鸡传染性法式囊病毒VP2原核表达蛋白的纯化和复性

[目的]探讨鸡传染性法式囊病毒(IBDV)VP2原核表达蛋白的纯化和复性。[方法]对原核表达的IBDVVP2蛋白进行可溶性与不可溶性分析,并利用溶菌酶、Triton-100、尿素等试剂进行纯化和复性,对复性前后的蛋白分别与特异性多抗进行Dot-ELISA。[结果]可溶性与不可溶性分析的结果表明,蛋白主要以包涵体形式存在。Dot-ELISA表明,复性后蛋白的反应活性增强了10倍,对复性后的蛋白与IBDV16株单抗进行Dot-ELISA,其中有11株与其发生特异性反应。[结论]复性后的蛋白与鸡传染性法式囊病毒单克隆抗体的反应性明显提高。

鸡传染性法式囊病毒VP2原核表达蛋白的纯化和复性

对原核表达的鸡传染性法式囊病毒(IBDV)VP2蛋白进行可溶性分析与不可溶性分析,结果表明蛋白主要以包涵体形式存在,利用溶菌酶、Triton-100、尿素等试剂进行纯化和复性后,对复性前后的蛋白分别与特异性多抗进行Dot-ELISA,复性后蛋白的反应活性增强了10倍,对复性后的蛋白与IBDV16株单抗进行Dot-ELISA,其中有11株与其发生特异性反应.

鸡法氏囊病毒多表位抗原的表达及免疫特性分析

为进行传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位抗原的原核表达和免疫特性分析,应用重叠延伸PCR技术扩增合成由病毒VP2和VP3蛋白多个表位序列构成的重组抗原基因,并将抗原基因与原核表达载体pBVIL1重组,表达多表位融合抗原,通过与标准抗血清反应和动物免疫分别检测表达抗原的免疫反应性和免疫原性。结果显示,经42℃诱导后,含重组载体的大肠杆菌表达了31 kD的抗原蛋白,Western blot鉴定出现阳性条带,免疫小鼠后,抗血清的滴度为1∶6 400。说明原核表达载体构建成功,大量表达的多表位融合抗原具有IBDV抗原反应性。

IBDV H1株VP2基因的原核表达

【研究目的】为了研究鸡传染性法式囊病毒的分子生物学特性,【方法】应用反转录(RT-PCR)技术从河南传染性法式囊发病鸡中总RNA克隆出1461bp的VP2基因,并将其克隆于pET-28a载体,筛选并构建了pVP2表达载体。【结果】经IPTG诱导后,在其宿主菌BL21(DE3)中成功表达了53.7ku蛋白。【结论】经SDS-PAGE和Western blotting分析,VP2表达产物以包涵体形式存在,并与鸡IBDV抗血清及1株IBDV单抗发生特异性反应。

检测鸡IBDV血清抗体的IHA的建立

以大肠杆菌表达的传染性法氏囊病病毒(IBDV)衣壳蛋白VP2致敏绵羊红细胞,建立间接血凝试验(IHA)。对参考阳性血清(鸡新城疫病毒抗血清、鸡传染性支气管炎病毒抗血清、鸡禽痘病毒抗血清)及鸡参考阴性血清等分别进行微量IHA,加上抑制试验,结果证实其特异性高。对商品肉用仔鸡的30个血清样品、IBDV重组亚单位疫苗免疫试验鸡的20个血清样品,分别进行微量IHA和琼脂免疫扩散试验(AGID),将肉用仔鸡血清的阳性检出率进行t检验(P<0.05);而20份免疫试验鸡血清样品IHA阳性检出率与AGID阳性检出率均为100%。对30份肉用仔鸡血清样品和20份免疫试验鸡血清样品检测得到的阳性血清的平均滴度进行方差分析,IHA的平均滴度与AGID的平均滴度之间均具有显著性差异。对20份免疫试验鸡血清及IBDV参考阳性血清以3个批次和第2批次IHA试验制剂,分别进行重复性试验,对其IHA平均滴度进行了方差分析,均无显著性差异。对20份免疫试验鸡血清以在4℃、保存期分别为3、6、9个月的IHA的试验制剂进行了微量IHA,检出的IBDV抗体平均滴度中,3个月的与6个月的无显著差异;3个月的与9个月的及6个月的与9个月的,均有显著差异,结果表明该IHA试验制剂在4℃的保存期可达6个月。