猪传染性胃肠炎病毒TH-98株在不同细胞增殖特性的研究

对猪传染性胃肠炎病毒TH - 98分离株进行了在ST ,PK15及IBRS2三种细胞增殖特性的研究 ,以及不同培养条件对其繁殖滴度的影响。结果表明 ,在静置培养条件下 ,用含 15 %FBS的生长液进行细胞传代 ,对ST ,PK15及IBRS2三种细胞生长以及接毒后对CPE判定都起到良好效果。但在旋转条件下培养细胞 ,用 10 %的FBS生长液即可使三种细胞生长良好 ,用ST细胞增殖病毒的滴度明显高于其他两种细胞。旋转培养条件下增殖病毒始终比静置培养繁殖病毒的滴度高 ,在维持液中加入胰酶未见有病毒滴度的明显提高。

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因的克隆与同源性比较

用猪睾丸 (Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒国内分离株 TH- 98,根据 Gen Bank中已发表的TGEV S基因 c DNA序列 ,利用 Oligo4.1程序软件设计并合成两对引物 ,进行逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) ,扩增出2 .3kb和 2 .1kb两个片段 ,分别命名为 Sa与 Sb,先后插入到 p UC18质粒载体上的 Eco RI和 Pst I多克隆位点上 ,构建了重组质粒 p UC- S。根据 TGEV S基因位点和 p UC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式 PCR方法进行鉴定、分析 ,证明克隆的 p UC- S为 TGEV S基因。同时对 p U C- S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的五个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 ,证明了

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株HP基因的克隆与序列分析

hp基因位于猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因组的3′端,该基因在病毒复制时表达编码一个78AA、9100的疏水蛋白。该蛋白可以与猪超免抗TGEV血清发生免疫沉淀反应。目前,对其功能的研究还不是十分清楚。但就其在细胞内的位置而言,hp蛋白可能对复制复合体膜的缔合以及病毒粒子的装配起重要作用。根据Genebank已发表的TGEVhp基因cDNA序列,利用Oligo4.1软件设计一对引物,进行RT-PCR扩增hp基因。将PCR产物用KpnI和XbaI酶切后克隆到载体pPROEXHTc的KpnI和XbaI多克隆位点上。然后对重组质粒进行相应的酶切鉴定和PCR鉴定。将重组子测序并且与其国外分离株进行同源性比较。结果表明,hp基因克隆成功是可信的。本研究为进一步研究TGEV的基因组及其非结构蛋白奠定了重要基础。

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株M基因的克隆及序列分析

本研究首次扩增出 TGEV 国内分离株 TH-98 株 M 基因 (882 bp),将该片段克隆到 pMD 18-T载体上,经限制性内切酶鉴定 M 基因正确插入 pMD 18-T 载体上,命名为 pMD 18-T-THM。序列测定和分析表明,该片段的核苷酸序列与国外发表的猪传染性胃肠炎病毒 TO14 株、Purdue15 株、TFI 株、96-133 株M 基因同源性达到 98%以上,氨基酸序列同源性高达 97%以上,表明不同来源毒株 M 基因保守性较高。

猪传染性胃肠炎病毒弱毒株STC_3细胞培养特性及致病性研究

从美国引进的猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)弱毒株STC3 在ST、PK15及猪肾原代细胞上均能增殖 ,并产生明显的致细胞病变作用 (CPE) ,其中以ST细胞上的CPE最为迅速、明显 ,于接毒后 2 0— 2 4hCPE即可达 90 %— 10 0 % ,而在PK15及猪肾原代细胞上CPE形成较迟一些 ,在 42— 48h可达 80 %— 90 %。STC3 在ST、PK15及猪肾原代细胞上的TCID50分别为 10 -7.67/mL、10 -5.63 /mL和 10 -5.90 /mL。用较大剂量STC3 细胞毒经口接种被剥夺初乳的初生仔猪 ,仅表现为一过性的腹泻而不引起死亡 ,对 3日龄人工哺乳的仔猪则已完全丧失了致病力 ,但荧光抗体检查结果显示病毒在小肠粘膜上皮细胞中仍有增殖。由此可见 ,STC3 可能是

猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株N基因的克隆及原核表达

通过PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株核衣壳蛋白(N)基因,然后将重组到pMD18-T载体中的约1174 bp的基因片段亚克隆到PET-32a(+)表达载体上,通过酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒命名为PET-N,核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,将阳性重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导可表达分子量约66 kD的融合蛋白,N基因的表达可为传染性胃肠炎病毒的诊断提供良好的物质材料。

猪传染性胃肠炎病毒国内分离株S基因克隆及与国外分离株的同源性比较

用猪睾丸细胞增殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)国内分离株TH 98,根据基因库中已发表的TGEVS基因cDNA序列 ,利用Oligo软件设计并合成 2对引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增出 2 .3kb和 2 .1kb2个片段 ,即Sa与Sb。将Sa与Sb先后插入到pUC18质粒载体上的EcoRⅠ和PstⅠ多克隆位点上 ,构建了重组质粒pUC S。根据TGEVS基因位点和 pUC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式PCR方法鉴定、分析 ,证明克隆的pUC S为TGEVS基因。同时对pUC S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的 5个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 。

猪传染性胃肠炎病毒河北分离株核衣壳N蛋白基因的克隆与序列分析

采用RTPCR技术扩增了TGEV河北分离株的N基因,长度约为1149bp。将该基因片段进行亚克隆重组到pMD18T质粒载体上,连接转化,鉴定后得到阳性重组质粒pTN。对重组质粒插入的目的基因片段进行序列分析和比较,结果表明TGEV河北分离株N基因与国外的Purdue115、FS772/70、TO14、961933株有≥95%的同源性;推导的氨基酸序列同源性≥95%。TGEVN基因的克隆及序列分析,为其蛋白质的表达分析提供了重要依据,也为进一步讨论该病毒的分子生物学特性奠定了理论基础。

猪传染性胃肠炎病毒疫苗株S基因的克隆及其与流行株的比对分析

[目的]分析猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)疫苗株和流行株S基因的遗传变异特征。[方法]利用RT-PCR方法对国内目前广泛使用的TGEV疫苗株A、B、C的S基因进行克隆并测序,将获得的序列与近年来公开发表的分离自不同地区的TGEV毒株S基因序列进行比对分析;选取NCBI中登录号为AF104420.1-Britain、AY587882.1-Nanjing、DQ811786.2-America、EU074218.2-Harbin、FJ755618.2-Harbin、JQ700304-fuzhou、KC609371.1-Shanghai、KX900411.1-United States、M94099.1-Spain和MK272773.1-Fushun的TGEV流行株S基因序列,与疫苗株A、B、C的S基因序列一起,利用MegAlign软件进行比对分析。[结果]疫苗株A、B、C的S基因序列两两间的同源性均在96.7%以上;疫苗株A、B、C的S基因序列与NCBI中流行株S基因序列的同源性分别在94.43%~99.82%、95.30%~99.64%、93.48%~98.38%;由遗传进化树可知,疫苗株A、C与国外流行株M94099.1-Spain在同一分支上,疫苗株B与国内流行株JQ700304-fuzhou在另一分支上。[结论]TGEV疫苗株的S基因与流行株同源性较高,变异性不大。

猪传染性胃肠炎病毒南京株纤突S蛋白基因的克隆与序列分析

参考 Genbank收录的 TGEV- Miller株的基因序列 ,自行设计合成 1对引物 (TGEVP5 /P6 ) ,对不同代次的 TGEV疫苗弱毒 STC3及种毒 、种毒 进行了 RT- PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,均出现 1条大约 12 6 2 bp的目的条带 ,经 Eco R 酶切 ,都产生了 871bp和391bp左右的两个片段 ,与预期大小相符。将种毒 RT- PCR扩增目的条带回收纯化后克隆入PMD18- T载体中 ,转化宿主菌 DH5 α,挑选阳性克隆 (命名为 PTs) ,提取重组质粒 ,用 Hpa 、Eco R 对重组质粒进行酶切鉴定以及 PCR扩增 ,然后进行序列测定 ,并进行了序列分析 ,证实与国外标准毒株 Miller、Fs772 / 70、Purdue。

猪传染性胃肠炎病毒SC-H株M基因的克隆与序列分析

参照Genbank已发表的TGEV的核酸序列设计一对扩增M基因的引物,经RT-PCR扩增了SC-H株的M基因cDNA片段,插入pMD18-T构建重组质粒pMD-M,对pMD-M进行了酶切鉴定及核苷酸测序,将M基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列与参考毒株进行了比较分析。结果表明SC-H株M基因扩增片段长度为852bp,包含789bp的M基因编码区,编码262个氨基酸;SC-H株与TS、96-1933、FS772/70、HN2002、TFI、Purdue及TO14株的M基因核苷酸序列同源性为97.8%、94.2%、97.2%、97.8%、99.7%、96.8%及98.2%,氨基酸同源性为96.6%、92.0%、95.4%、96.6%、99.2%、95.8%及97.7%,表明不同毒株的M基因高度保守,系统进化分析显示SC-H株与Prudue株有较近的亲缘关系。

猪传染性胃肠炎病毒TS株非编码区的克隆及其一二级结构的分析

参照GenBank中Purdue株全序列对5′和3′非编码区各设计一对特异性引物,经RT-PCR分别获得了2 957 bp和516 bp大小的片段,与预期结果大小相符。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TS株与Puedue株、TH-98和FS772/70株的5′UTR核苷酸序列同源性分别为99.4%,99.3%,99.0%,TGEV TS株的3′UTR与Miller、Purdue、Niigata、h-5株的核苷酸同源性均为100.0%,与Aomori和Ogawa的同源性为99.3%。对非编码区的二级结构进行分析发现其具有复杂的二级结构。

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)种毒特性研究

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)可导致仔猪严重腹泻,死亡率极高,是危害养猪业的重要病毒。免疫接种是预防TGEV感染有效手段,TGEV疫苗开发对防治TGEV感染具有重要价值。制备纯净种毒是疫苗株基础。本试验通过细胞培养、病毒培养、间接免疫荧光、RT-PCR、理化试验、中和试验、纯净度检测等试验技术对TGEV自主致弱毒株HR/DN1进行系统特性,结果表明,该病毒理化特性和分子生物学特性均与TGEV相符,且该病毒具有繁殖滴度高、传代稳定、病毒纯净等特点,符合种毒制备基本条件,为开发TGEV疫苗提供基础。

藏香猪源传染性胃肠炎病毒BT-1株的分离鉴定及S基因序列分析

为了鉴定藏香猪源传染性胃肠炎病毒(TGEV)BT-1株及分析S基因序列遗传特点,试验采用ST细胞培养法、RT-PCR法、直接免疫荧光(FA)试验、S基因序列分析等对从患腹泻藏香仔猪小肠内容物中分离得到的病毒株(BT-1株)进行鉴定。结果表明:BT-1株被鉴定为TGEV,大小约为1 215 bp;在荧光显微镜下,TGEV显示特异性荧光;BT-1株与SHXB株、TH-98株、 JS2012株S基因序列的同源性达100%,与Purdue株、Miller M6株、Purdue P115株等9株参考株S基因序列的同源性在97.1%~99.0%之间;BT-1株与SHXB株、TH-98株亲缘关系较最近,位于同一分支,与其他分离株亲缘较远;BT-1株S基因序列与国内分离的TGEV参考毒株序列相比,未发生明显变异。说明分离得到的TGEV BT-1株与GenBank中登录的9株TGEV参考株S基因序列的同源性较高,S基因序列未发生变异。

猪传染性胃肠炎的诊断与预防措施

1病原猪传染性胃肠炎病毒属于冠状病毒科、冠状病毒属。该病毒能凝集动物的红细胞。该病毒只有一个血清型,也有资料报道在国外该病毒有变异毒株——猪呼吸道冠状病毒。对外界抵抗力强,37℃4 d才可使其失去毒力;加热65℃10 min左右可杀死病毒;对光比较敏感,外界猪粪中的病毒在阳光下照射6 h可将其灭活。该病毒对甲醛、氢氧化钠、乙醚和碘制剂等敏感。

经核壳蛋白基因序列分析证实猪流行性腹泻病毒是与人类冠状病毒229E和猪传染性胃肠炎病毒相关的冠状病毒

经核壳蛋白基因序列分析证实猪流行性腹泻病毒是与人类冠状病毒２２９Ｅ和猪传染性胃肠炎病毒相关的冠状病毒［英］／［ＢｒｉｄｇｅｎＡｎｎｅ．．．ＪＧｅｎＶｉｒａｌ．－１９９３，７４．－１７９５－１８０４］猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）是造成猪腹泻的病原，其被...

当前猪病毒性腹泻防治技术与经验

2010年冬季以来．全国各地猪场的猪群中先后发生严重的传染性腹泻疾病，使用各类抗生素防治无效，其发病率和病死率均很高，造成严重的经济损失。现有的诊断与检测数据表明。引起仔猪腹泻的主要病原是流行性腹泻病毒（PEDV），猪场阳性率为65．94％，对流行毒株的全基因组测序表明．是一种不同于我国先前流行的新毒株，该病毒的S基因与韩国毒株同源性最高，此外，发病猪群中还有传染性胃肠炎病毒（TGEV），

PEDV和TGEV毒株间的抗原关系

在经济上,猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）都是导致猪肠病重要的冠状病毒。两者都属于冠状病毒科甲型冠状病毒属,但属于不同的种。并且两者都能引发新生仔猪相似的临床症状和病理病变,但推测两者抗原性不同。

PEDV和TGEV毒株间的抗原关系

猪流行性腹泻病毒PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）都是导致猪肠病重要的冠状病毒。两者都属于冠状病毒科甲型冠状病毒属，但属于不同的种。并且两者都能引发新生仔猪相似的临床症状和病理病变，但推测两者抗原性不同。本研究选取了PEDVCV777原型毒株、美国三种不同的PEDV毒株（原高毒性PC22A、SINDEL Iowa106和S197DELPC177）和两种美国代表性TGEV毒株（Miller和Purdue），通过细胞培养免疫荧光（CCIF）和病毒中和（VN）试验进行了病毒之间双向抗原交互作用检测。