不同防褐化措施对苏丹草愈伤诱导以及抗褐化的效果研究

苏丹草组织材料在组织培养过程中会产生酚类物质,影响愈伤组织的生长,甚至导致愈伤组织死亡。本试验以苏丹草幼穗为外植体,探讨了不同防褐化措施对苏丹草愈伤诱导的影响及抗褐化的效果防止。结果表明,活性炭、VC、PVP和AgNO3均能不同程度地提高愈伤诱导率和降低褐化率。其中,培养基中低浓度的蔗糖(10～20g/L)能降低褐化率,但同时也降低了愈伤诱导率,而高浓度的蔗糖(40～50 g/L)能提高愈伤诱导率但同时也增加了褐化率。柠檬酸能提高愈伤诱导率但不能防止褐化。当活性炭的添加量为0.15 g/L时,愈伤的诱导及褐化防止效果最好。

基本培养基对苎麻不同外植体愈伤诱导及分化的影响

采用7种基本培养基对苎麻4种外植体愈伤诱导及分化的效应进行了研究,结果表明,MS、MSB、LS、B5、N6 5种基本培养基对苎麻愈伤诱导效果较好,出愈率为100％,愈伤量较大。Nitsch和White培养基作用效果差。不同外植体对基本培养基反应不一致,下胚轴脱分化要求较高有机成分,子叶是最易脱分化和再分化的外植体,叶对培养基中有机成分要求不高,茎要求培养基营养成分齐全,有机成分较高利于茎愈伤分化成苗。较高的总N、P、K含量对苎麻的脱分化和分化是至关重要的,而Cu、Mo、Co等微量成分并非必需。

水稻胚性愈伤诱导及其遗传转化的几个技术参数研究

以日本晴成熟种子及幼嫩种子为材料诱导形成胚性愈伤组织,经农杆菌介导将水稻隐花色素基因的4个RNAi和2个反义RNA表达载体分别转化日本晴愈伤组织,再经抗性筛选和分化培养诱导形成植株,经分子检测筛选出阳性转基因苗。对胚性愈伤诱导率、抗性愈伤率、分化出苗率及转化率进行统计分析。结果表明,成熟种子、新鲜成熟种子及幼嫩种子愈伤诱导率均大于81%,平均为86.67%,其中以新鲜成熟种子愈伤诱导率最高,达96.89%;抗性愈伤率成熟胚为22.21%-40.71%,平均为28.49%,幼胚为36.79%-43.21%,平均为40%,幼胚的抗性愈伤率高于成熟胚;分化出苗率成熟胚为59.29%-80.43%,平均为71.59%,幼胚为63.16%-72.73%,平均67.95%,幼胚与成熟胚差异不明显;转化率（Gus检测阳性率）成熟胚为43.07%-81.08%,平均61.59%,幼胚为58.33%-76.67%,平均67.50%,幼胚转化率稍高于成熟胚。

培养基添加物对马铃薯花药褐化及愈伤诱导的影响

试验以Vangal、波C、讷16、春薯4号和内薯7号5个马铃薯品种(系)为材料,研究不同培养基添加物硝酸银、活性炭、马铃薯提取液对马铃薯花药培养的褐化率和愈伤诱导率的影响。结果表明,培养基中加入20mg·L-1硝酸银、0.5g·L-1活性炭和50g·L-1马铃薯提取液能够提高马铃薯花药愈伤诱导率,同时褐化率明显降低。

4个桉树无性系愈伤诱导和分化

桉树（Eucalyptus L＇Hérit.）是世界三大树种之一,随着生物技术的发展,桉树转基因研究正以前所未有的速度发展,而不同的种、无性系胚性愈伤诱导的难易和植株再生能力的强弱直接影响转基因工程实施的进程。尾巨桉（E.urophylla S.T.Blake×E.grandis W.Hill ex Maiden）无性系DH3229、

金康卡百合离体培养和愈伤诱导的初步研究

【目的】百合组培快繁技术途径。【方法】以金康卡百合的子房、花柱、花丝为外植体,研究不同灭菌时间、不同培养基对外植体组织培养过程的影响。【结果】在愈伤诱导培养基上培养两周左右外植体出现膨大,培养20 d左右,即有淡绿色愈伤组织出现;不同的NAA和BA浓度对愈伤诱导影响较大,激素浓度为0.5 mg/LNAA和1.5 mg/L BA的MS培养基对促进子房膨大和愈伤诱导效果最佳。【结论】不同的灭菌时间对外植体污染率的影响不同,均随着灭菌时间的延长呈显著下降的趋势。金康卡百合的子房、花柱、花丝形成愈伤组织能力有一定差异,用子房作外植体比花柱、花丝更易产生愈伤组织且存活率较高。

甘蔗不同叶位幼叶鞘内源激素与愈伤诱导率关系研究

对三个甘蔗品种不同叶位幼叶鞘进行内源激素的测定、分析 ,并对其进行愈伤诱导。结果表明 ,甘蔗不同叶位幼叶鞘内的 IAA、CTK、GA1 +3 呈单峰曲线变化 ,处于中间叶位的 - 3叶 ,- 4叶含量最高 ,其次为心叶 ,外围幼叶叶鞘含量最低 ,叶位间含量差异达显著水平 :ABA变化较为平稳 ,叶位间含量差异不显著。内源 IAA、CTK、GA1 +3 含量高的中间叶位 ,愈伤诱导率也高 ,心叶诱导率次之 ,外围幼叶鞘诱导率最低。

甘露糖对小麦不同外植体愈伤诱导及生长的影响

为了给以磷酸甘露糖异构酶基因作为筛选标记的小麦遗传转化提供资料,以小麦栽培品种扬麦158和华麦13的茎尖、叶基、成熟胚为外植体,研究了不同甘露糖浓度对这些外植体愈伤组织诱导和生长培养的影响。结果表明,10 g/L的甘露糖使茎尖的出苗和生根受到明显抑制,而茎尖幼苗对甘露糖的耐受力较强,15 g/L甘露糖才能有效抑制幼苗生长。叶基在5 g/L甘露糖时,其愈伤组织诱导率降低55%,而成熟胚在10或15 g/L甘露糖时的愈伤组织诱导率与叶基在5 g/L甘露糖时相当。这些结果说明,在以小麦叶基、茎尖和成熟胚为外植体的PMI/甘露糖筛选中,可分别以5、101、5 g/L甘露糖作为筛选压。另外,培养时间不同的外植体或培养物对甘露糖敏感性不同,在培养早期阶段筛选时,可选较低的甘露糖筛选压,而在后期培养阶段进行筛选时,可适当提高筛选压。

杨树因伤诱导型启动子的克隆及功能分析

机械损伤或病虫害侵扰引起植物一系列防御相关基因的激活，其中一些是因伤诱导表达的．Ｂｒａｄｓｈａｗ等１９８９年报道了杨树Ｗｉｎ３基因家族中的一员，其编码产物类似于白薯和豆类胰蛋白酶抑制剂，并且是因伤诱导表达的。为了更全面的了解这一基因启动子在因伤介导表达中的作用，探讨其在基因工程用于控制外源基因表达的可能性，本文分别从欧洲黑杨（Ｐ．ｎｉｇｒａ）和美洲黑杨（Ｐ．ｄｅｌｔｏｉｄｅｓ）中扩增出ｗｉｎ３基因启动子ＷＩＮＰ（７０５ｂｐ）和ＷＩＤＰ（７９１ｂｐ）．这两个启动子与来自大肠杆菌的ＧＵＳ基因融合，通过根癌农杆菌Ｔｉ质粒转化系统引入烟草中．证实了ＷＩＮＰ和ＷＩＤＰ控制的ＧＵＳ基因的表达不仅在损伤部位，而且具有系统的因伤诱导效应．对８株转基因烟草的组织化学分析表明，其表达模式与以前的报道一致。无论是在受损伤组织还是完整组织中，ＷＩＮＰ的伤诱导活性总比ＷＩＤＰ高。这两个启动子需要进一步改造以增强其活性。

不同大麦品种成熟胚愈伤诱导与分化研究

为了筛选不受生长季节限制的大麦遗传转化受体,分析、比较了我国15个大麦品种成熟胚在1种诱导培养基和3种分化培养基上的愈伤诱导和分化率。结果表明,大麦品种间成熟胚愈伤诱导率差异非常显著,早熟3号的诱导率高达98.7%,而扬农啤2号和鄂大麦9号则低于10.0%。成熟胚在形成愈伤组织过程中,伴随胚发芽现象,但愈伤诱导与胚发芽之间没有相关性;品种间愈伤组织分化率也差异显著,早熟3号的分化率为43.3%,而其它品种的分化率均在10.0%以下;不同分化培养基的分化效率不同,在M1培养基上的平均分化率较高。

甘露醇预处理对马铃薯花药愈伤诱导率和褐化率的影响

采用西北果和鲁引1号马铃薯品种为试验材料,研究甘露醇预处理不同时间对马铃薯花药褐化率及愈伤诱导率的影响。结果表明:接种前花药用40 g.L-1的甘露醇溶液预处理,褐化率明显降低。但随着处理时间的增加,褐化率变化不大,愈伤诱导率则先升高后降低。不同的材料达到诱导率最高值和褐化率最低值的预处理天数为2 d。

烟草伤诱导型过氧化物酶基因(tpoxN1)启动子的克隆及分析

利用GenomeWalker的方法获得了烟草伤诱导过氧化物酶基因(tpoxN1)的5'调控序列,序列分析表明,烟草的tpoxN1基因的转录起始位点(tspA)的保守序列5'TCAATCA与其它植物基因非常一致,转录从tsp下游79bp处开始。在邻近5'区域,发现下列5个真核生物顺式调控元件:在-28bp处存在TATAbox序列(TATAAATATGT);在-66bp处具有TCCAAT序列,与众多高等真核生物的启动子的‘CAAT’相似;在-204,-749处发现有TCA-like序列;在-840处存在GC-box;在-1005处存在CCAAT-box。

不同消毒方式对假俭草种子愈伤诱导的影响

为确定假俭草(Eremochloa ophiuroides)再生体系中种子外植体的消毒方式,经过预备试验后共设计A,B,C,D共4组2系列8种消毒方式。A1:3.5%次氯酸钠消毒25min,A2:浓硫酸灼烧30s+3.5%次氯酸钠消毒20min,B1:7%次氯酸钠消毒20min,B2:浓硫酸灼烧30s+7%次氯酸钠消毒20min,C1:0.05%升汞消毒20min,C2:浓硫酸灼烧30s+0.05%升汞消毒15min,D1:0.1%升汞消毒15min,D2:浓硫酸灼烧30s+0.1%升汞消毒10min。结果表明:A2的愈伤诱导效果最好,达到52%;D1的愈伤诱导率最低,仅17.33%,其他处理的愈伤诱导率介于二者之间。发现浓硫酸灼烧假俭草种子30s,可显著提高出愈率;试验证实消毒剂次氯酸钠比升汞有利于假俭草种子的愈伤诱导。

温度对马铃薯花药愈伤诱导率的影响

采用讷16、克新16、克新13和西北果4个马铃薯品种或品系为试验材料,研究不同温度处理对马铃薯花药愈伤组织形成的影响。研究表明,接种前花蕾经2～8d、4℃低温预处理有利于花药愈伤组织的形成,其中以2～4d处理的效果最好,接种后经24～48h、32℃热激处理有利于花药愈伤组织的形成。试验还对低温预处理和热激处理相配合的效果进行了比较,发现两者配合处理的效果好于单独处理,单独热激处理的效果好于单独低温预处理。

斑茅成熟种子愈伤诱导及再生体系的建立

为建立斑茅[Erianthus arundinaceum(Retz.)Jeswiet.]的组织培养再生体系,以斑茅的成熟种子为材料,对愈伤组织诱导、芽分化和根分化中的植物生长调节剂配比及浓度进行了筛选。结果表明,(1)MS中添加0.1~0.2 mg/L的6-BA与1.0~3.0 mg/L的2,4-D愈伤诱导率最高;MS中添加0.5 mg/L的2,4-D时胚性愈伤诱导率达54.29%。(2)MS中添加0.5 mg/L的6-BA与1~2 mg/L的KT更易促进芽的分化,芽分化率71.11%。(3)1/2MS中添加20 g/L的蔗糖促进生根效果最好,根分化率96.97%。

宁夏枸杞新优品系花药愈伤诱导的影响因素

研究了低温预处理、光照、取材时间等因素对宁夏枸杞花药愈伤诱导的影响。结果表明:盛花期为枸杞花药培养的最佳取样时期;4℃低温预处理3d时,枸杞花药愈伤诱导效果最佳;黑暗条件有利于枸杞花药愈伤诱导;不同基因型宁夏枸杞花药愈伤诱导率有极显著差异。

糜子愈伤诱导及再分化最适条件研究

研究旨在应用组织培养技术探究愈伤诱导及再分化的最适条件,以期为糜子建立遗传转化体系奠定基础。采用5个糜子品种研究愈伤诱导及再分化的最适条件。利用植物激素2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)诱导茎尖愈伤组织,筛选出发芽率高、愈伤组织诱导率高、染菌率低的品种,并对诱导愈伤最适激素浓度及配比进行了鉴定。结果显示,‘冀黍2号’出芽率高、愈伤组织诱导率高、染菌率低,适宜进行组织培养;2,4-D对‘冀黍2号’愈伤诱导效果最好,最适浓度为2.5 mg/L,诱导率达86.67%,淡黄色块状,结构紧密,质地较硬,继代培养后形成的胚性愈伤组织状态更好。再分化过程中,2.5 mg/L 2,4-D+3.5 mg/L TDZ时,出现明显的嫩芽。该试验获得‘冀黍2号’愈伤诱导及再分化的最适条件,可为糜子再生体系的构建提供参考。

甜樱桃巨红13-38花药发育时期鉴定及愈伤诱导的初步研究

以甜樱桃巨红13-38为试材,对其花药发育时期和不同时期愈伤的诱导进行了研究.结果表明：小孢子母细胞越冬前已经形成,一直持续到次年的2～3月份,3月中旬开始减数分裂,3月末形成四分体,4月初形成单核期小孢子,4月中旬形成成熟花粉;花药单核期时诱导的愈伤状态最好为绿色,较致密,愈伤诱导率是各时期中最高的,为4.828%.

生长调节剂和外植体对油菜离体培养愈伤诱导的影响

以双低优质油菜品种中双 7号的无菌苗为材料 ,探索了以子叶、下胚轴和幼根为外植体 ,及不同生长调节剂组合对愈伤诱导的影响作用。结果表明 ,生长调节剂是愈伤诱导成功的关键因子 ,2 ,4-D是诱导愈伤所必需的 ,以MS培养基含 1mg·L- 1 2 ,4-D与 2mg·L- 1 6 -BA配比为佳 ;同时子叶优于下胚轴和幼根作为外植体进行愈伤诱导 ,可获得出愈率高、增殖快。

激素和外植体对黄芩短枝生根和愈伤诱导的影响

目的研究不同激素组合和外植体对黄芩短枝生根和愈伤诱导的影响，筛选出最佳的短枝生根和愈伤诱导及继代培养基。方法以1／2MS为基本培养基，添加不同浓度的萘乙酸（NAA），配制成5种短枝生根培养基；以MS为基本培养基，添加不同浓度BA和NAA或2，4-D，配制成5种培养基。将剪下的枝条用清水冲洗2～3h，再用2％次氯酸钠溶液浸泡15min，最后用无菌水冲洗4～5次，将带1个腋芽或不带腋芽的茎段和叶片接种到培养基中。结果1／2MS培养基是最佳的1年生和2年生短枝生长和生根培养基，生根率达100％，腋芽的增殖倍数高达3．1和3．4；诱导愈伤组织的最适培养基及愈伤最佳的继代培养基均为MS＋BA2．0mg／L＋NAA0．1mg／L。结论高浓度的生长素对黄芩短枝生长势和生根有抑制作用，高浓度BA配比较低浓度NAA适于愈伤诱导，1年生和2年生短枝生根时对生长素的反应有一定差异。