疟疾传播阻断疫苗的研究现状和应用前景

随着疟疾传播阻断疫苗研究的深入开展,有望将疟疾控制在孤立地域内,阻止疟原虫再次引入无疟区,阻断抗药性和突变虫株的蔓延,减少对疟原虫“毒力”株的暴露。近来已鉴定了系列有望的候选传播阻断疫苗分子。本文对疟疾传播阻断疫苗的研究现状和应用前景作一概述。

恶性疟原虫有性期特异抗原Pfs48/45基因的克隆与部分序列分析

目的：构建恶性疟原虫海南ＦＣＣ１／ＨＮ分离株有性期特异抗原Ｐｆｓ４８／４５，为研制恶性疟原虫传播阻断疫苗提供抗原。方法：根据Ｐｆｓ４８／４５基因编码区序列设计引物，用ＰＣＲ扩增ＤＮＡ，并进行序列分析，双酶切后，定向克隆入ｐｃＤＮＡ３载体，转化大肠杆菌ＴＧ１，随机取出氨苄青霉素抗性菌落进行ＰＣＲ扩增，用碱裂解法抽提阳性的重组子ＤＮＡ，双酶切鉴定。结果：特异扩增了编码Ｐｆｓ４８／４５全基因序列（１３６３ｂｐ）；用５端寡核苷酸引物测定了４５０个碱基，结果表明ＦＣＣ１／ＨＮ分离株Ｐｆｓ４８／４５５端基因序列与ＮＦ５４株相应基因基本一致，仅在第３０７（Ｔ→Ｃ）和３７２（Ｔ→Ｃ）位碱基存在置换；第３７２位碱基置换产生新的酶切位点ＴａｑＩ，进一步用ＴａｑＩ消化ＰＣＲ扩增产物，产生两个大小分别为９８４ｂｐ和３７９ｂｐ的酶切片段，测序和酶切结果均证实扩增的目的基因确为Ｐｆｓ４８／４５基因；将纯化的目的基因片段正向插入ｐｃＤＮＡ３质粒的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点。结论：我国海南ＦＣＣ１／ＨＮ分离株Ｐｆｓ４８／４５抗原基因序列与ＮＦ５４株相应基因高度同源；成功构建重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆｓ４８／４５。

恶性疟原虫海南分离株FCC1/HN有性期特异抗原Pfs48/45基因的克隆与表达

采用基因工程技术，将编码恶性疟原虫有性期特异抗原Ｐｆｓ８／４５的基因克隆到真核表达质粒ｐｃＤ－ＮＡ３，并进行ＤＮＡ序列测定，再通过磷酸钙—ＤＮＡ共沉淀转化法将重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｐＦＳ４８／４５导入ＨｅＬａ细胞，建立稳定分泌Ｐｆｓ４８／４５蛋白的阳性克隆株。结果显示，我国海南ＦＣＣ１／ＨＮ株Ｐｆｓ４８／４５抗原基因序列与ＮＦ５４株者高度同源，提示该基因在不同虫株间高度保守，是研制疟疾疫苗的理想靶抗原；在ＨｅＬａ细胞中表达的Ｐｆｓ４８／４５蛋白分子量约为４６／４３．５ｋＤａ双联体蛋白，其表达量占细胞培养上清蛋白总量的１８．２７％。经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析显示，表在蛋白能被配子体免疫鼠血清特异性识别，提示表达的重组蛋白Ｐｆｓ４８／４５具有免疫活性。真核表达系统ｐｃＤＮＡ３／Ｐｆｓ４８／４５／ＨｅＬａ的建立为进一步研究重组Ｐｆｓ４８／４５抗原的免疫原性和保护性奠定基础。

联合免疫阻断HBV母婴传播临床观察

目的探讨重组乙型肝炎疫苗（cHO细胞）与乙型肝炎人免疫球蛋白（HBIG）联合免疫阻断HBV母婴传播的效果。方法比较母亲HBsAg和HBeAg同时阳性（双阳性）的联合免疫儿童和未联合免疫（单用重组乙型肝炎疫苗）儿童的母婴传播的效果。结果联合免疫的儿童HBsAg阳性率显著低于未联合免疫儿童。结论联合免疫组的母婴阻断效果优于未联合免疫组。

恶性疟病人血清抗配子体表面抗原的抗体

30份恶性疟病人血清,其中15份有疟史,1份病史不明,余为初次感染,用间接荧光抗体试验(IFAT)检查配子体抗体,86%初次感染者和93%半免疫者具 IgG 和 IgM 抗体。同48/45kD 传播阻断靶抗原的3个不同决定簇单克隆抗体(单抗)进行 ELISA 竞争测定,约1/3血清50%以上竞争抑制至少2个单抗与抗原的结合。提示疟疾自然感染后可以引起抗体介导抗有性期免疫,这种免疫反应对疟疾在群体中的传播无疑有一定阻断意义。

恶性疟病人血清抗配子体表面抗原的抗体

30份恶性疟病人血清,其中15份有疟史,1份病史不明,余为初次感染,用间接荧光抗体试验(IFAT)检查配子体抗体,86％初次感染者和93％半免疫者具IgG和IgM抗体。同48/45kD传播阻断靶抗原的3个不同抗原决定簇单克隆抗体进行ELISA竞争测定,约1/3血清50％以上竞争抑制至少2个单克隆抗体与抗原的结合。提示疟疾自然感染后可以引起抗体介导抗有性期免疫,这种免疫反应对疟疾在群体中的传播无疑有一定阻断意义。