沙门氏菌传统血清凝集分型和分子血清分型试剂盒方法比较

目的验证沙门氏菌血清分型试剂盒的适用性,考核本实验室传统沙门氏菌血清分型技术,扩充沙门氏菌的分型方法,寻找更有效、更快捷的沙门氏菌分型方法。方法保存的样品菌株库中随意挑选33株沙门氏菌和6株标准菌株,首先确证为沙门氏菌,然后分别采用传统的玻片血清凝集方法和分子血清分型试剂盒对其进行分型,最后采用16S rRNA系统发育树对试验菌株进行聚类分析。结果2种分型手段的匹配率高达94.9%,其中YP 281 Salmonella havana和YP 639 Salmonella liverpool没有匹配到,这2株菌在试剂盒数据库中不存在,但本实验利用传统血清分型手段可以对这2株菌进行准确分型,其中YP 281是本实验室对GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》表B.1外成功分型的沙门氏菌。结论本实验室传统血清凝集分型技术合格。沙门分子血清分型试剂盒具有较好的适用性,能更快速、更方便对沙门氏菌进行分型。

沙门菌血清分型方法的比较

血清分型是沙门菌最基本和最重要的流行病学调查手段,不同血清型沙门菌引起的临床症状和造成的危害不同,快速准确地进行血清分型对于畜禽沙门菌病的防控和公共卫生安全意义重大。基于此,本试验选择我国1971—2020年分离的51株沙门菌(13种血清型),分别用全基因组测序(WGS)分型方法和液相芯片分型方法进行血清分型,并与玻片凝集法进行比较,分析3种分型方法的优劣。结果显示,玻片凝集法测得51株沙门菌的血清分型结果与原始结果一致;WGS分型方法和液相芯片分型方法分别测得34株和23株沙门菌血清分型与玻片凝集法结果一致。3种分型方法相比,WGS分型方法可鉴定出玻片凝集法和液相芯片分型方法无法分型的菌株,在操作时间和成本上更具优势。本试验可为沙门菌的血清分型研究提供参考。

绿脓杆菌国际抗原分型系统(IATS)-20型血清的试制及应用

本文根据“绿脓杆菌IATS补充三株新血清型菌株的建议”,将3株新菌株加入到IATS中,使IATS由17个血清型发展为20个血清型,并中量试制3批IATS-20血清,经检定符合新制定的“绿脓杆菌分型血清制造及检定规程”要求。为此,曾将3批分型血清赠送给国内外有关实验室进行应用考核,现收到4个国家10个实验室的应用考核结果,共计检定了1685株绿脓杆菌,其总的分型率为97.51％,所加入的3个新血清型菌株占分离菌株数的3.62％,但巴基斯坦和美国较多,分别为9.64％和7.(?)％,说明加入此3个血清型十分必要。

沙门菌快速血清分型策略的应用

为建立一种对临床沙门菌株进行快速血清分型的策略,本研究尝试将玻片凝集法和液相芯片法进行联合应用。首先利用玻片凝集法对467株动物源沙门菌进行鉴定,然后对不能直接利用玻片凝集法鉴定血清型的沙门菌采用液相芯片法进行补充鉴定。结果显示,利用玻片凝集法可以直接检测409株沙门菌的O抗原和H抗原,包含49种血清型;结合液相芯片法在1 d内完成了其余58株沙门菌的O抗原和H抗原单因子的鉴定,共涉及10种血清型。结果表明,玻片凝集法具有快速鉴定O抗原优势,液相芯片法具有快速鉴定H抗原优势,2种方法结合应用的策略可以快速、高效地实现沙门菌血清分型的目的,可作为沙门菌血清型快速鉴定方案并予以推广。

RT-PCR法在沙门菌检测及血清分型鉴定中的应用价值研究

目的研究实时荧光聚合酶链反应检测技术(RT-PCR)法在沙门菌检测及血清分型鉴定中的应用价值。方法选取2021年5月至2023年5月本中心采集的公共场所从业人员肛门拭子3869份,所有肛门拭子样本均采用玻片凝集法、RT-PCR法检测。分析玻片凝集法检测结果,以玻片凝集法检测结果作为金标准,计算RT-PCR法检测沙门菌灵敏度、特异度、准确度及RT-PCR法检测结果与玻片凝集法检测结果的一致性,分析玻片凝集法、RT-PCR法鉴定沙门菌血清分型结果。结果3869份肛门拭子标本经玻片凝集法检测出沙门菌41株,阳性检出率为1.06%(41/3869);RT-PCR法检测沙门菌的灵敏度为95.12%(39/41)、特异度99.92%(3825/3828)、准确率99.87%(3864/3869);RT-PCR法检测沙门菌结果与玻片凝集法检测结果一致性极好(Kappa=0.939,P<0.05);玻片凝集法、RT-PCR法鉴定沙门菌血清分型完全一致的有鼠伤寒沙门菌、德尔卑沙门菌、姆班达卡沙门菌、里森沙门菌、布伦登卢普沙门菌、火鸡沙门菌、阿尔巴尼沙门菌、鸭沙门菌;RT-PCR法检测误诊的3株沙门菌血清分型分别是吉韦沙门菌、伦敦沙门菌、肠炎沙门菌;RT-PCR法检测漏诊的2株沙门菌血清分型分别是山夫登堡沙门菌、婴儿沙门菌。结论RT-PCR法检测沙门菌灵敏度与特异度均较高,有利于准确检出沙门菌,明确鉴定沙门菌血清分型。

广西地区空肠弯曲菌的血清型

本文以加拿大Lior博士提供的标准抗血清,采用快速玻片凝集法对广西地区人、畜、禽所携带的38株空肠/结肠弯曲菌进行血清学分型鉴定,结果(见表1)是人源菌2株均为血清第8型;鸡源菌16株分别为血清第1、4、8、11、17、21型,不能分型3株;鸭源菌11株,分别为血清第5、8、20、21、46、53型,不能分型2株;豚鼠源菌7株,分别为血清第4、6、7,8、21型;鸽子源菌2株分别为血清第5型和21型,各源菌株中,与人源血清型相同(第8型)的鸡源株占25％;鸭源株占18.2％;豚鼠源株占42.8％,以上研究说明这些动物与人感染空肠/结肠弯曲菌有密切关系,家禽是人感染的重要贮存宿主之一。

炭血清玻片凝集试验诊断军团病杆菌的实验研究

本文报道用炭血清玻片凝集试验诊断LDB,实验证明该法是一种简便、快速、特异的诊断方法.利用本法能检查标本中全菌抗原和可溶性抗原,并可对LDB作玻片凝集试验进行血清分型和纯菌的初步鉴定.实验指出制备理想的LDB炭血清,必须免疫质量好,效价高的血清,可提高试验的敏感性,才能获得满意的结果.

一种基于PCR技术的沙门氏菌血清分型试剂盒与传统血清分型方法比较

目的 评估一种基于PCR技术的沙门氏菌快速血清分型试剂盒效用,并与传统血清学分型鉴定方法进行对比,为研究人员提供一种更高效、简便的沙门氏菌血清学鉴定分型方法。方法 从本实验室菌株库中选取59株沙门氏菌,分别采用沙门氏菌血清分型PCR试剂盒和传统血清凝集法对所有菌株进行分型鉴定,比对两种分型方法的符合率。结果 59株沙门氏菌均通过传统血清凝集方法完成分型,分型率100%。59株菌株均通过沙门氏菌血清分型PCR试剂盒成功分型,分型率100%,两种方法鉴定沙门血清型符合率100%。结论 沙门氏菌血清分型PCR试剂盒能达到较高的分型率,大大缩短检测时间,减少常规血清分型的工作量及昂贵的血清消耗,节约成本,可以作为一种沙门氏菌快速血清分型方法进行应用。

杭州某幼儿园健康儿童流感嗜血杆菌携带状况及其血清分型

目的了解健康儿童不同月份流感嗜血杆菌的携带状况及血清分型。方法对2002年9月至2003年6月杭州某甲级幼儿园2～5岁的入托儿童随机进行每周1次的咽拭子培养,用V因子、X因子试验鉴定流感嗜血杆菌,用玻片凝集法进行血清分型,用纸片扩散法进行药敏试验。结果连续10个月中受检儿童848例,217例(占25.6%)携带流感嗜血杆菌,其中1月份的携带率最高,达34.8%,6月份的携带率最低,为12.6%,儿童在12月、1月、2月、3月4个月中的总携带率显著高于其他6个月(χ2=10.95,P<0.001)。217例携带者共分离到223株流感嗜血杆菌,不可分型菌株180株,占80.7%;可分型菌株占19.3%(43株),包括a型4株,c型2株,d型35株,e型1株和f型1株,未分离到b型流感嗜血杆菌。61株(27.4%)菌株产生β内酰胺酶,28.6%的菌株对氨苄西林耐药,且不可分型菌株对氨苄西林的耐药率显著高于可分型菌株(χ2=4.19,P<0.05)。结论本研究中健康儿童对流感嗜血杆菌的携带率以12月、1月、2月和3月份为高,可分型流感嗜血杆菌以d型占绝对优势,新型菌苗的研制已成为一项紧迫的任务。

实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清鉴定中的应用

目的 探究实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清分型中的应用。方法 选取2010—2015年无锡市健康从业人员肠道分离得到的144株沙门菌,分别采用传统玻片凝集法和实时荧光PCR法进行血清分型,以前者为金标准,比较两种方法的一致性。结果 144株沙门菌利用传统玻片凝集法均可分型,共鉴定出28个型别。两种方法鉴定结果一致的有134株菌,符合率为93.06%,Kappa值为0.68,具有高度一致性。结论 实时荧光PCR法对沙门菌进行血清分型与玻片凝集法鉴定结果一致性高,且检测时间较短,操作简单;对不常见血清型或存在交叉情况时,建议两种方法联合使用,可提高沙门菌血清分型检测效率。