鼠伤寒沙门氏菌porin诱导BALB/c小鼠细胞免疫的研究

目的 探讨鼠伤寒沙门氏菌 porin(STM- porin)诱导 BAL B/ c小鼠细胞免疫的能力。方法 迟发型变态反应(DTH)、IL - 2分别采用足垫肿胀、MTT法 ;利用尼龙毛柱纯化免疫的 BAL B/ c小鼠的 T淋巴细胞通过尾静脉转移到非免疫小鼠 ,再用 5 0 0 L D5 0 的 STM攻击。结果 用 STM- porin免疫的 BAL B/ c小鼠可以产生较高水平的 DTH (3.6± 0 .2 ,P<0 .0 1)和IL - 2 (2 6 .2± 4.9,P<0 .0 1) ;同时 T淋巴细胞被动免疫保护 (42 .9% )也明显高于 L PS组 (0 % ) ,P<0 .0 1。结论 这些结果说明 STM- porin可能诱导 BAL B/

鼠伤寒沙门氏菌porin蛋白免疫原性的研究

用从鼠伤寒沙门氏菌（STM）中提取的微孔蛋白porin免疫BALB／c小鼠，不仅能产生高效价的抗体，还能出现典型的迟发型变态反应（DTH）和白细胞介素－2（IL－2）。以500LD50鼠伤寒沙门氏菌攻击，其保护率为70％，提示STM－porin具有较强的免疫原性。

鼠伤寒沙门氏菌porin诱导BALB/C小鼠迟发性变态反应和T淋巴细胞转移保护的研究

[目的 ] 探讨鼠伤寒沙门氏菌porin(STM -porin)诱导BALB/C小鼠迟发性变态反应和T淋巴细胞转移保护的能力。 [方法 ] 迟发型变态反应 (DTH) ,采用足垫肿胀法 ;利用尼龙毛柱纯化免疫BALB/C小鼠的T淋巴细胞通过尾静脉转移到非免疫小鼠 ,再用 5 0 0LD50 的STM攻击。 [结果 ] 用STM -porin免疫的BABL/C小鼠可以产生明显的DTH ;同时T淋巴细胞被动免疫保护也明显高于LPS组 (P <0 0 1)。 [结论 ] 结果说明STM -porin可能诱导BALB/C小鼠产生较强的DTH和T淋巴细胞免疫保护。

基于微流控芯片的鼠伤寒沙门氏菌免疫磁分离

开发一种用于鼠伤寒沙门氏菌快速分离与富集的免疫磁分离微流控系统,该系统由微流控芯片、微控制器、电磁分离与混合模块组成,具备电磁驱动混合和磁分离功能,能够实现免疫磁珠与鼠伤寒沙门氏菌的快速孵育、分离与富集。在最优条件下,可以在13 min内实现对牛奶样品中浓度范围为2×10^(1)~2×10^(6) CFU/m L鼠伤寒沙门氏菌的快速捕获与分离,捕获率在33.3%~67.5%之间,最低检测限为20 CFU/m L。因此,这种高度集成的免疫磁分离微流控系统能够从复杂食品基质中迅速、准确地富集目标细菌,为食源性致病菌的快速检测提供了有效的解决方案,对于应对食源性疾病引发的公共卫生问题具有重要意义。

鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr)的生物信息学分析及原核表达载体构建

为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析;通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因,将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过SDS-PAGE分析和Western-blot检测表达及纯化后的目的蛋白。结果表明:Bfr由476个氨基酸组成,分子式为C_(1440)H_(2406)N_(476)O_(606)S_(85),相对分子质量为38808.87,理论等电点为5.25;无信号肽和跨膜区,二级结构包含α-螺旋(81.01%)、无规则卷曲(13.19%)、β-折叠(3.16%)和延伸链(1.90%);含有9个线性B淋巴细胞抗原表位和5个T淋巴细胞抗原表位,以及10个磷酸化位点和10个互作蛋白,Bfr和Bfrd蛋白表面匹配良好、结合稳定。试验成功克隆出Bfr基因,其大小约为476 bp,获得大小约为35 ku的高纯度重组蛋白Bfr。说明Bfr蛋白具有良好的反应原性,有可能成为鼠伤寒沙门氏菌的疫苗开发和疾病诊断的候选蛋白。

鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及耐药与毒力基因检测

旨在鉴定广西某鸽场分两批送检的疑似鸽副伤寒病例的病原并对病原菌的耐药性和毒力基因进行检测分析;对从病鸽肝脏组织分离的病原菌进行培养特性观察、生化鉴定、血清型鉴定及16S rRNA测序分析,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测对分离菌株进行耐药性和毒力分析。分离到2株革兰氏阴性短杆菌,结合生化鉴定、血清型鉴定和16S rRNA分析结果,表明2株分离菌株均为鼠伤寒沙门氏菌。药敏试验结果表明,2株鼠伤寒沙门氏菌均对萘啶酸、链霉素和四环素耐药,并呈现多重耐药表型,耐药基因检测结果与耐药表型相符。2株鼠伤寒沙门氏菌中invA等12种毒力基因检测呈阳性。结果表明,成功分离鉴定2株具有多重耐药性并携带大量毒力基因的鸽源鼠伤寒沙门氏菌,可为鸽源鼠伤寒沙门氏菌的防治和研究提供参考。

鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白(porin)的提纯及鉴定

采用超声破碎、TritonX－100溶解、Sephacryl超细S－300和SephadexG－150凝胶过滤提纯了鼠伤寒杆菌的外膜蛋白porin。经检测其中LPS的含量约为0．06％。经SDS—PAGE图谱分析，porin在36KDa位置处显示一条蛋白带；用免疫印迹将OMPs兔抗血清与porin结合，仅在36KDa位置显示一明显的印迹带。

1起ST19型鼠伤寒沙门氏菌引起的食物中毒调查、溯源分析与探讨

目的分析武汉市某区1起食物中毒事件的致病原因,探讨分离菌株之间的分子流行病学关系,为食源性疾病暴发溯源和临床诊治提供参考依据。方法采集食物中毒相关样本20份,提取样本总DNA进行18种食源性致病菌多重PCR检测,同时按时GB4789.4-2016进行病原菌分离鉴定;应用传统玻片凝集法和微量肉汤稀释法对阳性菌株进行血清型分型和耐药性检测,并提取所有菌株核酸进行全基因组测序组装,利用Abricate和SeqSero在线预测每株菌的血清型和耐药基因,然后与传统方法进行比较分析。对分离的9株沙门氏菌分别采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和全基因组序列方法(WGS)递进分析。结果共检出12株沙门氏菌(菌株编号DXH001~DXH012),其中病例肛拭子样本7份、病例粪便样本2份,工作人员肛拭子样本3份。常规血清型分型均为B群鼠伤寒沙门氏菌,与全基因组测序鉴定分型结果一致。12株菌株耐药谱完全一致,对阿米卡星、氨苄西林、头孢唑啉、庆大霉素、哌拉西林、四环素均耐药。基于全基因组预测的氨基糖苷类、头孢菌素、青霉烷、四环素的耐药性与耐药表型结果完全一致。选取DXH001~DXH009开展PFGE和WGS分析。9株鼠伤寒沙门氏菌获得完全一致的PFGE图谱,全基因组序列大小无明显差异,约为4.9 Mbp,MLST型均为ST19。从SNP的最小生成树来看共存在17个变异位点,各菌株间SNP差异数为1~6。全基因组系统发育进化树分析显示,9株沙门氏菌自成一簇,与数据库其他沙门氏菌相差甚远,属于新的克隆分支。同源性最高的来源于江西的GCF_020221795.1参考样本。结论本次食物中毒事件致病源为鼠伤寒沙门氏菌ST19,为同一暴发来源。9株沙门氏菌遗传距离较近,但与数据库中其他沙门氏菌遗传距离较远,自成一簇属于新的克隆分支。本研究中沙门氏菌具有多重耐药性,需加强对多重耐多药菌株的监控及抗菌药物使用的监管。

萌发芝麻提取物改善鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠焦虑和肠道炎症

芝麻是一种在我国被广泛种植的作物,它含有大量的脂肪和蛋白质,还有膳食纤维、芝麻木酚素及γ-氨基丁酸(GABA)等活性营养成分。近几年很多研究指出,GABA和芝麻木酚素中的芝麻酚具有缓解焦虑、抑制炎症的作用,但其在食源性致病菌侵染过程中的具体作用及机制尚未报道。对乙醇浸提萌发芝麻得到的萌发芝麻提取物进行检测,发现与芝麻相比芝麻酚和GABA含量分别提升6倍和4倍。使用鼠伤寒沙门氏菌SL1344侵染小鼠构建动物模型,探究萌发芝麻提取物、芝麻酚和GABA对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的影响,发现萌发芝麻提取物可以减少沙门氏菌感染小鼠的体重降低、改善焦虑行为、减少对小鼠脾脏的侵染、增加感染小鼠结肠绒毛长度和黏蛋白含量、抑制结肠炎症因子、增加粪便中乙酸和丙酸含量。萌发芝麻提取物缓解了沙门氏菌感染小鼠的焦虑,同时对小鼠的肠道具有保护作用。本研究为饮食干预缓解焦虑、保护肠道提供相关理论参考。

鼠伤寒沙门氏菌的感染及治疗研究进展

鼠伤寒沙门氏菌是一种食源性致病菌,严重威胁畜禽养殖业和人类公共卫生安全。其依靠自身致病性岛和Ⅲ型分泌系统,能够在宿主体内存活、繁殖和扩散,从而引发全身感染。传统治疗鼠伤寒沙门氏菌感染的方法是使用抗生素,但多药耐药菌株的出现给其治疗带来了巨大的挑战,因此迫切需要开发新的治疗方法。近年来,小分子疗法、噬菌体疗法、减毒疫苗疗法等逐渐兴起,有望成为治疗感染的有效方法。该文旨在对鼠伤寒沙门氏菌的感染及其治疗措施进行综述。

ε-聚赖氨酸盐酸盐对鼠伤寒沙门氏菌的抑制效果及其在湿米粉中的应用

为了研究ε-聚赖氨酸盐酸盐(ε-Poly-Lysine hydrochloride,ε-PLH)对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.typhimurium)的抑菌作用,测定最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)和绘制生长曲线评估ε-PLH对S.typhimurium的抑菌效果。通过碘化丙啶渗透和胞内大分子泄露实验探究ε-PLH对S.typhimurium细胞膜的作用,并测定胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)和超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性以及ATP酶活性和ATP含量,探究ε-PLH对S.typhimurium氧化应激和能量代谢的影响。研究发现:ε-PLH对S.typhimurium有良好抑菌性,MIC为128μg/mL,能够有效抑制S.typhimurium的生长,经MICε-PLH处理后的S.typhimurium细胞膜完整性被破坏,细胞膜渗透性改变,活性氧过量积累,处理6 h后核酸泄露量和ROS水平分别为对照组的2.45倍和1.99倍,SOD和ATP酶活性以及ATP含量分别比对照组下降29.60%、10.00%和67.63%。ε-PLH作用于细胞膜,造成S.typhimurium氧化损伤,破坏细菌胞内能量平衡,进而影响其正常生命活动导致死亡。此外,将ε-PLH应用于湿米粉,发现ε-PLH对S.typhimurium仍有一定抑菌效果,并且具有良好保鲜效果。综上,ε-PLH具有控制食品中沙门氏菌污染的潜力。

鼠伤寒沙门氏菌CRISPR/Cas12a检测方法的建立与应用

目的建立快速、超灵敏检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法根据鼠伤寒沙门氏菌fliC基因保守片段设计并合成特异性CRISPR RNA(crRNA),并根据crRNA所在的基因序列区域设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)特异性引物,利用RPA技术扩增样本核酸,并对扩增产物进行CRISPR/Cas12a荧光检测。结果该检测方法克服了传统鼠伤寒沙门氏菌检测方法的缺陷,耗时短且具有较高的灵敏度,对鼠伤寒沙门氏菌的检出限低至1copy/μL,与乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希氏菌等常见食源性致病菌核酸检测无交叉反应,且建立的方法在检测人工污染的食品样品时具有较高的灵敏度和准确性。结论本研究建立的检测方法耗时短、灵敏度高,可用于鼠伤寒沙门氏菌的快速检测。

基于CRISPR-Cas12a系统的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法的建立

为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-Cas)系统相结合,首先根据鼠伤寒沙门氏菌的spy基因序列3′末端的保守区设计crRNA及靶标序列扩增引物,根据可视化检测原理设计单链DNA(single-stranded DNA, ssDNA)荧光报告探针;然后对靶标序列进行PCR扩增,将扩增产物加入CRISPR-Cas12a系统,在蓝光下通过肉眼观察是否产生绿色荧光实现对靶标的检测;最后进行特异性试验和灵敏度试验。结果表明:建立的方法仅能检测到鼠伤寒沙门氏菌,检测不到除鼠伤寒沙门氏菌外其他血清型的沙门氏菌及大肠杆菌、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌,能检测到循环数为14个的PCR产物和0.53 copies/μL的重组质粒,灵敏度优于常规PCR方法和实时荧光定量PCR方法。说明本试验建立的方法可以实现鼠伤寒沙门氏菌的可视化检测,具有特异性强、灵敏度高的特点。

鼠伤寒沙门氏菌SptP蛋白与RAW264.7细胞互作蛋白的筛选及分析

为了确定宿主与鼠伤寒沙门氏菌关键毒力蛋白SptP相互作用的蛋白,为鼠伤寒沙门氏菌的防治提供理论依据。通过诱导可溶性His-SptP融合蛋白表达,进行His pull-down试验筛选RAW264.7与SptP互作的蛋白,并经SDS-PAGE及质谱验证,最后通过生物信息学工具分析潜在互作蛋白。结果表明,可溶性His-SptP成功诱导表达;经His pull-down及质谱分析,鉴定到SptP与RAW264.7的153种潜在互作蛋白。另根据GO富集分析,这些互作蛋白主要集中于细胞构造、细胞内部结构和细胞器等,大部分为结合(binding)蛋白质,主要参与细胞过程、代谢过程和有机物代谢过程等。KEGG通路富集结果表明,互作的蛋白质主要参与聚集的通路为细菌对上皮细胞的侵袭、肌动蛋白细胞骨架的调节及沙门氏菌感染等。综上所述,在RAW264.7细胞中筛选到153个与SptP潜在互作的蛋白,这些蛋白在细菌侵入过程中发挥着重要的作用,为SptP在入侵宿主细胞过程中的具体的作用机制的研究提供了一定的理论依据。

抗鼠伤寒沙门氏菌的乳酸菌细菌素生物学特性及其抑菌机制初步研究

试验旨在研究拮抗鼠伤寒沙门氏菌的新型乳酸菌细菌素生物学特性及其抑菌机制。采用全基因组测序分析产细菌素的乳酸菌基因组信息,琼脂扩散法和透析法测定细菌素抑菌活性及分子量范围,有机酸、过氧化氢排除试验和蛋白酶敏感试验确定细菌素性质,通过设置pH值与温度梯度测定乳酸菌生长曲线与细菌素抑菌曲线,研究细菌素生物学特性,扫描电子显微镜观察初步探索细菌素抑菌机制。结果显示,试验筛选出的1株具有抑菌活性的乳酸菌PG-9,经分子生物学鉴定为发酵黏液乳杆菌。全基因组大小为1985177 bp,包含1947个编码基因。其产细菌素PG-9B对鼠伤寒沙门氏菌抑菌活性良好,分子量小于1 kDa,排除有机酸、过氧化氢影响后发现其对多种蛋白酶敏感,在pH值3.0~7.0、-20~121℃范围内均保留了较高的抑菌活性。扫描电镜显示,发酵黏液乳杆菌细菌素PG-9B通过破坏鼠伤寒沙门氏菌细胞表面形态而抑制和杀死细胞。研究表明,发酵黏液乳杆菌细菌素PG-9B具有良好的生物学特性和抑菌活性,在饲料工业中可作为潜在的替抗添加剂防治鼠伤寒沙门氏菌。

鸡伤寒沙门氏菌生物学特性检验

通过对河北省某鸡场由伤寒沙门氏菌引起的病死鸡的初步调查研究,核心在于对目标对象实施全面的临床观察、病理变化分析、病原菌的分离鉴定及其理化特性评估,旨在明确感染性疾病的独特表现及对应的病原菌种类。实验过程中,对新近因病死亡的鸡只进行了详尽的体表检查及解剖后的病理分析。同时,利用病变的肝脏、脾脏等组织作为样本,进行了细菌的分离与纯化培养。随后,对这些分离出的细菌进行了包括形态特征、理化性质在内的多方面鉴定。为了验证其致病性,将具有代表性的菌株接种至健康鸡群,并观察其引发的疾病效应。此外,还采用琼脂扩散法(K-B法)对8种细菌进行了针对12种抗菌药物的敏感性测试。研究结果显示,所鉴定的伤寒沙门氏菌为革兰氏阴性菌,形态上呈现为无芽孢、两端略圆的短杆菌。该菌在普通琼脂培养基上均能良好生长,既可需氧也可兼性厌氧,且能在10℃至42℃的温度范围内存活。在普通琼脂平板上培养24至48小时后,会形成无色半透明、表面光洁、湿润且凸起的菌落。该菌对健康鸡有很强的致病性。并判定出菌株对阿米卡星的敏感率最高,为94.4%,其次为环丙沙星。

鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的PCR-RFLP分子鉴别

根据鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌fliC基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约600bp的产物,用Hin6I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌的生物型。利用该技术对6株鸡白痢沙门氏菌标准株及2株鸡伤寒沙门氏菌标准株进行分子鉴别,得到的结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行。在此基础上对我国不同地区、不同年代的191株鸡沙门氏菌进行分子鉴别,191株中有185株分离株符合鸡白痢沙门氏菌的RFLP模式,6株分离株符合鸡伤寒沙门氏菌的RFLP模式,其中有176株PCR-RFLP鉴定结果与生化特性符合率达100%,另有15株根据生化特性不能鉴别。

一株猪源鼠伤寒沙门氏菌的耐药性鉴定及其消除

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着质粒的消除而被消除。所鉴定的耐药基因有blaTEM、blaOXA-1、cat1、tet(B)、aacC2、aadA8b、dhfrXⅡ和sul1等。喹诺酮类药物的靶基因gyrA与parC位于染色体上。GyrA在耐药决定区第87位氨基酸突变(N78D),导致了喹诺酮类药物的耐药性逆转。敏感菌中扩增不到质粒毒力基因spv与rck。耐药性消除后的菌株17S1对小鼠的毒力降低(LD50增加10倍),在小鼠体内的增长与散速度也显著降低(P<0.05)。以上证据表明,鼠伤寒沙门氏菌的多重耐药性主要由质粒决定,研究开发新型质粒消除剂将对克服鼠伤寒沙门氏菌多重耐药性具有重要意义。

鸡体内减毒鼠伤寒沙门氏菌的繁殖和免疫反应

初步研究了cya和crp双基因突变减毒鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium )在鸡体内的繁殖和免疫反应。 1、4或 7日龄肉鸡分别经口感染 10 8或 10 9CFU减毒S .typhimuriumX4 5 5 0 ,接种后 3～ 4周鸡体内特异性细胞和体液免疫达到最高峰。 4日龄口服 10 9CFU组免疫效果最佳 ,但 1日龄高剂量组表现增重降低及免疫抑制。 2 8日龄每鸡口服攻击 10 10 CFU强毒S .typhimurium 5 0 333,各免疫组保护率为 10 0 %。同时免疫鸡还能全部或部分阻止沙门氏菌在肝脏和脾脏的繁殖。接种后减毒S .typhimurium在泄殖腔的检出时间为 4周左右。

实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌

目的建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因,设计引物及Taqman探针,利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对照菌株中检测出全部的11株鼠伤寒沙门氏菌。以鼠伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.998,扩增效率90%,最低检测浓度300cfu/mL。对已接种鼠伤寒沙门氏菌的4种模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致。结论此方法特异、灵敏、准确,适于食品中鼠伤寒沙门氏菌的检测。