晰,模型组肾小球基底膜增厚同时伴有一定的系膜细胞增生,苦瓜总皂苷可以明显降低肾脏的损害;免疫组化、RT-PCR和Western Blot可见:与模型组相比治疗后,苦瓜总皂苷治疗组大鼠肾脏组织SOCS1表达明显降低(P<0.05)。结论:苦瓜总皂苷可以通过抑制糖尿病肾病大鼠肾组织SOCS1的表达,进而降低炎症反应,改善肾功能,最终调节2型糖尿病肾病的症状,可能有一定的临床应用价值。

细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)作用的研究进展

细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)可以对多种细胞因子和激素(包括LIF,IL-11,生长激素,胰岛素和瘦素)产生的信号传导过程进行负性调节,这些信号传导过程的作用涉及到启动免疫反应,控制炎症过程,调节生长发育以及淋巴细胞的分化等方面。最新研究表明,SOCS-3与中枢神经系统的免疫、炎症反应和人体肥胖等有着重要的联系,本文主要就SOCS-3这两方面的作用作一综述。

磷酸化活化转录因子2和磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3在皮肤恶性黑素瘤中的表达

目的:探讨磷酸化活化转录因子(p-ATF)2和磷酸化细胞信号传导与转录活化因子(p-STAT)3在皮肤恶性黑素瘤中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化方法分别检测p-ATF2和p-STAT3在25例原发性皮肤恶性黑素瘤(CMM)患者和14例转移性恶性黑素瘤(转移性MM)患者组织病理切片中的表达水平。结果:p-ATF2和p-STAT3在25例CMM和14例转移性MM患者组织病理切片中细胞表达阳性率均分别显著高于色素痣中的表达阳性率(P<0.01),但在25例CMM和14例转移性MM之间细胞表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。在25例CMM和14例转移性MM患者组织病理切片中,p-ATF2阳性表达与p-STAT3阳性表达均分别有高度相关性(r分别为0.912和0.934,P均<0.01)。结论:p-ATF2和p-STAT3虽在CMM和转移性MM中高表达,但与皮肤恶性黑素瘤的侵袭和转移无明显相关。