血浆硫化氢水平与行维持性血液透析的终末期肾病并动脉粥样硬化患者传统型蛋白激酶CβⅡ激活的相关性研究

目的分析血浆硫化氢(H_2S)水平与行维持性血液透析(MHD)的终末期肾病(ESRD)并动脉粥样硬化(AS)患者传统型蛋白激酶CβⅡ(cPKCβⅡ)激活的相关性。方法选取2010—2014年在西安医学院第二附属医院行MHD的ESRD患者120例,根据AS发生情况分为A组(未并发AS,n=60)和B组(并发AS,n=60);另选取同期体检健康者60例作为对照组。采用硫化物敏感电极法检测血浆H_2S水平,采用Western bloting法检测cPKCβⅡ膜转位率。比较A组和B组患者一般资料和实验室检查指标,比较3组受试者血浆H_2S水平和cPKCβⅡ膜转位率,并分析cPKCβⅡ膜转位率与行MHD的ESRD并AS患者其他观察指标的相关性。结果两组患者性别、年龄、体质指数(BMI)、透析时间、吸烟率、嗜酒率、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)及使用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、钙通道阻滞剂、β-受体阻滞剂者所占比例比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组患者血红蛋白、清蛋白、肌酐、尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。A、B组患者血浆H_2S水平低于对照组(P<0.05),cPKCβⅡ膜转位率高于对照组(P<0.05);B组患者血浆H_2S水平低于A组,cPKCβⅡ膜转位率高于A组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,cPKCβⅡ膜转位率与行MHD的ESRD并AS患者血浆H_2S水平呈负相关(r=-0.88,P<0.05)。结论血浆H_2S水平与行MHD的ESRD并AS患者cPKCβⅡ激活有关。

蛋白激酶CβⅡ通过调控翻译起始介导上皮-间充质转化促进肝细胞癌转移

目的:研究蛋白激酶C β Ⅱ(protein kinase C β Ⅱ, PKCβⅡ)上调Snail和Twist蛋白表达介导上皮-间充质转化的分子机制。方法:采用[35S]-甲硫氨酸掺入实验和核糖体分离实验观察PKCβⅡ对Snail和Twist mRNA翻译的影响。敲减真核翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E, eIF4E)通过核糖体分离实验、Western blot及RT-qPCR观察对PKCβⅡ调控Snail和Twist表达的影响。利用Western blot观察PKCβⅡ对调控eIF4E活性的相关信号通路的影响。利用Western blot观察应用丝裂原活化蛋白激酶相互作用激酶1(mitogen-activated protein kinase-interacting kinase 1, MNK1)抑制剂或雷帕霉素对PKCβⅡ调控Snail和Twist蛋白表达的影响。利用Transwell实验观察敲减eIF4E对PKCβⅡ调控肝癌细胞侵袭的影响。结果:[35S]-甲硫氨酸掺入实验和核糖体分离实验表明,相比β-actin,PKCβⅡ显著上调Snail和Twist mRNA的翻译(P<0.01)。敲减eIF4E抑制PKCβⅡ介导的Snail和Twist mRNA翻译和蛋白表达的上调(P<0.01),但对Snail和Twist的转录没有影响。高表达PKCβⅡ激活细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)/MNK1及蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)/eIF4E结合蛋白1(eIF4E-binding protein 1, 4E-BP1)通路上调eIF4E的活性(P<0.01)。应用MNK1抑制剂或雷帕霉素可抑制PKCβⅡ介导的Snail和Twist蛋白表达上调(P<0.01)。敲减eIF4E抑制PKCβⅡ介导的肝癌细胞侵袭能力的增强(P<0.01)。结论:PKCβⅡ通过激活ERK/MNK1通路和AKT/mTOR/4E-BP1通路上调eIF4E的活性,优先促进Snail和Twist mRNA的翻译,介导上皮-间充质转化,从而促进肝细胞癌的转移。这提示PKCβⅡ作为肝细胞癌治疗靶点的潜力。

蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ抑制心肌细胞一氧化氮合成中的作用

实验用硝酸还原酶法测定培养新生大鼠心肌细胞亚硝酸盐 (NO 2 )和硝酸盐 (NO 3)总量 (NO 2 /NO 3) ,反映心肌细胞一氧化氮 (NO)生成情况 ,观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对心肌细胞NO生成的影响及其蛋白激酶C (PKC)在该效应中的作用。结果显示 :AngⅡ可减少心肌细胞NO的含量 ,并具有明显的剂量 效应关系 ;AngⅡ受体拮抗剂saralasin可明显抑制AngⅡ对NO生成的影响 ;L 精氨酸 (L Arg)明显增加心肌细胞NO的浓度 ,此效应可被一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L NAME所抑制 ,L Arg未能消除AngⅡ抑制NO的作用 ;用佛波酯 (PMA)处理心肌细胞 ,其NO的生成明显减少 ,L NAME可加强此抑制效应 ;PKC抑制剂staurosporine (Stau)可明显削弱AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的效应。结果提示 :AngⅡ具有抑制心肌细胞NO生成的作用 ,此作用可能是通过抑制心肌细胞NOS的活性而实现的 ;AngⅡ受体介导AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的作用 ;激活PKC可使新生大鼠心肌细胞NO生成减少 ,NOS参与此抑制效应 ,新生大鼠心肌细胞NO生成过程的信号转导通路可能与PKC有关 ;PKC参与AngⅡ抑制心肌细胞NO的生成。

一氧化氮在血管紧张素Ⅱ激活蛋白激酶C中的作用

实验在培养新生大鼠心肌细胞中检测NO前体L 精氨酸 (L Arg)和NO供体硝普钠 (SNP)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )激活蛋白激酶C (PKC)的作用 ,以探讨心肌细胞PKC水平的信号转导途径。实验结果如下 :(1)无血清DMEM培养心肌细胞 2 4h后加入AngⅡ ,PKC活性呈剂量依赖性增高 ;(2 )培养基中加入L Arg ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;(3 )用L Arg 10 0 μmol/L进行预处理 ,3 0min后分别加入AngⅡ 0 1μmol/L或PMA 10μmol/L ,PKC活性均明显降低 ,与单纯AngⅡ组和单纯PMA组相比均有显著性差异 ;用NOS抑制剂L NAME预处理后 ,再加入L Arg ,可明显阻断L Arg对上述两个效应的影响 ;(4)培养液中加入NO供体SNP ,PKC活性呈剂量依赖性地降低 ;(5 )用SNP 10 μmol/L预处理心肌细胞 ,5min后分别加入AngⅡ或PMA ,PKC活性分别与单纯AngⅡ和单纯PMA组相比均明显降低。以上结果表明 ,AngⅡ能剂量依赖性激活PKC ,而NO可剂量依赖性抑制PKC活性 ;NOS参与L Arg抑制AngⅡ或PMA激活PKC的作用。这些观察提示 ,NO抑制AngⅡ对心肌细胞的作用可能是通过抑制PKC活性实现的 ,PKC可能是NO和AngⅡ在心肌细胞内信号转导的交汇点 (crosstalk)。

蛋白激酶CβⅡ (PKCβ2)抑制剂LY333531减少心肌梗死后心肌肥大细胞浸润

目的探讨蛋白激酶CβⅡ(PKCβ2)特异性抑制剂LY333531对心梗后心衰大鼠心肌组织中肥大细胞浸润的影响。方法利用左冠状动脉降支(LAD)结扎制备大鼠心梗模型,将手术4周后出现心衰的大鼠分为对照组和LY333531治疗组,分别给予生理盐水和LY333531处理6周,同时设置假手术组。检测各组大鼠体质量和各项心功能指标,采用天狼星红染色观察心肌组织胶原沉积情况,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞密度,ELISA检测血清中组胺和白细胞介素4(IL-4)的含量。结果与假手术组大鼠相比,手术后4周心衰大鼠(生理盐水组和LY333531组)左心室短轴缩短率(FS)显著减少,左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)以及左心室后壁厚度(PWT)明显增加;心肌组织可观察到胶原沉积、肥大细胞浸润,血清中组胺和IL-4的含量增加。与生理盐水对照组相比,经LY333531治疗6周后,FS、LVESD以及PWT明显改善;但是LVEDD的改善无显著性差别,胶原蛋白沉积降低约50%,心肌组织肥大细胞数减少,血清中组胺和IL-4的含量降低。结论使用LY333531选择性抑制PKCβ2能够通过抑制心肌炎症反应,改善心梗后心力衰竭模型大鼠心脏功能和抑制病理性心肌重塑。

血管紧张素Ⅱ对心肌成纤维细胞蛋白激酶Cε和蛋白激酶Cα表达及转位的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠心肌成纤维细胞(MFs)蛋白激酶Cε(PKCε)和蛋白激酶Cα(PKCα)的表达及转位的影响,并探讨这两种PKC亚型在心室重构中的作用。方法:以第2～4代MFs分实验组(加AngⅡ10-6mol/L)和对照组(不加AngⅡ)通过间接免疫荧光法观察PKC亚型ε和α在细胞内的分布和定位,Image-pro-plus4.0版专业图像处理软件对荧光强度进行半定量统计。结果:荧光显微镜下观察到对照组和实验组PKC亚型ε都存在于膜、胞浆和核-细胞骨架,实验组强度明显增强,尤以核-细胞骨架为甚;对照组PKC亚型α主要存在于核-细胞骨架,而实验组α亚型存在于膜、胞浆和核-细胞骨架,强度都明显增加,尤以核-细胞骨架为甚;且PKC亚型ε和α荧光强度半定量比较实验组均显著高于对照组(P<0.001)。结论:AngⅡ对PKC亚型ε和α在MFs的表达和转位有显著影响,提示PKC亚型ε、α可能在MFs信号转导过程中起重要作用。

P85磷酯肌醇-3激酶-蛋白激酶C-ζ复合物对血管紧张素Ⅱ激活平滑肌细胞p70核蛋白体S6激酶的调节作用

作者以前的研究发现蛋白激酶C ζ介导血管紧张素Ⅱ经Ras MEK途径激活血管平滑肌细胞丝裂素活化的蛋白激酶MAPK或细胞外信号调节激酶ERK1/ 2。本文研究了P85磷酯肌醇 3激酶 蛋白激酶C ζ复合物核蛋白体激酶p70S6激酶活性的调节作用及其信号传递途径。WesternBlot分析显示正常培养的血管平滑肌细胞表达p70S6激酶、p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ。 10 0nmol血管紧张素Ⅱ和 10 μg/L血小板源生长因子刺激并不影响p70S6激酶、p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ表达。p70S6激酶磷酸转移酶活性分析发现血管紧张素Ⅱ与血管平滑肌细胞作用 5min即开始激活p70S6激酶 ,2 0min达高峰 ,并呈剂量依赖性。磷酯肌醇 3激酶抑制剂wort mannin (10nmol)、蛋白激酶C ζ抑制剂PseudoZ (5 0 μmol)和p70S6激酶抑制剂rapamycin (10 0 μg/L)均可明显阻断血管紧张素Ⅱ诱导的p70S6激酶激活。有趣的是 ,我们观察到p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ受血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子刺激后均向Ras转位并与之结合 ,抗Ras抗体可将p85磷酯肌醇 3激酶或蛋白激酶C ζ混合沉淀 ,抗p85磷酯肌醇 3激酶抗体亦可使蛋白激酶C ζ沉淀下来。提示Ras、p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ三种蛋白结合在一起形成一个功能复合体 。

慢性应激抑郁大鼠脑内亚细胞成分蛋白激酶CβⅡ表达的变化

目的探讨慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠大脑皮层亚细胞成分蛋白激酶CβⅡ(PKCβⅡ)的表达水平以及三环类抗抑郁剂(TCAs)阿米替林、5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)氟西汀对其影响。方法24只Sprague-Dewley雄性大鼠随机分为抑郁模型组6只,阿米替林治疗组6只,氟西汀治疗组6只,正常对照组6只。采用慢性轻度不可预见性应激方法建立抑郁模型,将9种刺激随机安排到18d,每天1种,应激前以及应激18d末对各组大鼠进行敞箱实验及液体消耗实验,第19天起阿米替林组、氟西汀组分别每天腹腔注射阿米替林(10mg.kg-1.d-1)、氟西汀(10mg.k-g1.d-1)1次,模型组及对照组每天腹腔注射等体积生理盐水1次,均持续21d。用蛋白质免疫印迹法检测大鼠大脑皮层亚细胞成分PKCβⅡ的表达水平。结果抑郁大鼠大脑皮层细胞膜PKCβⅡ蛋白表达水平(230.57±62.86)较对照组(331.26±17.94)明显减少(P<0.05);抑郁大鼠大脑皮层细胞浆PKCβⅡ蛋白表达水平(286.43±56.92)与对照组(343.55±70.48)比较,有下降趋势,但差异无显著性(P>0.05)。阿米替林、氟西汀治疗3周后抑郁大鼠大脑皮层亚细胞成分PKCβⅡ表达水平无明显变化(P>0.05)。结论大脑皮层细胞膜PKCβⅡ蛋白表达水平明显下降可能是抑郁症发病的重要环节。阿米替林、氟西汀对抑郁大鼠大脑皮层亚细胞成分PKCβⅡ的蛋白表达水平没有影响。

丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠蛋白激酶C的影响

目的:观察丹参酮IIA对自发性高血压大鼠蛋白激酶C的影响,探讨丹参酮IIA防治高血压心肌肥厚的机制。方法:将18只8周龄的自发性高血压大鼠随机分成三组:一组于8周处死,另两组经腹腔分别注射丹参酮IIA和蒸馏水,共10周。测量大鼠尾动脉收缩压(SBP)及左心室重量指数(LVMI)。应用HE染色、免疫组织化学的方法,结合计算机图像分析技术,检测心肌细胞的直径和面积,以及蛋白激酶C(PKC)的表达。结果:与8周龄的自发性高血压大鼠相比,18周龄大鼠的SBP、LVMI、心肌细胞的直径和面积显著增加,PKC表达上调。丹参酮IIA可抑制LVH的发展和心肌组织PKC的表达,但收缩压无明显改变。结论:长期应用丹参酮IIA可预防自发性高血压大鼠左室肥厚的形成,其机制可能与丹参酮IIA能降低心脏蛋白激酶C的表达有关。

人非小细胞肺癌中蛋白激酶CβⅡ的表达与细胞凋亡的相关性研究

目的 探讨人非小细胞肺癌 (NSCLC)中蛋白激酶C(PKC) βⅡ的表达及细胞凋亡在肺癌发生、发展中的作用。方法 应用免疫组织化学LSAB法和TUNEL法检测了 119例人NSCLC组织、癌旁肺组织和 3 2例肺良性疾病肺组织中PKC βⅡ的表达和凋亡细胞。 结果 ( 1)NSCLC组织中PKC βⅡ表达水平( 85 .3 9%)显著高于癌旁肺组织 ( 65 .69%)和肺良性病变肺组织 ( 5 3 .2 2 %) (P <0 .0 5 ) ,癌旁肺组织中PKC βⅡ表达水平显著高于肺良性疾病肺组织 (P <0 .0 5 )。NSCLC组织中凋亡指数 ( 5 .2 7%)显著低于肺良性疾病肺组织 ( 15 .84%) (P <0 .0 5 )。 ( 2 )NSCLC组织中PKC βⅡ的表达水平与临床病理生理特征无明显关系 (P >0 .0 5 )。NSCLC组织的细胞凋亡水平与肺癌P TNM分期、原发肿瘤大小 (T)及淋巴结转移状态 (N)有密切关系 (P <0 .0 5 ) ,而与细胞分化程度、组织学类型 ,患者性别和年龄等均无明显关系 (P >0 .0 5 )。 ( 3 )PKC βⅡ的表达水平与细胞凋亡水平呈显著负相关 (P <0 .0 1)。结论 NSCLC中PKC βⅡ的异常激活和细胞凋亡受抑制在NSCLC发生、发展中可能起重要作用。PKC βⅡ介导的细胞增殖过度和凋亡受抑可能是NSCLC发生、发展的重要机理之一。

不同毛色小鼠背部皮肤中甘油二酯激酶ζ和蛋白激酶CβⅡ的表达和定位

背景:在皮肤和毛发色素形成机制中,未曾有甘油二酯激酶ζ(diacylglycerol kinaseζ,DGKζ)参与色素形成的相关报道。目的:探讨DGKζ、蛋白激酶CβⅡ(Protein Kinase CβⅡ,PKCβⅡ)在不同毛色小鼠背部皮肤中的表达、定位及其与毛色形成的相关性。方法:取2月龄白色、灰色和黑色小鼠各6只,去毛取背部皮肤,Real-time PCR检测小鼠背部皮肤中DGKζ、PKCβⅡmRNA表达;Western blotting检测小鼠背部皮肤中DGKζ、PKCβⅡ和p-PKCβⅡ蛋白表达;免疫组织化学ABC法染色检测DGKζ和p-PKCβⅡ表达。实验方案经山西医科大学动物实验中心伦理委员会批准。结果与结论:①DGKζ、PKCβⅡ在3种毛色小鼠背部皮肤中mRNA表达趋势一致,均为:灰色组>白色组;黑色组>白色组,其差异有显著性意义(P<0.05);②PKCβⅡ活性的p-PKCβⅡ/PKCβⅡ,其变化趋势与DGKζ在3种毛色小鼠背部皮肤中表达趋势一致:灰色组>白色组;黑色组>白色组,其差异有显著性意义(P<0.05);③DGKζ和p-PKCβⅡ在灰色和黑色小鼠背部皮肤毛囊的外根鞘、毛母质细胞及毛母质的黑素细胞呈阳性表达,而在白色小鼠背部皮肤毛囊的外根鞘、毛母质细胞及毛母质的黑素细胞呈阴性表达;④结果说明,DGKζ、PKCβⅡ在黑、灰和白色小鼠背部皮肤中的表达与定位提示它们可能参与毛色的形成。

低氧肺动脉高压大鼠蛋白激酶CβⅡ蛋白表达及膜转位水平的变化

目的 建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型并初步探讨蛋白基酶CβⅡ（PKCβⅡ）在慢性低氧性肺动脉高压的发生发展过程中所起的作用.方法 建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将清洁级SD大鼠,随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,检测大鼠右心室收缩压（right ventricle systolic pressure,RVSP）和右心室肥厚指数（right ventricle hypertrophy index,RVHI）,采用HE染色观察肺动脉病理学改变,Western blotting方法检测大鼠肺动脉内PKCβⅡ蛋白表达和膜转位水平的变化.结果 （1）与正常对照组相比,低氧暴露1d、3d、7d、14d、21d后RVSP均明显上升（P＜0.05）; RVHI低氧3d、7d、14d、21 d组较正常对照组明显上升（P＜0.05）;低氧暴露3、7和21 d组肺动脉病理学改变明显.（2）PKCβⅡ蛋白的表达量在慢性低氧3d、7d、14d和21 d与正常对照组相比明显降低（P＜0.05）,慢性低氧3d后PKCβⅡ膜转位水平较正常对照组明显下降（P＜0.05）.结论 PKCβⅡ蛋白表达和膜转位水平的下调可能参与了大鼠慢性低氧性肺动脉高压的发生和发展过程.

蛋白激酶CβⅡ与原发性肝癌的研究进展

综述了蛋白激酶C的分类及其亚型,蛋白激酶C-βⅡ的结构、激活、细胞信号传导、抑制凋亡作用及与肿瘤的关系.

蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生促进肝癌发展

目的探讨蛋白激酶CβⅡ(PKCβⅡ)在肝细胞癌(HCC)发展中的作用机制。方法免疫印迹法观察PKCβⅡ在肝细胞系L02和肝癌细胞系SK-hep1、Hep G2、BEL-7404、7721、Hep3B和huh7中的表达,构建稳定高表达PKCβⅡ的细胞系,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫荧光观察E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达的变化;通过免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和放线菌酮(CHX)追踪实验,观察PKCβⅡ调控E-cadherin、N-cadherin和Snail表达的分子机制;小室迁移和侵袭实验(transwell assay)以及裸鼠尾静脉注射观察PKCβⅡ对肝癌细胞转移的影响;成管实验观察PKCβⅡ对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成能力的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)观察PKCβⅡ对肝癌细胞上清中血管内皮生长因子A(VEGFA)含量的影响。结果 PKCβⅡ在肝癌细胞系中的表达高于肝细胞系L02,PKCβⅡ促进肝癌细胞形态从鹅卵石样上皮细胞向梭行间质样细胞的转变,通过mRNA水平下调E-cadherin(P <0. 05)和上调N-cadherin(P <0. 01)的蛋白表达,通过翻译水平上调Snail蛋白表达,PKCβⅡ还促进了肝癌细胞的迁移、侵袭(P <0. 01)以及VEGFA的分泌(P <0. 01)和血管新生(P <0. 01)。结论蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生在肝癌的发展中有重要作用。

蛋白激酶CβⅡ通过IL-6自分泌途径促进肝细胞癌侵袭的研究

背景与目的:肿瘤微环境中存在的炎性因子参与肿瘤的生长及转移,蛋白激酶CβⅡ(protein kinase CβⅡ,PKCβⅡ)能否通过调节炎性因子参与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的侵袭尚不清楚。研究PKCβⅡ对HCC侵袭的作用及相关机制,深入探讨PKCβⅡ与肿瘤炎性微环境之间的关系。方法:收集PKCβⅡ高表达细胞的条件培养基处理HCC细胞,采用transwell法检测细胞的侵袭情况,采用细胞因子抗体芯片检测上清液中细胞因子的变化,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测PKCβⅡ高表达对白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)上清液中含量及转录的影响,采用transwell法检测IL-6中和抗体及IL-6受体(IL-6 receptor,IL-6R)中和抗体对PKCβⅡ高表达诱导HCC细胞侵袭的影响,采用Western blot检测信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、P-STAT3的蛋白表达,采用非参数Spearman检验分析HCC组织中PKCβⅡ和IL-6表达的相关性。结果:采用PKCβⅡ高表达细胞的条件培养基处理可以提高HCC细胞Huh7(P<0.01)和Hep3B(P<0.05)的侵袭能力;PKCβⅡ高表达显著提高上清液中IL-6的含量(P<0.01)及IL-6的转录(P<0.01);IL-6中和抗体及IL-6R中和抗体均可以抑制PKCβⅡ介导的HCC细胞侵袭能力的增加(P<0.01),P-STAT3蛋白表达升高(P<0.05);HCC组织中PKCβⅡ和IL-6的表达呈正相关(r=0.697,P<0.01)。结论:PKCβⅡ通过IL-6自分泌途径促进HCC细胞的侵袭。

蛋白激酶C-βⅡ对SMMC-7721人肝癌细胞增殖的影响

目的研究蛋白激酶C-βⅡ对SMMC-7721人原发性肝癌细胞增殖的影响.方法体外基因扩增获得pcDNA3/PKCβⅡ真核表达质粒.脂质体介导pcDNA3/PKCβⅡ基因体外转导人原发性肝癌SMMC-7721细胞,分为实验组(pcDNA3/PKCβⅡ)、对照组(pcDNA3空载体)及空白对照组.细胞计数、MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪等方法检测PKCβⅡ对SMMC-7721人原发性肝癌细胞增殖的影响.结果细胞生长曲线检测结果显示转导入PKCβⅡ的SMMC-7721细胞数目明显增加;MTT法显示转染PKCβⅡ的人原发性肝癌细胞SMMC-7721的OD值增加(P<0.01);细胞形态学观察实验组SMMC-7721细胞间连接紧密,巨核、双核、多核、奇异型的核也明显增加,核分裂像增多,特别是出现不对称、多极性及顿挫性等病理性核分裂像尤为明显;流式细胞仪检测显示转导PKCβⅡ的SMMC-7721细胞细胞周期中S期细胞明显增多.结论PKCβⅡ可促进SMMC-7721细胞增殖,其机制可能与促进细胞DNA合成相关.

结肠腺癌中蛋白激酶C亚型的表达及意义

目的探讨蛋白激酶C(PKC)α、βⅡ、ε、ζ在结肠腺癌中的表达及与结肠腺癌发生、发展及转移的关系。方法选择2010年4月至2012年8月大庆油田总医院收治的82例原发性结肠腺癌患者的手术切除标本,其中管状腺癌52例,黏液腺癌30例;淋巴结转移39例,无淋巴结转移43例。采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测癌组织标本中PKCα、βⅡ、ε、ζ蛋白的表达。结果 52例结肠管状腺癌中,PKCα、βⅡ、ζ3个亚型的阳性表达率在高、中、低各分化组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05);而PKCε亚型的阳性表达率在高、中分化组之间以及中、低分化组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05),但高分化组的阳性表达率显著低于低分化组(χ2=31.523,P<0.05)。黏液腺癌组织中PKCα、βⅡ的阳性表达率显著低于管状腺癌组织(P<0.05),而PKCε的阳性表达率则显著高于管状腺癌组织(P<0.05);黏液腺癌组织与管状腺癌癌组织中PKCζ的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。原发性结肠腺癌患者中无淋巴结转移者癌组织中PKCα的阳性表达率显著高于有淋巴结转移者(P<0.05);无淋巴结转移者癌组织中PKCβⅡ、ε、ζ的阳性表达率与有淋巴结转移者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PKC各亚型在结肠腺癌发生、发展和转移中的作用不同,PKCε在结肠管状腺癌中的表达与分化有关,PKCε可能参与了黏液腺癌的黏液分泌,PKCα、βⅡ可能与结肠管状腺癌的细胞增殖有关;PKCα与结肠腺癌淋巴结转移有关。

大鼠尾加压素II收缩大鼠肺动脉干与蛋白激酶C通路相关性研究

目的研究大鼠尾加压素-Ⅱ（RUII）收缩大鼠离体肺动脉干环与细胞信号转导通路蛋白激酶C通道的关系。方法从雄性Sprague—Dauley大鼠中分离出肺动脉干，切成3—4mm的血管环，用RUII（10nmol／L）预收缩血管达坪台期后，加入蛋白激酶C通道阻断剂H-7，制备H-7（0．1-100μmol／L）浓度一效应舒张曲线，最后分别计算EC50和Emax。结果H-7呈浓度依赖性舒张大鼠RUII预收缩的肺动脉干-log[EC50]=5．26±0．36，Emax=（97．21±17．86）％。结论细胞信号转导通路蛋白激酶C通道的激活参与大鼠尾加压素-Ⅱ收缩大鼠肺动脉干效应。

抑制肾素-血管紧张素系统对糖尿病大鼠心脏蛋白激酶C表达的影响

目的:研究抑制肾素-血管紧张素系统(RAS)对糖尿病大鼠心脏蛋白激酶C-alpha(PKCα),蛋白激酶C-betaⅡ(PKCβⅡ)表达的影响,探讨抑制RAS减少糖尿病心血管事件的机制。方法:用链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型,随机分为(1)糖尿病对照组,(2)糖尿病贝那普利干预组(10mg·kg^(-1)·day^(-1)),(3)糖尿病厄贝沙坦干预组(40mg·kg^(-1)·day^(-1)),(4)正常对照组。干预4周后用免疫组织化学方法对心脏组织PKCα、PKCβⅡ半定量测定,并进行对比分析。结果:与正常对照组相比,糖尿病组心脏PKCα、PKCβⅡ的表达增加。贝那普利,厄贝沙坦均能显著降低糖尿病心脏PKCα、PKCβⅡ的表达,且厄贝沙坦组PKCβⅡ表达比贝那普利降低更明显。结论:①PKC途径是糖尿病心血管并发症的机制之一;②抑制RAS减少糖尿病心血管事件可能与其调节PKC的表达有关。

钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅡδRNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响

目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ(Ca2+/Calmodulin dependent kinaseⅡδ,Ca MKⅡδ)RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响,以证实其在破骨细胞分化中的作用。方法应用慢病毒构建Ca MKⅡδRNA干扰载体,并确定最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)值及转染效率。小鼠RAW264.7细胞分为对照组、空白载体组和干扰组。转染5 d后收获细胞,确定干扰效率;并检测RNA干扰对活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、非受体酪氨酸激酶(c-Src)基因表达及破骨细胞分化的影响。结果成功构建了Ca MKⅡδRNA干扰载体,最佳转染MOI值为30,转染效率可达78%(P<0.05)。重组病毒对Ca MKⅡδ的干扰效率在mRNA水平超过78%,在蛋白水平超过70%(P<0.01)。Ca MKⅡδRNA干扰显著降低NFATc1、TRAP和c-Src基因,与对照组、空白载体组比较,其mRNA水平下降分别超过了47.8%、43.3%和48.5%(P<0.05,P<0.01),蛋白相对水平分别超过了61.1%、48.2%和39.6%%(P<0.01);免疫荧光细胞化学检测也得到相似结果。Ca MKⅡδRNA干扰也显著降低了破骨细胞生成及骨吸收功能;与其他两组比较,干扰组破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数目和面积下降分别超过了49.8%、47.6%和61.3%(P<0.01)。结论 Ca MKⅡδRNA干扰可显著下调其下游NFATc1、TRAP、c-Src基因表达并抑制破骨细胞分化;Ca MKⅡδ在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用。