口服维生素E对无特定病原体鸡抗肾型传染性支气管炎病毒感染作用的免疫学机制

本试验旨在研究口服维生素E(VE)对无特定病原体(SPF)鸡抗肾型传染性支气管炎病毒(IBV)感染作用的免疫学机制。选用40只1日龄SPF白来航雏鸡,随机分为2组,每组20只。1~21日龄,试验组口服100 IU/kg VE(溶于10μL豆油中),对照组口服等量不添加VE的豆油。21日龄时停止口服,全部鸡只通过滴鼻点眼途径人工接肾型IBV强毒株0.1 mL/只,试验期24 d。结果表明:1)口服VE对SPF鸡的生长性能均无显著影响(P>0.05)。2)接种IBV后,2组SPF鸡均出现典型病症,在2 dpi(感染后天数)时,试验组的脾脏和法氏囊中病毒载量显著低于对照组(P<0.05)。3)与对照组相比,试验组的肺脏、脾脏和盲肠扁桃体中(2 dpi)髓样分化因子88(MyD88)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),肺脏和脾脏中(5 dpi)MyD 88的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),盲肠扁桃体中(5 dpi)P65蛋白(P 65)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。4)口服VE对人工感染IBV的SPF鸡组织中鸡β防御素基因的mRNA相对表达量呈多种调控作用,无明显的规律。5)与对照组相比,试验组的脾脏中(2 dpi)和盲肠扁桃体中(5 dpi)CD8阳性细胞(CD8^(+))的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。综上所述,口服VE对SPF鸡生长性能无影响,但可抑制IBV在机体部分组织中的复制,调控免疫相关因子基因在组织中的表达,在鸡体内抗IBV感染作用中起积极作用。

禽传染性支气管炎病毒感染性克隆的快速构建及应用

为构建高效且易于操作传染性支气管炎病毒(IBV)基因组的反向遗传学平台,本研究将IBV H120株全基因组经RT-PCR分段扩增,并在其基因组的5'端引入人巨细胞病毒(CMV)启动子序列以及3'端引入丁型肝炎病毒核酶序列(HDVRz)和牛生长激素(BGH)多聚腺苷酸化信号序列(后续称HB序列),获得H120株基因组的9个片段(CMV-F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8和F9-HB);其中片段F7通过引物引入沉默突变C20356T作为遗传标记。采用转化偶联重组(TAR)克隆技术将9个DNA片段与线性质粒p YES1L转化酿酒酵母细胞,快速构建H120株基因组全长cDNA克隆,经连接PCR(Junction-PCR)筛选及测序鉴定获得感染性克隆质粒p YES1L-H120。为了提高病毒拯救效率,同时构建表达IBV N蛋白的辅助质粒pcDNA3.1-N+3'UTR。将p YES1L-H120与pcDNA3.1-N+3'UTR共转染BHK-21细胞,48 h后收获细胞,接种9日龄SPF鸡胚盲传3代,经胚体病变观察和测序显示获得IBV反向遗传重组病毒r H120株。为了以IBV为载体表达外源基因,本研究将病毒基因组的5a基因替换为eGFP基因,采用TAR克隆技术构建以IBV为载体表达外源e GFP基因的cDNA克隆pYES1L-H120-Δ5a-eGFP,与辅助质粒共转染BHK-21细胞,随后接种SPF鸡胚拯救嵌合病毒r H120-Δ5a-eGFP,并采用PCR和测序鉴定该重组病毒正确构建。结果显示,采用TAR克隆技术能够在短时间内获得IBV反向遗传重组病毒且快速操作病毒基因组获得以IBV为载体稳定表达外源基因的嵌合病毒。本研究首次建立了基于TAR克隆技术的IBV反向遗传操作平台,为研究病毒的生物学特性、载体疫苗的开发和抗病毒药物的筛选提供高效便捷的工具。

鸡传染性支气管炎病毒感染的分子机制

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的感染严重危害世界养鸡业,IBV在鸡体内的组织亲嗜性主要可分为呼吸型、肾型、嗜肠型、肌肉型、腺胃型和输卵管型等。不同组织亲嗜性的IBV毒株造成机体病理损伤主要部位有明显差异。IBV感染及组织和细胞嗜性的分子机理到底如何,目前尚未完全弄清楚。论文对IBV分子变异与毒力变化、细胞受体介导IBV感染及不同种类的体外细胞对IBV培养的不同特性等研究进展进行综述,旨在为IBV感染的组织亲嗜性及体外培养细胞感染的分子机制的研究提供参考。

鸡腺胃病变型传染性支气管炎病毒感染试验

本文采用腺胃病变型传染性支气管炎患病鸡的腺胃病料和H95株分离株尿囊液毒,对不同品种、不同日龄的易感鸡,采用不同的感染途径进行感染,对其增重、死亡等数据进行统计分析,结果表明:供试不同品种的鸡在不同的感染途径下,采用腺胃病料和鸡胚尿囊液毒分别感染,均可引起不同程度的感染发病,并出现和自然病例相同的症状和典型的病理变化。随日龄的增长,其易感率和死亡率呈下降趋势。从感染死亡鸡中可重新回收到相应的病毒,发病耐过的鸡可产生特异性抗体。

中药加味麻杏石甘汤对传染性支气管炎病毒感染雏鸡的保护作用及其机制分析

为研究中药组方加味麻杏石甘汤对人工感染传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)雏鸡的保护作用及其作用机制,将240只15日龄雏鸡随机分为6组:健康对照组、IBV接种组、利巴韦林治疗组及加味麻杏石甘汤高、中、低剂量治疗组。IBV接种组及各治疗组雏鸡的接种病毒量为3×10-5.68EID50/0.3 mL,于攻毒后48 h进行治疗,剂量分别为0.01%利巴韦林和0.6%、0.4%、0.2%加味麻杏石甘汤。ELISA方法检测各组雏鸡血清中细胞因子γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)与白介素4(interleukin 4,IL-4)含量。结果显示:IBV接种组雏鸡血清中IL-4水平显著升高,IFN-γ水平显著降低;经过药物干预治疗以后,血清中IL-4水平降低,IFN-γ水平提高。各药物治疗组之间,中药高、中剂量组IFN-γ水平高于低剂量组和利巴韦林组,IL-4水平较之偏低。可见,加味麻杏石甘汤可使IBV感染雏鸡血清中IFN-γ含量上调,IL-4含量下调,其保护机制可能是通过改善IBV感染导致的Th1/Th2失衡而起作用。

鸡传染性支气管炎病毒感染的免疫致病机制

本文对鸡传染性支气炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的免疫致病机制作一综述。传染性支气管炎是鸡的一种主要的呼吸系统疾病,不同的IBV毒株可以表现不同的组织亲嗜性,且都可以感染肾脏和卵巢而引起严重后果。有些毒株可以在肠道内繁殖但不出现病变。目前的变异株可以引起胸部肌肉的病变。影响IBV感染的几个因素包括:年龄、饲养管理、鸡的营养、环境和其它病原的混合感染。病毒的免疫原成分包括S蛋白和N蛋白。本文还就鸡对传染性支气管炎的体液免疫、局部免疫、细胞免疫及遗传抵抗性作了综述。IBV感染持续时间比较长时,盲肠扁桃体和肾脏被认为是病毒存在的部位。IBV毒株间抗原差别与S1蛋白的氨基酸序列的微小差别有关。单纯的抗原研究不能充分解释毒株间的免疫学关系,人们通过交叉反应按照‘保护型’对IBV分类。将来,可能会出现新的IBV毒株,它会引起与标准IBV毒株感染不同的器官与系统出现病变。

干扰素刺激基因在鸡传染性支气管炎病毒感染雏鸡气管黏膜中表达的动态变化

为了解鸡干扰素刺激基因（ISG）在鸡传染性支气管炎病毒（IBV）感染雏鸡气管黏膜中的表达情况,采用实时荧光定量PCR检测IBV M41株感染SPF鸡后不同时相气管黏膜中β干扰素（IFN-β）和干扰素刺激基因mRNA转录水平和IBV病毒载量变化。结果显示,鸡气管黏膜中IFN-β和干扰素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5mRNA转录水平在感染后（DPI）第1~14天显著（P〈0.05）或极显著（P〈0.01）上调,且均在5DPI达到峰值;鸡气管黏膜中IBV病毒载量在1DPI急剧升高,在5DPI达到峰值,14DPI病毒载量急剧下降。结果表明,IFN-β、干扰素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5mRNA转录水平与IBV病毒载量变化趋势一致,提示IFN-β、干扰素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5在抵御IBV入侵、抑制IBV复制、增殖以及病毒清除中发挥重要作用。试验结果丰富了宿主抗IBV感染的固有免疫应答机制,为IBV感染的预防和控制提供了理论依据。

鸡传染性支气管炎病毒感染对雏鸡黏膜固有免疫相关受体和细胞因子转录水平的影响

为探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）感染与宿主固有免疫系统的相互作用及其致病与免疫机制,本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法检测IBV变异株GX-YL5感染鸡后不同时间点气管黏膜和哈德氏腺中固有免疫相关受体和细胞因子的mRNA水平以及IBV载量的动态变化.结果显示,气管黏膜和哈德氏腺中Toll样受体TLR2、TLR3、TLR6、TLR7、趋化因子MIP-1β和趋化因子受体CXCR4、CCR4在IBV感染后1～8天以及细胞因子IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-10在IBV感染后1～5天,mRNA转录水平至少有一个时间点显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）上调;感染后14～28天,一些受体和细胞因子的mRNA则出现下调;气管黏膜和哈德氏腺的IBV病毒载量在感染后立即上升,第3天达到峰值,随后下降.结果表明,IBV感染早期气管黏膜和哈德氏腺中固有免疫相关受体和细胞因子的mRNA转录水平显著上调,说明IBV感染对宿主固有免疫应答产生明显的影响.

胆固醇对鸡传染性支气管炎病毒感染鸡胚肾细胞的影响

胆固醇是维持细胞膜脂筏稳定结构重要组分。一些囊膜病毒感染过程依赖胆固醇。研究利用Real Time PCR和病毒滴度试验,分析细胞膜和病毒囊膜胆固醇是否影响鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染鸡胚肾(CEK)细胞。结果表明,胆固醇萃取剂甲基-β-环糊精去除细胞膜胆固醇后,可抑制IBV感染CEK细胞并呈剂量依赖性,补充外源性胆固醇后,IBV感染力部分恢复,说明IBV感染依赖细胞膜胆固醇;去除细胞膜胆固醇可影响IBV感染侵入和释放过程。去除病毒囊膜胆固醇对IBV感染力无显著影响。IBV感染CEK细胞时依赖细胞膜胆固醇,而非病毒囊膜胆固醇。

蛹虫草基质多糖对传染性支气管炎病毒感染鸡免疫指标的影响

试验应用滴鼻+点眼法对7日龄黄羽肉鸡攻毒建立传染性支气管炎感染模型,采用蛹虫草基质多糖进行治疗试验,通过对肉鸡免疫器官指数、外周血淋巴细胞增殖指数、血清抗体水平和γ-干扰素浓度的检测来研究蛹虫草基质多糖用于防治鸡传染性支气管炎的可能性。结果表明,蛹虫草基质多糖能够促进肉鸡法氏囊和脾脏的生长发育,加快其增重,从而提高免疫器官指数,又能促进外周血淋巴细胞增殖转化水平;同时还能使血清抗体水平和γ-干扰素浓度升高,增强机体的免疫力。因此,蛹虫草基质多糖可作为鸡传染性支气管炎防治的临床候选药物。

鸡传染性支气管炎病毒感染鉴定

传染性支气管炎是鸡的一种急性、高度传染性的呼吸道疾病，已呈世界性分布，对养鸡业的危害极大。在山东诸城地区一罗斯308种鸡场，种鸡出现输卵管囊肿，产蛋下降10%，畸形蛋增多。笔者使用特异性引物对白血病、流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒进行诊断。结果成功扩增到传染性支气管炎病毒S1片段。1材料和方法1.1材料山东诸城送检罗斯308种鸡，日龄280日龄，剖检发现输卵管囊肿，肾脏肿大，呈现花斑肾。整体鸡群出现产蛋下降约10%，出现薄壳蛋、软壳蛋，畸形蛋增多。1.2方法针对症状，设计针对白血病病毒(ALV)env基因、流感病毒(AIV)HA基因、新城疫病毒(NDV)F基因和传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因特异性引物。分别扩增片段长度为1000、580、800和1000bp片段。回收目的片段测序进行进一步验证。

稳定表达鸡氨肽酶N的MDCK细胞系构建及其对传染性支气管炎病毒感染的影响

为研究鸡氨肽酶N(Chicken aminopeptidase N,c APN)在鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染细胞过程中作用,构建稳定表达c APN的MDCK细胞系。将重组质粒pc DNA3.1-c APN通过脂质体转染到MDCK细胞中并利用G418筛选,克隆纯化获得稳定表达c APN的MDCK细胞系。通过RT-PCR和间接免疫荧光检测表明c APN在MDCK细胞中持续稳定表达。IBV可以感染稳定表达c APN的MDCK细胞并连续传代,该细胞系接种IBV阳性样品24 h即可产生典型细胞融合病变,而对照MDCK细胞接种后没有细胞病变出现。结果表明c APN在介导IBV感染宿主细胞过程中发挥重要作用。

鸡传染性支气管炎病毒感染的免疫致病机制

本文对鸡传染性支气炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV)的免疫致病机帛作一综述。传染性支气管炎是鸡的一种主要的呼吸系统疾病,不同的IBV毒株可以表现不同的组织亲嗜性,且都可以感染肾脏和卵巢而引起严惩后果。有些毒株可以在肠道内繁殖但不出现病变。目前的变异株可以引起胸部肌肉的病变。影响IBA感染的几个因素包括:年龄、饲养管理、鸡的营养、环境和其它病原的混合感染。病毒的免疫原成分包括S蛋白和N蛋白。本文还鸡对传染性支气管炎的体液免疫、局部免疫、细胞免疫感及遗传抵抗性作了综述。IBV感染持续时间比较长时,盲肠扁桃体和肾脏被认为是病毒差别与SI蛋白的氨基酸序列的徽小差别有关。单纯的抗原研究不能充分解释毒株间的免疫学关系,人们通过交叉反应按照“保护型”对IBV分类。将来,可能会出现新的IBV,毒株,它会引起与标准IBV,毒株感染不同的器官与系统出现病变。

鸡基因组多个位点影响抗传染性支气管炎病毒感染

目前，关于宿主抗鸡传染性支气管炎病毒（IBV）感染的免疫应答的遗传机制知之甚少。广东省农业科学院畜牧研究所的科研人员应用ELISA试剂盒检测疫苗免疫后511份原鸡血清的IBV抗体水平，并应用全基因组关联研究鉴定影响抗IBV感染的免疫应答产生的主要位点。

传染性支气管炎病毒感染对雏鸡血清IFN-γ和IL-4的影响

[目的]探讨传染性支气管炎病毒(IBV)感染后雏鸡干扰素(γ)和白介素4(IL-4)的变化。[方法]将80只15日龄雏鸡随机分为对照组和试验组。试验组雏鸡滴鼻接种IBV尿囊液。分别于21、24、27日龄时,每组随机取10只鸡,ELISA方法测定血清IFN-γ和IL-4水平。[结果]IBV感染组雏鸡血清IFN-γ水平显著降低(P<0.01),IL-4水平显著上升(P<0.01)。在24、27日龄IL-4水平在试验组和对照组之间差异极显著(P(0.01)。[结论]IBV感染雏鸡的细胞免疫和体液免疫处于紊乱态势。

5种藏药方剂对传染性支气管炎病毒感染鸡免疫指标的影响

采用滴鼻+点眼法对7日龄艾维因肉鸡攻毒建立传染性支气管炎感染模型,分别用5种藏药组方制剂(组方1、2、3、4、5)进行治疗试验,通过对免疫器官指数、淋巴细胞增殖性指数、抗体水平、γ-干扰素浓度的检测来研究各组方用于防治鸡传染性支气管炎的可能性。结果显示:组方5的所有检测指标均与病毒对照组差异显著(P<0.05),说明组方5能够促进法氏囊、脾脏的生长发育,加快其增重,从而提高免疫器官指数;又能促进淋巴细胞的转化,可使抗体水平升高;还能提高γ-干扰素浓度,增强机体的免疫力。组方1、2、3、4均与病毒对照组差异不显著(P>0.05),但与组方5差异显著(P<0.05)。结果表明:组方5具有促进免疫器官生长发育,加快淋巴细胞转化,提高抗体水平和γ-干扰素浓度,增强机体抗病毒感染的能力,可作为临床用药用于鸡传染性支气管炎的治疗。

鸡传染性支气管炎病毒感染的免疫致病机制

鸡对IBV的免疫反应IBV的免疫蛋白IBV是正链RNA病毒，是冠状病毒科的原型病毒。它有三个结构蛋白，‘S’突起糖蛋白位于病毒粒子的表面，由S1和S2两个亚单位构成，分子量分别为92K和84K。膜上的‘M’糖蛋白部分露出病毒粒子的表面，分子量的范围为27-36K，核衣壳蛋白位于病毒粒子内部，分子量为52K(Wadey和Westaway，1981；Cavanagh，1983)。

鸡传染性支气管炎病毒感染HD11细胞的转录组分析

旨在探究感染早期宿主细胞的天然免疫应答和抗病毒反应,本研究将鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)Beaudette株感染鸡巨噬细胞HD11,2 h后提取细胞总RNA反转录成cDNA,采用Illumina进行转录组高通量测序。结果显示,感染组筛选出1363个上调基因,653个下调基因。通过对差异表达基因GO和KEGG分析发现,IBV感染HD11细胞早期,差异表达基因大多与免疫反应、抗病毒作用有关,富集到的信号通路主要集中在细胞因子和细胞因子受体之间的相互作用、病毒蛋白与细胞因子或细胞因子受体之间的相互作用、TNF信号通路、MAPK信号通路等。随机挑选10个与免疫反应、抗病毒相关基因进行RT-qPCR验证,结果与转录组测序分析一致。本研究为进一步探究IBV致病机制和感染早期宿主细胞免疫反应奠定了基础。

环孢菌素诱导传染性支气管炎病毒感染鸡的再排毒

用摩洛哥Ｇ株嗜内脏型传染性支气管炎病毒接种１日龄鸡，接种后７天从气管和３５天从泄殖腔均能回收到病毒。此后即使通过转群对鸡施以自然应激，也不能再检出病毒。于１２．５周龄对鸡注射一种选择性Ｔ细胞抑制剂－环孢菌素，４／５的接种鸡和２／５的接触感染鸡无规律地重新排毒。同时，在其血清中出现ＩＢＶ特异性ＩｇＭ，揭示在ＩＢＶ的长期感染中，病毒的持续性由Ｔ淋巴细胞控制。