抗菌药物体外联合药物敏感性试验方法

近年来,多重耐药菌(MDR)日益流行,但相关治疗方法有限,抗菌药物相互作用相关研究成为热点。体外联合药物敏感性试验可以判断2种及以上抗菌药物是否有协同作用,为临床联合使用抗菌药物提供参考。目前,临床常用体外联合药物敏感性试验方法有时间-杀菌曲线(TKA)、棋盘稀释法(CB)、E试验和纸片法。文章就上述方法进行综述,为临床应用提供参考。

基因芯片和比例法药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究

目的比较基因芯片和比例法药物敏感性试验在检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性中的应用,探讨快速诊断耐多药结核病(MDR-TB)的方法。方法从改良罗氏培养基上分离的327株菌株,分别用基因芯片检测MTB对RFP和INH耐药相关的rpoB、katG和inhA基因上8个位点的基因突变,从而判断其耐药性;同时用比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP和INH耐药性,比较2种方法的符合率。进一步从二者RFP或/和INH结果不符的标本中随机选出16株菌株做DNA序列测定,比较二者与DNA测序的符合率。结果基因芯片和比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP耐药性符合率为93.27%,对INH耐药性符合率为95.11%,RFP和INH的总符合率为90.52%;二者对MDR-TB的检出率分别为18.65%和18.96%。基因芯片与DNA测序比较,RFP耐药性符合率为81.25%,INH耐药性符合率为100.00%;比例法药物敏感性试验与DNA测序比较,RFP耐药性符合率为50.00%,INH耐药性符合率为37.50%。结论基因芯片检测MTB对RFP和INH的耐药性较比例法药物敏感性试验有更高的敏感性和特异性,对MDR-TB的快速诊断具有重要临床价值。

应用配对四格表资料的X^2检验对比例法和绝对浓度法检测结核分枝杆菌药物敏感性试验的评价

目的应用配对四格表资料的X^2检验对比例法与绝对浓度法检测结核分枝杆菌的药物敏感性试验作评价。方法用比例法与绝对浓度法分别对60株WHO质控菌株和66株临床菌株进行四种药物(INH、SM、RFP、EMB)耐药性的测定。

肉汤微量稀释法对耐多药结核分枝杆菌敏感性检测的评价

目的评价肉汤微量稀释(BMD)法在耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)敏感性检测中的应用效果。方法采用罗氏比例法和BMD法对海南省108株MDR-MTB及11株非MDR-MTB菌株进行药敏试验,并对两种药敏方法检测结果不一致菌株进行全基因组测序(WGS)。结果罗氏比例法和BMD法药敏结果平均判读时间分别为28.0、8.5 d。罗氏比例法检测异烟肼、利福平、乙胺丁醇、卡那霉素和卷曲霉素的耐药率高于BMD法(均P<0.001);BMD法检测丙硫异烟胺和对氨基水杨酸的耐药率高于罗氏比例法(均P<0.001)。以罗氏比例法药敏结果为金标准,BMD法检测耐药性的灵敏度和特异度分别为50.00%~100%、95.69%~100%,除EMB(87.39%)、INH(94.96%)外,BMD法检测其他药物的耐药性符合率均≥95%。罗氏比例法药敏结果与WGS总符合率为76.19%(32/42),BMD法药敏结果与WGS总符合率为23.81%(10/42),差异具有统计学意义(χ^(2)=23.048,P<0.001)。两种药敏方法检测结果不一致的MTB共34株,罗氏比例法耐药+BMD法敏感的26株MTB中,22株(84.62%)相关耐药基因发生突变;罗氏比例法敏感+BMD法耐药的11株MTB中,5株(45.45%)相关耐药基因发生突变。结论BMD法是一种准确、快速的MDR-MTB敏感性检测方法,但仍需要进一步改进和优化,耐药性与相关耐药基因的突变密切相关。

鲍曼不动杆菌常用药物敏感性试验方法之间的差异比较

目的:比较鲍曼不动杆菌抗生素敏感性试验全自动微生物鉴定及药敏分析系统VITEK-2、纸片扩散法与微量肉汤稀释法检测结果之间的差异。方法:收集2011年4月至2012年2月临床分离的非重复鲍曼不动杆菌42株,采用微量肉汤稀释法、纸片扩散法和(或)VITEK-2药敏分析系统对临床常用的头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、多西环素、阿米卡星及替加环素这5种抗生素进行敏感性试验,比较后者检测结果与微量肉汤稀释法的符合性。结果:以微量肉汤稀释法作为参考,利用VITEK-2系统检测时,总误差分别为阿米卡星85.7%,亚胺培南14.3%;利用纸片扩散法检测时,总误差分别为替加环素71.4%,头孢哌酮/舒巴坦26.2%,多西环素19.0%,阿米卡星14.3%,亚胺培南11.9%。结论:鲍曼不动杆菌的药敏检测中VITEK-2系统和(或)纸片扩散法药敏与微量肉汤稀释法之间存在差异,微量肉汤稀释法仍是首选检测手段。

比例法与绝对浓度法测试结核分枝杆菌药物敏感性探讨

目的探讨比例法与绝对浓度法测试结核分枝杆菌药物敏感性结果的一致性。方法用绝对浓度法和比例法同时对2946株结核分枝杆菌进行4种抗结核药物(RFP、EMB、SM、INH)的耐药性测定。结果RFP、EMB、SM、INH用绝对浓度法与比例法药敏测试结果一致率分别为:97.8%、96.7%、94.3%、92.3%。经统计学检验,两种方法测试2 946株菌株4种药物敏感性结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论绝对浓度法与比例法进行结核分枝杆菌测定总的一致率较高,但差别有统计学意义,在进行耐药性评价时应考虑药敏方法是否一致。

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌对万古霉素药物敏感性试验的方法学比较

目的比较不同药敏试验方法测定万古霉素对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)抗菌活性的影响。方法收集2013年临床分离的61株MRSA,采用微量肉汤稀释法、琼脂稀释法和E试验法对MRSA进行万古霉素药敏试验的测定。根据CLSI 2014年版标准进行结果判断。采用SPSS软件对3种药敏试验所得万古霉素最低抑菌浓度(MIC)值进行分析。结果MRSA对万古霉素的敏感率均为100%,未见万古霉素不敏感株。微量肉汤稀释法和琼脂稀释法测定万古霉素对MRSA的MIC50和MIC90值均为1 mg/L,采用E试验法测定的MIC50和MIC90值均为1.5 mg/L。3种药敏试验得到的MIC几何平均值分别为1.01(微量肉汤稀释法)、0.96(琼脂稀释法)和1.30(E试验法)。结论 3种药敏方法检测MRSA对万古霉素的敏感性结果虽一致,但由于万古霉素MIC值的细小差异在临床疗效上有着显著差异,故实验室为临床提供万古霉素药敏试验结果时,需要明确指出采用的具体药敏试验测定方法。

间接比例法检测结核杆菌药物敏感性试验影响因素探讨

目的:探讨间接比例法检测结核杆菌药物敏感性试验的影响因素。方法:通过对我室2009、2010年两次参加国家结核病参比室组织的结核杆菌药物敏感试验室间质评的结果进行比较与分析,找出影响实验成败的关键因素包括含药培养基配制的质量控制、实验过程的规范化、环境温度的实时监测、结果观察及判断等等,为以后的实验提供技术支持。结果:2010年与国家结核病参比室的药敏结果符合率比2009年有较大的提高。结论:培养基的质量、培养的温度和操作人员的技术娴熟程度均会影响药敏试验结果。

SRB显色法用于抗癌药物敏感性试验的研究

采用 SRB显色法对在 96孔培养板中短期培养的人大肠癌细胞株 Colo2 0 5、人骨肉瘤细胞株 OS732、人舌癌细胞株 Tca81 1 3经 5- FU、顺铂、蟾酥等药物处理后的活性进行了研究 .结果表明 ,SRB法对这些细胞株的体外抗癌药物敏感试验结果稳定 ,该法与其它细胞毒试验相比有一定优点 。

肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验及质量控制介绍

美国临床实验室标准化委员会（NCCLs）于1997年公布了肉汤稀释法酵母菌抗真菌药物敏感性试验参考方法（M27-A），并于2002年进行了修订（M27-A2）。下面简要介绍肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验方法及质量控制。

不同药敏试验方法检测耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对替加环素敏感性的效能评价

目的 评价4种药敏试验检测耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对替加环素敏感性的准确性,为临床微生物实验室探寻一种简便易行、结果可靠的替加环素敏感性检测方法。方法 收集2020年8月至2022年3月临床分离的非重复耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌211株(肺炎克雷伯菌96株、大肠埃希菌48株、鲍曼不动杆菌62株和阴沟肠杆菌5株),采用仪器法、E-test法、纸片扩散(KB)1法(加复敏液)和KB2法(不加复敏液)检测细菌对替加环素的敏感性,分析其与肉汤微量稀释法(BMD法,参考方法)结果间的差异。结果 E-test法和KB1法分别检测4种细菌的药敏结果与BMD法比较差异无统计学意义(P>0.05),一致性好,基本一致率(EA)、分类一致率(CA)、微小误差(mE)和重大误差(ME)均在可接受范围,未发现非常重大误差(VME)。仪器法检测大肠埃希菌和阴沟肠杆菌的药敏结果与BMD法一致性较好,而检测肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的药敏结果则一致性较差,ME超出可接受范围,尤其检测鲍曼不动杆菌的药敏结果还同时存在mE偏高(11.3%)。KB2法除大肠埃希菌外,检测其余菌种的药敏结果与BMD的一致性都不理想。结论 E-test和KB1法能够较可靠地检测所研究细菌对替加环素的敏感性。对于肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌,仪器法检测结果接近折点的菌株可推荐使用E-test法复查,这对于当地细菌感染治疗具有一定参考价值。

细胞凋亡检测用于卵巢癌化疗药物敏感性试验及其与ATP法的比较

目的 探讨细胞凋亡检测用于卵巢癌化疗药物敏感性试验的可行性。方法 采用末端标记法直接检测顺氯胺铂等 6种化疗药物诱导 4例卵巢癌实体瘤细胞凋亡的结果 ,并与三磷酸腺苷生物发光法 (ATP法 )检测结果进行对比。结果 同一种化疗药物对不同来源的癌细胞的细胞凋亡诱导程度不同 ,与 ATP法比较二者的检测结果存在一致性 (P0 =0 .75 )。结论 上述结果提示 ,细胞凋亡检测能直接用于了解药物诱导肿瘤细胞凋亡的程度 ,若作为一种药物敏感性试验方法与 ATP法组合应用 。

EUCAST和CLSI微量肉汤稀释法白念珠菌体外药物敏感性试验结果比较

目的比较欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST)和美国临床实验室标准化协会(CLSI)微量肉汤稀释法白念珠菌体外药物敏感性试验结果的差异。方法分别用EUCAST方法和CLSI方法检测42株白念珠菌对两性霉素B、阿尼芬净、卡泊芬净、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑和米卡芬净的敏感性,比较2种方法的基本一致性(EA)、分类一致性(CA)、极重大误差率(VME)和重大误差率(ME)。结果EUCAST方法和CLSI方法总体EA为95.2%~100.0%,CA为95.2%~100.0%,ME为0%~4.8%,VME为0%~2.4%;氟康唑的ME为4.8%,泊沙康唑的VME为2.4%。结论EUCAST方法和CLSI方法白念珠菌体外药物敏感性试验结果具有可比性,但部分药物之间需要额外的协调步骤。

离体抗菌药物敏感性试验常用的两种检测方法(2)

即为拟测定药敏敏感性的病微生物。需要注意的是，因为不同的致病微生物对同种药物的敏感性是不相同的，药敏纸片法测定相同药物对不同种类的致病微生物的抑菌效果时，可能会观察到直径不同大小的抑菌环。如果致病微生物不纯，该供试微生物在试验中所产生的抑菌环与纯培养状态下所产生的抑菌环大小差异比较大，

比例法和绝对浓度法对结核分支杆菌药物敏感性测定的对比研究

目的 对比研究比例法和绝对浓度法测定结核分支杆菌的药物敏感性。方法 按照中国防痨协会《结核病诊断细菌学检验规程》 ,对 10 4株结核分支杆菌分别采用比例法和绝对浓度法检测药物敏感性。结果 比例法及绝对浓度法对耐药病例检出率及耐多药结核 (MDR -TB)检出率分别为 84.6 %、5 0 .0 %及 5 3.8%、40 .4% ,(P <0 .0 1)。比例法对链霉素 (SM)、异菸肼(INH)、利福平 (RFP)、乙胺丁醇 (EMB)、对氨基水杨酸钠 (PAS)等敏感与绝对浓度法符合率分别为 88.2 %、10 0 .0 %、10 0 .0 %、95 .0 %、96 .8%。两种检测方法对SM、INH、RFP、EMB、PAS各药的符合率分别为 88.5 %、84.6 %、80 .8%、6 3.5 %、73.1%。结论比例法结果精确 ,具有可比性。

离体抗菌药物敏感性试验常用的两种检测方法(中)

（3）待测致病微生物：即为拟测定药敏敏感性的病原微生物。需要注意的是，因为不同的致病微生物对同种药物的敏感性是不相同的，药敏纸片法测定相同药物对不同种类的致病微生物的抑菌效果时，

不同方法检测黏液型铜绿假单胞菌药物敏感性结果准确性探讨

目的探讨黏液型铜绿假单胞菌(PA)药物敏感性检测方法准确性,以找出适合临床开展的、准确的药物敏感性检测方法。方法分别用药物敏感性纸片琼脂扩散法(K-B法)、假单胞菌和非发酵菌药物敏感性试剂盒(ATB PSE5)、仪器法(MicroScan WalkAway 96 plus和VITEK 2)和微量肉汤稀释法同时检测66株黏液型PA,以微量肉汤稀释法作为参考方法,其余方法作为测试方法进行对照分析。结果 K-B法与微量肉汤稀释法的完全符合率(CA)为92.63%,严重错误(VME)为0.30%,重大错误(ME)为3.13%,一般错误(MIE)为3.94%;ATB PSE5与与微量肉汤稀释法的CA为88.89%,VME为0.83%,ME为5.83%,MIE为4.44%;MicroScan仪器法与微量肉汤稀释法的CA为89.38%,VME为0.34%,ME为5.19%,MIE为5.07%。VITEK 2因结果缺失严重未进行比较。结论临床常用检测PA药物敏感性的方法中,以K-B法检测黏液型PA最为可靠,但应延长孵育时间至48 h或放至CO2孵箱24 h后读取结果更为直观、准确。

大肠杆菌和益生菌对抗生素和化学药物的敏感性试验

用试管二倍稀释法、试管稀释涂布法检测大肠杆菌、嗜酸乳杆菌对常用饲料药物添加剂和治疗用抗生素的敏感性 ,结果表明饲料药物添加剂和治疗药物对大肠杆菌和沙门氏杆菌无效或产生明显的抗药性 ,却对外源的益生素乳杆菌很敏感 ;痢菌净、庆大霉素等抗生素对大肠杆菌较敏感 ,但在MIC浓度庆大霉素培养基连续传代2 4 0h ,大肠杆菌对庆大霉素MIC大幅度提高。这提示使用乳杆菌时 ,不可同时使用敏感药物 ;治疗时要选择敏感药物 ,控制抗药性。