传染性鲑鱼贫血症病毒实时荧光环介导等温扩增检测方法的建立

根据ISAV的基因保守序列,利用LAMP Designer软件设计了6条引物,采用新型的环介导等温扩增设备进行扩增和检测,优化了反应条件,分析了所建立方法的特异性和灵敏度,并与RT-PCR和实时荧光RT-PCR进行比较。研究表明,该方法最适反应温度为64℃,反应10 min就可以观察到明显的扩增。该方法灵敏度高,检测限为78.4 fg RNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与实时荧光定量RT-PCR灵敏度相当;特异性好,与传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、出血性败血症病毒(VHSV)、鱼类病毒性神经坏死病病毒(VNNV)、鱼腹水病毒(YAV)等14种主要鱼类病毒没有交叉反应。结果表明,本研究建立了ISAV的实时荧光环介导等温扩增检测方法,实验能对整个扩增过程进行实时监测,提高检测灵敏度的同时,防止由于开盖跑电泳或加染料而导致的污染。

进口冰鲜大西洋鲑中传染性鲑鱼贫血症病毒的鉴定

传染性鲑鱼贫血症病毒(Infectious salmon anaemia virus,ISAV)作为一种对鲑鳟鱼类危害严重的病原,对世界鲑鳟养殖业造成较大经济损失。本研究依据世界动物卫生组织(OIE)推荐的方法,对2014年经深圳口岸进口的冰鲜大西洋鲑进行了ISAV检测,9批挪威进口冰鲜大西洋鲑被检出疑似ISAV阳性。然而,9批样品ISAV病毒分离结果均为阴性。基于ISAV血凝素酯酶(Hemaglutinin esterase,HE)基因序列的分析结果,9株ISAV均属于HPR非缺失型ISAV(HPR0ISAV),且与挪威ISAV分离株同源性达98.3%~100.0%。本研究共从491批冰鲜大西洋鲑中检出HPR0ISAV阳性9批,阳性检出率为1.8%。因此,应加强对挪威进口冰鲜大西洋鲑的检疫,以防HPR0ISAV传入我国。

进口冰鲜大西洋鲑鱼中缺失型传染性鲑鱼贫血症病毒(ISAV-HPRΔ)的鉴定

为确保从挪威进口至四川的冰鲜大西洋鲑鱼的卫生与安全,防止有害生物因子传入我国。本试验参照OIE及相关国内行业标准推荐的水生动物疾病诊断手册中分子生物学检测方法,采用TaqMan荧光定量RT-PCR结合HE基因中高度多态区域(HPR)克隆测序等诊断方法,对从挪威进口至四川成都的某批次抽检去内脏冰鲜大西洋鲑鱼进行传染性鲑鱼贫血症病毒(ISAV)的检测。结果显示,该进口大西洋鲑鱼鱼肉中检出HPR缺失型ISAV,且其HPR区间存在51 bp的碱基缺失,基于HPR的序列分析结果提示其与分离自挪威的ISAV9和9/93 HPR缺失型ISAV的亲缘关系最近。结果表明,这是我国国内首例通过分子生物学方法,从进口大西洋鲑鱼鱼肉中检出HPR缺失型ISAV的案例,该结果警示各大水生动物检疫机构应重视对进口的去内脏冰鲜大西洋鲑鱼中ISAV的筛查,严防该病毒进入我国。

EB病毒相关性传染性单核细胞增多症合并巨细胞病毒感染、腹泻及贫血1例

患儿，男，11月，因发热、轻咳6天，稀便4天入院，患儿系第2胎第2产，足月顺产，出生体重2．9kg，人院查体：体温36．6℃，呼吸30次／min，脉搏112次／min，神志清，精神状态尚可，皮肤面膜色白，周身皮肤黏膜未见出血点及黄染，颈部可触及肿大淋巴结大小为0．8×1．0cm。活动度良好，无触痛.

传染性鲑鱼贫血症研究进展

通过对传染性鲑鱼贫血症研究进展进行综述,介绍了传染性鲑鱼贫血症病理学、传播途径、流行情况、检测方法等,并提出在实际中应采取的预防措施,为传染性鲑鱼贫血症的进一步研究提供参考。

SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR检测传染性鲑鱼贫血病

[目的]利用SYBR-GreenI实时荧光PCR检测传染性鲑鱼贫血病。[方法]根据传染性鲑鱼贫血病毒(ISAV)Y10404的序列合成部分基因片段,将其插入到T载体中,构建阳性质控品;并设计合成一对特异性引物。利用阳性质控品建立SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法,对反应体系进行优化,进行特异性和敏感性分析,并制作标准曲线。[结果]最佳引物终浓度为0.5μmol/L。所建立的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法能够特异地检出ISAV;最低检出浓度为9.5×10-8μg/μL,其灵敏度比传统PCR高1000倍;能够从阳性样品中检出ISAV,Tm值为82.5℃。建立了标准曲线,其r2>0.99。

鸡传染性贫血症的诊断与防治探讨

鸡传染性贫血（CIA）是由鸡贫血病毒（CIAV）引起的雏鸡再生障碍性贫血、全身淋巴组织萎缩、皮下和肌肉出血为特征的一种免疫抑制性疾病。又称出血性综合征或贫血性皮炎综合征。感染鸡是否表现临床症状及严重程度，与鸡的年龄、毒株毒力及是否伴发或继发其他疾病有关。该病死亡率高，对养鸡业威胁很大。

鸡传染性贫血的诊断及防控措施

鸡传染性贫血在引种及鸡流通交易频繁的现代养鸡生产中,呈高发、高危害态势,早期准确的诊断,有助于及时实施隔离治疗、无害化处置及淘汰制度的实施,从而减少疫病造成的损失。鉴于该致病原(CIAV)有极强的生化抵抗力,一旦流入病原体,发病场就很长时间难以净化本病,留下长期的安全隐患,且本病尚无有效对症药物,故只宜落实各项预防控制措施,坚持以防为主,发病后被动治疗弊多利少。

6种重要的鱼类病毒

病毒性传染病是当前渔业生产所面临的重要问题之一。文章主要介绍了鱼类几种重要病毒的病原学、流行、传播以及防控等相关情况。这些病毒包括水生双RNA病毒、β-野田村病毒、传染性鲑鱼贫血病毒、传染性造血组织坏死病毒、流行性造血器官坏死病毒、病毒性出血败血症病毒等。

EB病毒抗体检测在儿童不明原因发热(FUO)诊断中的应用价值

目的 探讨EBV三种抗体(VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG)在儿童不明原因发热(FUO)诊断中的应用价值.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测128例不明原因发热(FUO)儿童血清样本的EBV抗体.结果 (1)病例年龄1月～14岁,中位年龄3岁,【4岁87例,4～8岁26例,】8岁15例;(2)128例发热患儿中传染性单核细胞增多症65倒(50.8%),呼吸道感染40例(31.3%),另外还有过敏性紫癜、急性再生障碍性贫血、急性肾小球肾炎、肝炎等;(3)VCA-IgM阳性60例,阳性率46.88%.结论 三种EBV抗体能动态反应EB病毒感染后的抗体水平,敏感性高、特异性强、检测方法简单,在儿童不明原因发热(FUO)病因诊断中非常有价值.

ISAV实时荧光RT-PCR检测方法的建立

为建立ISAV(传染性鲑鱼贫血症病毒)实时荧光定量PCR检测方法,针对ISAV基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性的探针,建立实时荧光RT-PCR探针检测法,并进行特异性、敏感性、重复性检测。结果表明:所建立的ISAV实时荧光RE-PCR探针检测法,引物和探针特异性良好,组内组间重复性良好,检出ISAV最小拷贝数为13拷贝。

利用流式细胞术测定CTL活性方法在EIAV免疫学中的应用

利用PKH-26和CFSE两种荧光染料对靶细胞染色,建立了一种通过流式细胞术进行马传染性贫血症病毒 (Equine infectious anemia virus,EIAV)抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes,CTL)反应的 新方法,避免了经典的Cr51释放法对检测人员的放射线威胁,降低了本底释放,提高了检测的灵敏度。将该检测方 法用于检测EIAV疫苗毒接种马和嵌合克隆接种马的细胞免疫反应变化趋势,数据显示细胞免疫反应在接种后3 个月达到成熟阶段而后保持在较高的反应水平。该方法的成功建立和应用为研究EIAV减毒疫苗的免疫机制提 供了好的研究手段,也为其他病毒的免疫学研究提供了新的参考方法。

挪威鱼类养殖病害防疫对策及新动向

挪威的大西洋鲑养殖堪称世界第一,但由于养殖的迅猛发展,也产生了渔场污染、鱼病滋生、蔓延至天然鱼类等一系列问题。我国海水网箱养殖业的发展如火如荼,可也存在着许多类似挪威养殖业的问题。对照挪威管理方面的法律法规及经验,现将其病害防疫对策及鱼病动向整理出来以飨读者。