传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)结构蛋白和S1基因的结构分析

对来自浙江地区的传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株 ( ZJ971株 )的结构蛋白进行了 SDS电泳分析 ,用RT-PCR扩增其 S1基因 c DNA,并作了测序分析。结果显示 ,ZJ971株结构蛋白由 2 1 2 0 0 0、1 4 60 0 0、974 0 0等 8条蛋白带组成 ,与其他传染性支气管炎病毒株相比缺损 1 1 60 0 0蛋白条带 ;S1基因全长为 1 72 0 nt,编码 1条 551个氨基酸组成的多肽 ,其核苷酸与其他传染性支气管炎病毒株的同源性为 99.4 0 %～ 77.85%。ZJ971株不同于其他血清型传染性支气管炎病毒的最显著特征为 :S1基因 1 2 5、1 82、2 77位上的碱基被置换 ,缺失 Fok 、Bb V 、Pflm 、Fnu4 H 4个核酸内切酶位点 ;S1蛋白多肽链 4 1、59、91、1 4 1位点上的氨基酸被置换 ,并在二级结构上出现 4 0～ 50位氨基酸区域的亲水性下降、1 4 0～ 1

传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)基质蛋白、5a、5b蛋白基因的克隆和序列分析

参考 Gen Bank上的传染性支气管炎病毒 (IBV)序列 ,自行设计合成了 3条引物 ,对 IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/ 0 2 ) RNA进行 RT- PCR扩增 ,扩增含基质蛋白 (M)及 5 a、5 b蛋白基因的约 1.6 5 kb的片段 ,对 PCR产物进行克隆后测序。序列分析显示 ,M蛋白基因与其他 IBV相应的基因同源性在 90 .33%～ 92 .75 %之间 ,氨基酸序列比较 ,同源性在 89.82 %～ 94.2 5 %之间 ;5 a基因与其他 IBV的基因同源性在 84.34 %～ 87.37%之间 ,氨基酸同源性在 81%～82 %;5 b基因与其他 IBV的基因同源性在 91%～ 92 %之间 ,氨基酸同源性在 93%左右。

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒强毒株的培育

用腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株 IBV-D971株接种 1日龄 SPF鸡 ,连续传 1 0代后 ,培育出了腺胃病变型鸡传染性支气管炎强毒株 IBV-D971 J株。 IBV-D971 J1 0 对 SPF鸡胚的致病力为 1 0 - 6 .45ELD5 0 /0 .2 m L,对 1日龄 SPF鸡的致病力为 1 0 - 1 .5 LD5 0 /1 m L。从死亡鸡的心、肝、脾、肺、肾、腺胃、肌胃、法氏囊等均能分离到 IBV,IBV-D971 J1 0 不含鸡新城疫、禽流感、鸡马立克氏病、鸡传染性法氏囊炎、网状内皮组织增殖病等外源病毒。对 SPF鸡可引起典型的腺胃炎、肌胃炎。

鸡传染性支气管炎病毒腺胃分离株的分子鉴定

从发病鸡场中收集的腺胃肿大病料(编号为2/97、3/97和1/98),经匀浆和无菌处理后在SPF鸡胚中传代、分离和鉴定。结果显示,接种病料培养的鸡胚可干扰新城疫病毒的复制;这些分离毒株可与阳性标准参考株IBV抗血清反应,但表现出较低的中和反应能力。在理化和血凝特性等鉴定的基础上,参照已发表的IBV Beaudette毒株S1基因序列,设计并合成1对含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的特异性引物,利用RT-PCR技术扩增到分离毒株3/97、2/97、1/98长度为1.93kb的cDNA片段,并将其cDNA片段插入到克隆载体pBlueScript-SK(+)中,进行核苷酸序列的测定,确证所扩增和克隆的cDNA片段由1930个碱基组成,并编码1条由620个氨基酸组成的多肽。与GenBank中其它IBV S1基因序列进行比较,发现3/97、2/97和1/98毒株与所比较的IBV毒株核苷酸的一致性为73.6％～99.7％,氨基酸的一致性为78.4％～99.7％。

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒(IBV-D971株)致弱的研究

将IBV_D971株病毒在SPF鸡胚上连续传至 12 0代 ,培育出了一株毒力明显减弱 ,并且具有良好免疫原性的腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒弱毒株 (IBV_D971株 )。IBV_D971F10 5代毒力明显下降 ,以 10 9.2 5EID50 接种 1日龄SPF鸡 5 / 5无不良反应。IBV_D971F10 5代毒连续通过 1日龄SPF鸡体 5代 ,未见毒力返强。以 10 3EID50 免疫 1日龄SPF鸡 ,攻毒后 5 / 5保护 ,对照 5 /

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒金坛分离株核蛋白基因分析及与标准强毒株同源性比较

根据已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV) Beau株、M41株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对引物。应用该引物 ,通过 RT- PCR扩增出 IBV金坛分离株 (JT株 )的核蛋白基因 (N基因 ) ,片段大小为 82 8bp,与设计相符。对 JT株的 N基因进行序列测定 ,并与标准毒株 KB85 2 3、CU - T2、Beau和 M41的 N基因进行同源性比较 ,结果表明 ,JT株与 KB85 2 3、CU- T2、Beau和 M41毒株的 N基因同源性分别为 87%、87%、86 %和 85 %,说明 JT株与标准毒株在 N基因上存在一定的差异。

传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)S2蛋白基因的序列测定和分析

根据GenBank上发表的IBVS2基因序列 ,自行设计了两对引物 ,分别扩增SD/ 97/ 0 2株S2基因的上游110 0bp部分和下游的 90 0bp部分 ,两段序列拼接后包含了S2全基因的序列。将此两段分别克隆入pGEMT easy载体 ,测序后将序列用分析软件DNASTAR和网上的BLAST软件进行分析 ,结果表明 ,S2基因比S1基因相对来说更保守 ,位于氨基酸第 5 6 0～ 6 0 0位很可能是与囊膜锚着的部位 ,而S2与S1的交界处以HRRRR为特征 ,这不同于常规的RRF/SRR。

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒金坛分离株核蛋白基因的克隆和测序

应用逆转录多聚酶链反应技术，参照 Ｂｏｕｒｓｎｅｌｌ等发表的鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列，自行设计并合成１对引物，应用该引物，从感染ＩＢＶ金坛株的第五代ＳＰＦ鸡胚尿囊液中扩增出片段大小为８２８ｈｐ的ＪＴ株 Ｎ基因，与设计相符，表明扩增片段为 ＩＢＶ ＪＴ株 Ｎ基因。将扩增片段与 ｐＧＥＭ－ Ｔ Ｅａｓｙ载体连接，经核酸序列测定，与Ｇｅｎｅｂａｎｋ中报道的ＩＢＶ其它株Ｎ基因同源性较高。

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒D971毒株S1基因的序列测定与分析

采用RT PCR方法扩增了鸡传染性支气管炎病毒D971毒株预期的 163 6bp的S1全基因DNA片段 ;以Sanger’s双脱氧末端终止法测定出其核苷酸序列 ,推导出了氨基酸序列 ,并用有关软件构建了S1基因进化树。结果表明 ,IBV D971毒株与国内外AF14 0 3 5 2 (山东农业大学 )、AF15 4841(山东农业大学 )、AF193 43 2 (青岛动物检疫所 )、AY0 43 3 12 (中国农业大学 )、AF3 975 2 8(四川农业大学 )、AY0 43 2 2 1(浙江农业大学 )、AF3 5 2 3 12 (浙江农业大学 )、U2 95 2 2 (澳大利亚 )和M2 1883 (英国 )毒株的核苷酸同源性分别为 99%、99%、95 %、94%、87%、86%、88%、82 %和 80 % ,氨基酸序列同源性依次分别为 93 %、93 %、87%、86%、83 %、83 %、82 %和 80 %。

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒ZT株的分离与鉴定

1998年以来,枣庄市台儿庄区部分鸡群发生了一种以呼吸道症状,腺胃肿胀为主的疫病,通过鸡胚育传3～5代,电镜观察、动物回归和免疫保护试验、理化特性测定、毒价测定、中和试验,证明该病病原为冠状病毒。

鸡传染性支气管炎病毒分子变异机制的研究

鸡传染性支气管炎 (IB)目前已成为养鸡业中危害最大的病毒性传染病之一。病毒基因组 RNA的点突变、缺失、插入和不同毒株基因组间的同源重组所导致的病毒血清型、基因型和组织嗜性的改变是造成现用疫苗免疫失败的主要原因。病毒的变异已成为当前对 IBV病原学及本病免疫防制研究中的热点 ,作者重点就 IBV变异机制及其变异株的来源等方面作一综述。

鸡传染性支气管炎活疫苗(D971p株)的研究

从国内发病鸡群中分离到鸡传染性支气管炎 (嗜腺胃型 )病毒 (IBV_D971株 ) ,在SPF鸡胚上连续传至 12 0代 ,培育出IBV_D971p弱毒株。用该毒株制备活疫苗 ,经安全、效力等试验证明具有较高的免疫保护率和安全性 ,能有效的预防腺胃型。

IBV青岛腺胃分离株(SD/97/02)S1蛋白基因的序列测定和分析

参考Genbank上发表的IBVS1纤突蛋白基因序列 ,设计了一对引物 ,对鸡传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株 (SD/ 97/ 0 2 )RNA进行RT PCR扩增。将PCR产物克隆入pMD18 T载体中进行序列测定和分析。序列分析表明 ,该毒株的S1基因的G +C %含量较少 ,为 37.0 % ,存在HindIII,BamHI,BgIII,SacI和SalI位点 ,无EcoRI位点 ,与其他毒株的同源性在 87.0 2 % 94 .2 1%之间 ,在第 15 4～ 4 2 9nt处为高度的变异区 ;将基因序列翻译成氨基酸后 ,假定的S1蛋白由 5 4 0个氨基酸组成 ,等电点 8.2 4 ,在蛋白质内部存在 18个Cys,在S1与S2蛋白之间的剪切位点为HRRRR ,这与大多数IBV毒株 (RRF/SRR)不一样 ,有三个区域的氨基酸序列高度保守 ;16 9～ 181aa,2 30～ 2 5 0aa ,4 85～ 5 0 6aa ;与其他毒株进行抗原性比较后发现 ,在该毒株的 32 0～ 32 6aa及 390～ 4 0 1aa处的抗原表位消失 ,而在 32 5～345aa、379～ 389aa处则出现了很强的抗原表位 ;第 4 38～ 4 4 4aa处 ,其他IBV毒株 (除ZJ971株外 )原来存在的强抗原位点在本毒株中消失 ;在 5 3～ 6